慢性疼痛基因治疗非病毒递送系统研究进展

慢性疼痛基因治疗的有效性和安全性的关键问题是要找到合适的目的基因和能将目的基因送入靶组织或靶器官的载体系统。目前慢性疼痛基因治疗中常用的有反义寡核普酸(antisenseoligonueleotide,asODN)技术和RNA干扰(RNAi)[1]技术,而这些技术成功的运用有赖于靶向、高效的载体系统。因此积极发展新型高效、特异性强的靶向载体系统是基因治疗研究的     

NMDA受体2B亚基在慢性疼痛中的作用研究进展

慢性、持续的疼痛可能是病人就医的最常见的原因,因此,慢性疼痛的发生机制及治疗手段的研究备受重视.新近的研究发现,N-甲基-D一天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NR)在痛敏的产生和维持方面起关键作用,而NMDA受体2B(NMDA receptor 2B,NR2B)亚基是NR参与疼痛调节的主要亚基.     

水溶性脂质体运载siRNA沉默大鼠脊髓NR1表达可行性的实验研究

目的探讨水溶性脂质体(WSLP)运载N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1)小干扰RNA(siRNA)沉默大鼠脊髓NR1表达的可行性。方法根据文献合成WSLP,将合成的WSLP与siRNA连接形成WSLP/siRNA。将18只SD大鼠随机均分为3组:NS组(鞘内注射生理盐水)、WSLP/siRNA组(鞘内注射WSLP/siRNA混合物)、裸siRNA组(鞘内注射裸siRNA)。通过实时定量PCR和Western blot技术分别检测各组大鼠脊髓NR1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 NS组与裸siRNA组脊髓NR1 mRNA和蛋白表达水平无明显差异,WSLP/siRNA组脊髓NR1mRNA和蛋白表达水平下降。结论 WSLP可有效运载siRNA沉默大鼠脊髓NR1 mRNA和蛋白表达,为WSLP运载NR1-siRNA治疗慢性疼痛的实验打下基础。     

水溶性脂质体运载siRNA对神经病理性疼痛大鼠脊髓NMDA受体1的影响

目的探讨水溶性脂质体(WSLP)运载N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor1,NMDAR1)利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)治疗神经病理性疼痛的可行性。方法采用坐骨神经分支选择结扎切断(spared nerve injury model,SNI)制作神经病理性疼痛大鼠模型,选取鞘内置管成功SD大鼠24只,随机均分为四组:S组,仅暴露坐骨神经,不结扎;C组,SNI+鞘内注射生理盐水;W组,SNI+鞘内注射WSLP/siRNA混合物;L组,SNI+鞘内注射乱序siRNA与WSLP混合物。通过实时定量PCR和western-blot技术分别检测各组大鼠脊髓背角NMDAR1 mRNA相对表达和NMDAR1蛋白表达水平的变化。结果 C组和L组第4天脊髓背角NMDAR1 mRNA相对表达和NMDAR1蛋白表达水平显著高于S、W组(P<0.05)。结论 WS-LP可有效运载siRNA抑制神经病理性疼痛大鼠NMDAR1的过度表达。     

水溶性脂质体运载基因药物复合物治疗大鼠神经病理性痛

背景：有研究报道病毒载体运载N-甲基-D天冬氨酸受体1小干扰RNA可有效缓解大鼠炎性疼痛,但病毒载体存在安全隐患。 目的：探讨水溶性脂质体运载N-甲基-D天冬氨酸受体1小干扰RNA在体内外沉默N-甲基-D天冬氨酸受体1的效应和治疗神经病理性痛的可行性。 方法：将PC12随机分为阴性转染组、对照转染组和水溶性脂质体转染组,分别以N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA、聚乙烯亚胺与N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA的复合物及水溶性脂质体与N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA的复合物转染PC12细胞,检测各组N-甲基-D-天冬氨酸受体1 基因mRNA及蛋白水平表达的变化。将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、聚乙烯亚胺组及水溶性脂质体组,后3组建立大鼠神经病理性疼痛模型,并分别鞘内注射生理盐水、聚乙烯亚胺与N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA的复合物和水溶性脂质体与N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA的复合物;假手术组只暴露坐骨神经。 结果与结论：水溶性脂质体转染组N-甲基-D-天冬氨酸受体1的 mRNA与蛋白表达水平明显低于其他两组(P < 0.01)。与假手术组比较,模型组、聚乙烯亚胺组及水溶性脂质体组N-甲基-D-天冬氨酸受体1 的mRNA和蛋白表达上调,累积疼痛评分升高(P < 0.01);与模型组比较,水溶性脂质体转染组脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体1 mRNA与蛋白表达及累积疼痛评分下降(P < 0.01),聚乙烯亚胺组上述指标无明显变化(P > 0.05)。表明在体内条件下水溶性脂质体可有效运载N-甲基-D-天冬氨酸受体1 小干扰RNA,抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体1 的过度表达,还可减轻大鼠神经病理性痛。     

水溶性脂质体运载基因药物复合物治疗大鼠神经病理性痛

背景：有研究报道病毒载体运载 N-甲基-D 天冬氨酸受体1小干扰 RNA 可有效缓解大鼠炎性疼痛,但病毒载体存在安全隐患.目的：探讨水溶性脂质体运载 N-甲基-D 天冬氨酸受体1小干扰 RNA 在体内外沉默 N-甲基-D 天冬氨酸受体1的效应和治疗神经病理性痛的可行性.方法：将 PC12随机分为阴性转染组、对照转染组和水溶性脂质体转染组,分别以 N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA、聚乙烯亚胺与 N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA 的复合物及水溶性脂质体与 N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA 的复合物转染 PC12细胞,检测各组 N-甲基-D-天冬氨酸受体1基因 mRNA 及蛋白水平表达的变化.将48只 SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、聚乙烯亚胺组及水溶性脂质体组,后3组建立大鼠神经病理性疼痛模型,并分别鞘内注射生理盐水、聚乙烯亚胺与N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA 的复合物和水溶性脂质体与 N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA 的复合物;假手术组只暴露坐骨神经.结果与结论：水溶性脂质体转染组 N-甲基-D-天冬氨酸受体1的 mRNA 与蛋白表达水平明显低于其他两组（P 〈0.01）.与假手术组比较,模型组、聚乙烯亚胺组及水溶性脂质体组 N-甲基-D-天冬氨酸受体1的 mRNA 和蛋白表达上调,累积疼痛评分升高（P 〈0.01）;与模型组比较,水溶性脂质体转染组脊髓背角 N-甲基-D-天冬氨酸受体1 mRNA 与蛋白表达及累积疼痛评分下降（P 〈0.01）,聚乙烯亚胺组上述指标无明显变化（P 〉0.05）.表明在体内条件下水溶性脂质体可有效运载 N-甲基-D-天冬氨酸受体1小干扰 RNA,抑制 N-甲基-D-天冬氨酸受体1的过度表达,还可减轻大鼠神经病理性痛.