联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖和形态的影响

目的:观察体外联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞形态和增殖的影响,为研究成纤维细胞和平滑肌细胞生物学特性和相互关系以及体外构建含此两种细胞的组织工程皮肤提供理论和实践基础。方法:在体外分别分离培养成纤维细胞和平滑肌细胞并常规传代培养。模拟组织工程皮肤的结构及成纤维细胞和平滑肌细胞间的相互影响途径,按照不同比例(平滑肌细胞:成纤维细胞=1:1,1:2,1:3)建立以胶原凝胶为基质的成纤维细胞与平滑肌细胞联合培养模型。应用荧光标记、组织学观察和MTT法对平滑肌细胞的形态和代谢进行研究。结果:联合培养模型法可以有效地建立起成纤维细胞和平滑肌细胞的相互影响模式。1:1组的成纤维细胞对联合培养的平滑肌细胞增殖有促进作用,1:3组的促增殖作用则不明显。结论:1:1联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖有促进作用,对它们体外培养和扩增以及相互关系的研究对阐明这两种细胞组合作为真皮替代物种子细胞具有重要的意义。     

改良消蚀法制备脱细胞真皮基质微粒及其生物相容性评价

目的:利用改良消蚀法制备一种新型脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)微粒,并对其相容性加以评价,为组织工程微粒皮肤的制备奠定研究基础。方法:应用机械法切除猪真皮乳头层,结合消蚀法和冻融法除去网状真皮中的所有细胞制备成ADM,将ADM搅碎成颗粒状,对其做细胞毒性实验和皮下埋藏实验检验其相容性。结果:该方法制备的ADM微粒韧性好,细胞去除完全,胶原三维稍松散但结构完整,无基底膜和乳头层。细胞毒性实验显示其基本无毒性,成纤维细胞在ADM微粒上增殖良好,皮下埋藏试验未见明显排异反应,ADM微粒能诱导血管和成纤维细胞长入。结论:用改良消蚀法制备的ADM微粒抗原性低、相容性好,可以作为组织工程微粒皮肤的支架和填充材料。     

间充质干细胞用于慢性创面治疗的作用途径及其相关机制

<正>间充质干细胞(MSCs)是一类存在于大多数成体器官中的类成纤维细胞群,在特定条件下能够向不同的谱系细胞分化。Falanga等[1]将MSCs与造血细胞共同培养,发现MSCs可以促进造血干细胞的增殖,提示MSCs具有分泌生物活性因子并调节其他细胞功能的能力。MSCs在进入创面或是其他损伤组织时会被激活,起到促进创伤愈合和改善局部缺血的作用。目前MSCs作用于创面的机制尚未完全清楚,但MSCs在调节免疫应答和免疫排斥反应方面的功能,以及在促     

浅刺针法对脑梗塞大鼠血浆NOS、ET_(-1)的影响

目的:通过观察浅刺内关、公孙对脑梗塞大鼠血浆NOS和ET-1含量的影响,探讨浅刺对脑梗塞大鼠作用机制。方法:将240只Wistar大鼠随机分造模组和空白组,采用血栓栓塞法建立脑梗塞大鼠模型,后将造模成功的180只大鼠随机分为浅刺针法组(组)、常规针刺组(组)、模型对照组(组),空白组为正常对照组(组)。比较各组大鼠在各时间点的神经体征评分、神经细胞凋亡计数、内皮素1和一氧化氮合酶的表达等指标。其中神经体征评分参照Berdson评分分级法,内皮素1采用非平衡法的测定,由自动Y计数器直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。一氧化氮合酶采用硝酸还原酶法,采用721分光光度计测定。结果:正常对照组3个时间点的神经体征评分,神经细胞凋亡计数,内皮素1和一氧化氮合酶表达程度均较其他3组低(P<0.01)。其他3组中,浅刺针法组及常规针刺组的3个时间点的神经体征评分,神经细胞凋亡计数,内皮素1和一氧化氮合酶的表达程度均较模型对照组低(P<0.01)。而浅刺针法组与常规针刺组比较则3个时间点的神经体征评分,神经细胞凋亡计数,内皮素1和一氧化氮合酶的表达程度均较低(P<0.01)。结论:脑梗塞模型鼠的神经体征评分、神经细胞凋亡计数、内皮素1和一氧化氮合酶的表达程度较正常鼠高。经针刺内关、公孙治疗,尤其是浅刺治疗后大鼠的神经体征评分,神经细胞凋亡计数,内皮素1和一氧化氮合酶的表达程度明显降低,且随着浅刺疗程的增长,降低程度增大。     

