人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率，并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平，观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97．6％、72．6％和80.3％。两冻融组与新鲜组相比明显下降俨〈0．001），而在两冻融组间差异并无统计学意义（P=0．237）。在体外组织培养期间，两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的，可适应不同需要。     

玻璃化冷冻法保存人类胚胎干细胞

[目的]探讨玻璃化冷冻方法保存人类胚胎干细胞的效率.[方法]冷冻保存人类胚胎干细胞,按冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组和慢速冷冻组,比较两组解冻后人类胚胎干细胞的细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并比较分析解冻后的与未经冷冻的胚胎干细胞的生长、分化情况,鉴定解冻后人类胚胎干细胞的全能性.[结果]玻璃化冷冻组与慢速冷冻组解冻后的细胞复苏率分别为81.9%和22.8%(P＜0.001).慢速冷冻组解冻后克隆生长较玻璃化冷冻组缓慢且更易分化.两组未分化的胚胎干细胞继续培养的生长与分化情况一致.玻璃化冷冻组解冻后第6代人类胚胎干细胞染色体核型正常,SSEA-4、SSEA-3阳性,表达OCT-4基因.人类胚胎干细胞来源的畸胎瘤包含了来源于3个胚层的组织细胞.[结论]玻璃化冷冻是保存人类胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和全能性.     

小鼠胚胎成纤维细胞与人胚共培养对胚胎体外发育影响

[目的]评价小鼠胚胎成纤维细胞共培养是否促进d3质量差的人胚胎的囊胚发育。[方法]使用小鼠胚胎成纤维细胞与受精后第3天(d 3)质量差的胚胎共培养,对照组使用Quins囊胚培养液进行序贯培养,观察各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数。[结果]d5共培养组12.3％胚胎开始出现早期囊腔化,d 6 7.4％胚胎出现囊腔扩张,4.2％的胚胎d 7孵出。而序贯培养组d 5仅4.2％胚胎开始早期囊腔化,d 6仅1.5％胚胎出现囊腔扩张,d 7仅0.6％的胚胎孵出,表明共培养组囊胚形成率更高,囊胚发育速度快于对照组。此外,共培养组囊胚总细胞数更多,d 6扩张囊胚总细胞数为62.6±13.4,而未扩张囊胚总细胞数26.1±8.9,分别高于序贯培养组。[结论]小鼠胚胎成纤维细胞共培养与 Quins囊胚培养液序贯培养比较,前者更能促进d 3质量差的人胚胎体外发育。     

人类胚胎干细胞的研究近况

人类胚胎于细胞（human embryonic stemcell，hES）研究始于1998年，它已成为继人类基因组计划后生命科学中最活跃的研究领域。利用hES细胞修复或替代因各种因素所造成的人体组织器官缺损和功能障碍是人类疾病治疗模式划时代的革新。用于细胞替代治疗的hES细胞必须具备安全性、有效性、免疫豁免性三大特点，因而很多研究集中于以下课题：（1）纯化hES细胞培养环境，避免动物源性物质的污染。（2）hES细胞诱导分化为各种成体细胞及其前体细胞以及移植。（3）体细胞核移植与hES细胞系的建立。（4）hES细胞与基因治疗。     

同杜叮在IVF-ET取卵术镇痛中的应用

目的探讨同杜叮在辅助生殖取卵术中应用的效果。方法分析2010年11月-2011年4月,于本中心行试管婴儿取卵术的1 176例患者资料,按照镇痛药物使用情况,随机分为哌替啶组（573例）和同杜叮组（603例）。收集围术期血压、脉搏、血氧饱和度等数据,记录术中疼痛程度及恶心、呕吐、头晕等不良反应及严重不良反应资料。另外,进行两组间IVF-ET指标比较。结果哌替啶组术后血压及脉搏较同杜叮组低（P均〈0.001）,其余生命体征数据差别不明显（P均〉0.05）。同杜叮组一般不良反应较少（P均〈0.05）。两组间疼痛程度差异无统计学意义（P=0.304）,IVF-ET指标差异亦无统计学意义（P均〉0.05）。同杜叮组术后发生了3例腹腔大出血伴休克。结论在辅助生殖取卵术中使用同杜叮镇痛效果良好,不影响体外受精-胚胎移植结局,但是需要密切注意预防腹腔大出血的发生。     

不孕病史与腹腔镜下盆腔病变诊断关联性分析

【目的】 探讨不孕症患者术前病史和腹腔镜诊断盆腔病变不孕因素之间关联性,为临床不孕症处理提供依据。【方法】 收集2008年11月至2009年10月间因不孕症在我院妇科住院行腹腔镜诊治术的病例379例,按入选标准收集其既往病史资料包括患者的不孕时限、不孕类型、既往手术以及子宫输卵管造影（HSG）等。按照标准有361例纳入研究,将其不同临床特点按腹腔镜下诊断为盆腔输卵管因素、内异症或者双因素三方面进行分类汇总分析。【结果】 从入选361例患者腹腔镜下盆腔诊断结果分析显示,在不同年限组间比较,盆腔疾病构成比是不一样,差别有统计学意义（P<0.05）。盆腔输卵管因素在不孕年限≥10年组最高（76.5%）,而盆腔子宫内膜异位症所占比例最低（5.9%）。原发不孕与继发不孕盆腔疾病构成比差别无统计学意义（P>0.05）。按照既往不同手术史情况分组,盆腔输卵管因素及子宫内膜异位症因素所占病因构成比差别无统计学意义（P>0.05）。有盆腔手术史患者,盆腔输卵管因素有增高趋势。HSG诊断右、左两侧输卵管通而不畅组与对应通畅组比较,腹腔镜下诊断正常、堵塞与盆腔粘连差别无统计学意义（P均>0.05）。右、左两侧输卵管通而不畅组与堵塞组比较,腹腔镜下诊断正常、堵塞与盆腔粘连的情况差别有统计学意义（P均<0.05）。当HSG诊断双侧输卵管通畅时,腹腔镜诊断与HSG结果一致性达100％;诊断双侧输卵管堵塞时,一致性只有72.0％。【结论】不孕患者既往病史对于判断其病因很有意义,相对价廉的HSG对盆腔输卵管炎性不孕病因有着良好预测作用。     

不孕症患者临床情况与子宫内膜息肉的关系研究

目的:探讨不孕症患者临床情况和子宫内膜息肉的关系,为临床诊治提供参考。方法:收集2008年11月至2009年10月间于本院行宫腹腔镜联合检查的244例不孕患者的临床资料,分别进行年龄、不孕年限、腹腔镜检查盆腔疾病和孕产史等与子宫内膜息肉发生的关系分析。同时分析B超检查与宫腔镜检查子宫内膜息肉的一致性。结果:不孕患者年龄、盆腔炎症情况在不同组别间子宫内膜息肉发生率差异无统计学意义(P均>0.05)。而不孕年限、孕产史以及子宫内膜异位症和子宫内膜息肉发生有关。随不孕年限增加,子宫内膜息肉发生率呈增高趋势(P=0.034),原发不孕组比继发不孕组子宫内膜息肉发生率高(15.71%vs5.8%,P=0.016),子宫内膜异位症组比无子宫内膜异位症组的子宫内膜息肉发生率高(19.0%vs7.5%,P=0.007)。宫腔镜检查子宫内膜息肉阳性率高于B超检查(11.5%与6.6%,P=0.000)。结论:子宫内膜息肉发生与不孕症患者不孕年限、病因、孕产史等因素相关,B超结合宫腔镜检查是排除内膜息肉有效手段。