快速供肝切取与修整的外科技巧

目的总结肝脏移植供肝的快速切取和修整经验。方法分析2004年共186例快速供肝的切取和修整的资料。快速切取技术采用原位腹主动脉、肠系膜上静脉灌注附加下腔静脉引流，快速切取供肝，4℃UW液中保存和修整肝脏。结果供肝热缺血时间为3～10min，平均4．5min；冷缺血时间平均为3-16h，平均7h。供肝的修整时间为26～90min，平均46min。供肝修整时发现肝动脉解剖变异20例。结论快速供肝切取法要求术者技术娴熟、动作迅速和准确，可最大限度地减少供肝热缺血时间。快速切取法能保证供肝的质量和确保供肝切取的成功。     

热休克对肝癌细胞HSP70、gp96表达的影响及与细胞周期关系

与肿瘤免疫密切相关的热休克蛋白（HSPs）主要有HSP70和gp96。因可诱导特异性抗肿瘤反应成为近期热点，不断有临床治疗试验报道。目前HSPs作用精确分子机制还不明确；特别是gp96，除发现其“管家”作用。还发现它在先天和获得性免疫中发挥重要调节作用。我们在不同条件下对BeL-7402肝癌细胞株的HSP70、gp96进行单项及共同表达的研究，结合细胞周期进行分析，对于HSP70、gp96表达，两者表达关联性，及其表达与细胞周期的关系进行了探讨。     

胰、肾联合移植一例报告

本中心于2005年1月为1例1型糖尿病并发尿毒症患者施行胰液空肠引流式胰、肾联合移植，报告如下。     

E-选择素在肝细胞癌转移作用中的实验研究

目的 探讨E-选择素在肝癌特异性转移中的作用，并筛选有临床应用前景的抗肝癌转移药物。方法 检测E-选择素在肝静脉内皮细胞（ED25）中的表达，检测活化ED25与肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞Love、鼻咽癌细胞在体外的黏附差异，并测试不同药物对黏附的影响。结果 E-选择素高强度表达于活化后的ED25，且能介导HepG2与ED25的黏附。HepG2条件培养液处理ED25可增强与HepG2、Love、鼻咽癌细胞的黏附，但HepG27和Love与ED25的黏附明显强于鼻咽癌细胞（P〈0．05），而HepG2和Love与ED25的黏附差异无显著性（P=0．29）；抗E-选择素抗体、地塞米松、氧化亚砷、吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）有较强抑制肝癌细胞与ED25黏附作用。结论 E-选择素可促进肝癌细胞与ED25的黏附；肝癌细胞可分泌促进ED25表达E-选择素表达的物质，从而促进了肝癌的转移；地塞米松、氧化亚砷、PDTC可以抑制肝癌细胞与ED25的黏附，有望成为预防肝癌转移药物。     

肝移植围手术期肝肾综合征的综合治疗临床观察

目的探讨肝移植围手术期以特利加压素（terlipressin）为基础的综合治疗措施对改善HRS病人肾功能及提高术后生存率的作用。方法对术前16例及术后15例HRS病人采用以terlipressin为基础的综合治疗，观察治疗前后血Cr及24h尿量的变化以及术后ICU时间、感染率、急性肾衰发生率、死亡率等各项指标。结果单纯使用terlipressin治疗的病人，治疗前后的血Cr及24h尿量的变化差异有统计学意义（P〈0．05）；CRRT的使用能明显改善病人的临床症状；与同期行肝移植的非HRS病人相比，经综合治疗的HRS病人的ICU治疗时间较长、感染率较高（P〈0．05），但ARF的发生率及死亡率无显著性差异（P〉0．05）。结论对肝移植围手术期的HRS病人采用terlipressin结合CRRT及2剂赛尼哌诱导疗法的综合治疗可以明显改善病人的肾功能，提高生存率。     

E-选择素及其配体表达对肝癌转移的临床意义

目的 探讨E-选择索(E-selectin)及其配体在肝癌细胞与内皮细胞黏附中的作用和二者表达的临床意义;并筛选可能阻断黏附作用的药物. 方法 收集78例肝细胞癌患者的临床资料,采用免疫组织化学方法检测E-selectin、sLeX、sLeA、CD44v6的表达情况,按临床特征分组并比较各组E-selectin、sLeX、sLeA、CD44v6的阳性表达率差异.体外实验采用实时荧光定量PCR检测E-selectin和细胞间黏附分子(ICAM)-1在ED25、ECV304两种内皮细胞中的表达;黏附实验检测肝癌细胞HepG2与ED25、ECV304两种内皮细胞的黏附活性,并检测不同药物对黏附作用的影响.对临床资料数据采用χ2检验、Kaplan-Meier生存分析与Wilcoxon检验;对体外实验计量数据进行方差分析.结果 E-selectin在肝癌病灶内血管内皮细胞中的阳性表达率为70.51%,sLeX、sLeA、CDJ44v6在肝癌细胞中的阳性表达率分别为64.10%、69.23%、62.90%.sLeX、sLeA、CD44v6表达阴性患者的平均生存期显著长于阳性患者(P值均<0.05).有门静脉癌栓、术前肝外转移、卫星病灶、术后3个月内复发各组E-selectin、sLeX、sLeA的阳性表达率差异均有统计学意义(P值均<0.05);而肿瘤大小、血清AFP水平均与E-selectin、sLeX、sLeA的阳性表达率无相关性;病理分级Ⅲ～Ⅳ级组与Ⅰ～Ⅱ级组的E-selectin和CD44v6的阳性表达率差异均有统计学意义(P值均<0.05).CD44v6的表达特点是术后3个月内复发者有较高的阳性率,有卫星灶者阳性率也较高.E-selectin和ICAM-1可高表达于活化后的ED25和ECV304细胞;且能介导HepG2细胞与ED25和ECV304细胞的黏附,地塞米松,丹参酮ⅡA都具有较强的抗黏附能力,且抗黏附作用随着浓度的增加而增强.结论 E-selectin、sLeX.sLeA、CD44v6的表达与患者的预后,门静脉癌栓等临床特征密切相关,可作为临床预后和术后早期复发的评估依据.E-selectin、ICAM-1及其配体可增强肝癌细胞与内皮细胞的黏附,促进肝癌转移;地塞米松、丹参酮ⅡA可阻断其黏附作用.     