组织工程皮肤修复皮肤缺损成功率与手术方法的相关性

背景：皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植，需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床，标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的：通过组织工程皮肤修复皮肤缺损，分析手术方法与愈合率的关系，为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。设计：随机对照观察。单位：解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科，组织病理学教研室，组织工程实验中心。材料：实验于2003-10／2004-03在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织工程实验中心完成。选用2．5-3月龄健康清洁级约克猪6只，随机分为3组：组织工程全层组、组织工程真皮＋自体表皮组、自体移植组，2只／组。每只猪制作8个直径50mm的圆形皮肤缺损创面，16个创面／组，共48个创面。方法：①制备组织工程全层皮肤和组织工程真皮。②组织工程全层组：沿画线自脂肪层切除全厚皮肤，彻底止血，以湿生理盐水纱布覆盖创面备用，此时取出组织工程全层皮肤并于组织工程皮肤上均匀打引流孔以利引流，用生理盐水冲去组织工程皮肤表面的培养液，使表皮层向上平铺于创面上，注意与创面间不能产生气泡。其上分别覆盖单层油纱布，生理盐水纱布、无菌干纱布、弹性海绵垫，每层厚度约为3～5mm，常规打包包扎，最后再以弹性绷带加压包扎。③组织工程真皮＋自体表皮组：以同样方法切除全厚皮肤，将取下的皮肤用取皮鼓反取厚约0．1～0．2mm的刃厚表皮泡于生理盐水中备用。以同样方法取出处理组织工程真皮后覆盖于创面上，即刻覆盖自体刃厚表皮。其余处理同组织工程全层组。④自体移植组：切除全厚皮肤并去除脂肪组织后，回植于自体创面，覆盖各层敷料，加压包扎。⑤每次换药打开创面时，移植皮肤无感染、坏死、脱落且直径不小于3mm即为成活，否则即为失败。于术后4周统计各组创面成活率。主要观察指标：术后4周各组移植皮肤成活情况。结果：术后4周时，组织工程全层组移植皮肤成活率75％，组织工程真皮＋自体表皮组移植皮肤成活率87％，自体移植组移植皮肤成活率94％，3组比较基本相似（χ^2=2．34，P〉0．05）。结论：组织工程皮肤移植修复皮肤缺损的效果与自体表皮移植接近，证明组织工程皮肤修复皮肤缺损是可行的。     

改良胸腰椎前路手术径路及内固定技术治疗胸腰椎爆裂骨折的临床观察

目的观察改良胸腰椎前路手术径路及内固定技术治疗胸腰椎爆裂骨折的效果。方法胸腰椎爆裂骨折患者52例,其中新鲜骨折47例,陈旧骨折5例,均采用倒“L”形手术径路,电凝烧结或结扎椎体节段血管,切除伤椎相邻上、下椎间盘,保留大部分软骨终板后置放椎体螺钉,取髂骨块,再切除伤椎行椎管减压,撑开椎间隙行髂骨块植骨,置放钢板矫形固定。结果其中新鲜骨折47例,术中出血300—700ml,平均490ml,手术时间120—210min,平均156min;陈旧性骨折5例,术中出血800—1100ml,平均1050ml,手术时间210—240min,平均217min。48例患者术后随访9～18个月,平均13个月,脊柱序列均恢复正常,无植骨块塌陷及高度丢失现象,无内固定失败;脊髓神经功能均有不同程度的恢复。结论改良胸腰椎前路手术径路及内固定技术可明显减少术中出血,缩短手术时间,减轻手术创伤,降低了术后并发症的发生率。     

皮肤压力溃疡动物模型的建立

目的 建立一种皮肤压力溃疡的动物模型，为皮肤压力溃疡的病理、病理生理学以及修复治疗提供研究依据。方法 采用自制的压伤装置，通过控制一定受压面积(20cm^2)的压力(3、5、10kg)及时间(3、6、12、24h)模拟皮肤组织不同程度的压力溃疡创面，并考察创面愈合情况及收缩率。结果 压力5kg(压强25kPa)、时间12h条件下，在受压面积(20cm^2)上形成的创面，比相同时间下3kg压力产生的创面更接近临床Ⅲ度溃疡的创面，而增加压力(10kg)及时间(24h)对创面的形成无显著影响。结论 该皮肤压力溃疡动物模型能部分的模拟营养性溃疡的临床及病理表现，可重复性及稳定性良好，可应用于压力溃疡的研究。     

血管内皮生长因子受体1及其可溶性受体亚型在血管新生中的作用

血管新生是指从原有的血管内皮细胞增殖、游走,形成新的血管网,并在原来存在的血管结构上长出新血管的生物学过程。血管新生参与体内许多重要生理和病理进程的发生发展。正常情况下血管新生仅发生在胚胎发育期（胚胎发育早期涉及血管发生,即血管从无到有的过程）,创伤愈合期和女性的生理周期等。病理条件下会出现异常的血管新生,如糖尿病血管病变、肿瘤等均伴随异常的血管新生。在生物体内,血管新生需经过多步精细调控历程,研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及其受体(VEGFR)所介导的信号级联通路是其中关键性的调节途径,对生理和病理性血管新生均有重要调节作用[1]。对VEGF/VEGFR信号传导通路作用机制的深入了解,有助于相关疾病的研究和新药的研发。其中有关血管内皮生长因子受体1(VRGFR?1,Flt?1)及其可溶性受体亚型(sFlt?1)的研究对于研究血管新生的病理生理机制十分必要,也是目前研究的热点和难点。     

脐带间充质干细胞对重度烧伤大鼠肾脏保护作用的研究

目的：观察脐带间充质干细胞（UCMSCs）移植对大鼠严重烧伤后肾脏损伤的影响,为干细胞应用于烧伤后的脏器保护研究奠定基础。方法：获取并分离培养孕大鼠UCMSCs并用流式细胞技术鉴定细胞表面抗原。48只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（n=12）、生理盐水组（n=12）、乌司他丁组（n=12）和UCMSCs组（n=12）。正常对照组不作任何处理,立即活杀取材;其余3组制备20％TBSAIII度烧伤模型（98℃,12s）,于伤后48h分别静脉注射生理盐水0．1ml／g（生理盐水组）、乌司他丁1．6×105U／kg（乌司他丁组）和UCMSCs106／k（uCMSCs组）,于给药后7、14d观察大鼠肾脏组织病理学,免疫组化法观察组织凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并进行血尿素氮（BUN）、肌酐（cr）水平的测定。结果：烧伤后7、14d的组织病理学观察显示,干细胞移植后的大鼠烧伤后肾脏组织充血、肿胀等病理学改变较乌司他丁组及生理盐水组有所减轻,随时间延长减轻更加明显;免疫组化观察显示UCMSCs组伤后7d和14d肾组织中Bcl-2的表达较乌司他丁组和生理盐水组明显增多,表明肾组织抗凋亡能力增强。大鼠烧伤后BUN和Cr均较正常对照组显著升高。乌司他丁治疗组除14dBUN较生理盐水组升高外,其余时间BUN和Cr均明显下降。UCMSCs组伤后7和14d两肾功能指标均明显下降,与生理盐水组和乌司他丁组比较差异均有显著性（P〈0．05）,显示干细胞治疗对肾功能有明显改善作用。结论：UC—MSCs移植可有效减轻重度烧伤后大鼠‘肾脏组织的损伤并改善肾脏功能。