热休克蛋白对树突状细胞成熟的影响研究

目的:探讨热休克蛋白(HSP)对树突状细胞(DCs)成熟的影响,同时对其形态学动态变化进行研究。方法:从肝癌组织中提取HSP(gp96 )抗原肽复合物;肝癌细胞进行热休克处理诱导其表面表达HSP,再用DiI荧光标记;将两种HSP与DCs混合培养,动态观察DCs捕获抗原和成熟过程中的形态学变化。流式细胞仪检测不同情况下热休克蛋白对DCs成熟表型的影响。结果:使用DiI标记的方法良好地显示了DCs摄取抗原的形态学变化;DCs通过直接接触、包绕、形成囊泡和伸出伪足且末端形成囊泡4种方式摄取抗原;热休克蛋白可促进DCs成熟表型的表达。结论:DiI是适合DCs形态学研究的良好的荧光标记物;DCs捕获抗原有4种不同方式;不同热休克蛋白均可促进DCs成熟,但提取的热休克蛋白作用更显著。     

DiI荧光示踪剂在大鼠脾内肝细胞移植中的研究

目的 探讨大鼠肝细胞在脾内移植后的生存、迁移及其并发症情况。方法 先用ＤｉＩ荧光示踪剂标记肝细胞再行脾内肝细胞移植。在不同时间段取肝、脾、肺、心、肾 、胸腺组织冷冻切片,在荧光显微镜下用荧光和普通光示踪观察。结果 ＤｉＩ荧光示踪剂能很好地标记肝细胞,６０ｄ实验期内,移植细胞能在所取各器官中生存并保持良好形态,未发现有区域梗塞灶、同时还反映了其在肝实质中的分布。结论 ＤｉＩ是一种新颖、使用简便的荧光     

胶原酶浓度对大鼠胰岛分离纯化产量的影响

目的观察胶原酶浓度对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛的最佳消化液的胶原酶浓度。方法 75只雄性SD大鼠按胶原酶浓度分为5组：Ⅰ组（0.5 mg/ml）、Ⅱ组（0.75 mg/ml）、Ⅲ组（1.0 mg/ml）Ⅳ组（1.2 mg/ml）和Ⅴ组（1.5 mg/ml）,每组15只。通过胆灌注胶原酶V来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,并利用葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。结果分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活性率为90%左右,体外培养生长良好。随着胶原酶的浓度增加,胰岛数量和胰岛当量明显增加（P〈0.05）,并且最大直径的胰岛数量也在增加（P〈0.05）,在胶原酶浓度1.0 mg/ml时获得的胰岛产量最高,其次为1.2 mg/ml,在其他浓度时,胰岛产量都较低（P〈0.05）。在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放分别为（1.346±0.128）ng/ml和（2.565±0.208）ng/ml,差异具有显著性意义（P〈0.05）,刺激指数为（1.908±0.152）,提示胰岛细胞功能良好,电镜照片显示胰岛生长状况良好。结论进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度为1.0~1.2 mg/ml,可获得稳定高产量的胰岛,过低和过高的浓度都是不适宜的。     

彩色多普勒超声对门静脉广泛血栓肝移植患者围手术期监测的临床意义:附四例分析

目的探讨术前存在广泛门静脉血栓肝移植患者采用彩色多普勒超声(CDI)进行围手术期监测的临床作用。方法对4例术前存在广泛门静脉血栓肝移植患者于术前、术后进行CDI检查。术后首次CDI检查在移植术后24h内进行,术后第1周和第2周隔天1次,以后每周1～2次;主要监测指标包括门静脉主干最大内径、平均血流速(TAMX)、最大流速(Vmax)、血流频谱、侧支循环。结果 4例病例术前CDI检查发现门静脉主干血流缓慢、整段狭窄、完全堵塞、无血流及门静脉内膜严重病变等情况;并探测到多支侧支循环血流丰富、肠系膜上静脉扩张和无法找到满意的门静脉重建部位。这些情况在手术中证实,并指导了肝移植特殊类型手术中供肝门静脉灌注重建。术后2周隔天进行1次的CDI检查显示4例患者门静脉内径、血流方向及流速都呈现正常,取得较好重建效果和良好的肝功能恢复。结论 CDI对监测肝移植术后门静脉并发症具有较好效果,对术前门静脉系统广泛血栓患者,CDI对指导术者在术前思考手术可能遇到问题、设计和准备应变手术方式具有一定价值。