致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。     

糖尿病伴发结核病误诊肺肿瘤1例报告

患者。女性。66岁，住院号982040，反复刺激性干咳伴咯血一次而入院，一月前无明诱因出现刺激性咳嗽，偶尔少量痰中带血。曾对症治疗症状有好转。仍干咳不止，渐感体质消瘦。体重减轻伴纳差，体力下降，无胸痛、胸闷及低热、盗汗等症状。前日无诱因咯鲜血一次，约10nd左右。胸片示右肺野中内带近肺门区域见斑片状模糊阴影，提示右肺炎症。入院治疗。平素体健。体检：T36．6℃，P80次／分，R20次／分Bpl8／10kPa。发育正常，营养中等。呼吸平稳。自动体位。     

圆弧青霉代谢提取物诱发CHO细胞SCE及染色体畸变研究

从食管癌高发区林县粮食中分离出19株圆弧青霉,从中随机选出4株(7B_3 26B_1155D_1 45A_2)在以甘露醇为碳源的Raulin-Thom培养基中,25℃培养14天。氯仿提取代谢物,得棕色粉沫。应用CHO细胞作为测试细胞株,用SCE和染色体畸变分析等遗传毒理学方法测圆弧青霉代谢物的诱变性。结果为:7B_3,155D_1,26B_1不加S时,不诱发CHO细胞SCE频率升高(P<0.001),并有剂量-效应关系。加S后,7B_3,155D_1作用消失,     

klinefelter综合征8例报告

Klinefelter 综合征(克氏征)即伴随超数 X 染色体的男性性腺功能低下症,其发病率约占男性的1.3‰。我所男性不育症门诊在近2年的时间内发现8例,现将其临床资料、遗传学检查及血液激素检查结果报道如下:临床资料克氏征的典型临床表现为小睾丸和无精子症,男性副性征发育不良,有不同程度的女性化表现,如胡须稀少或缺如,喉结小甚至不能触及,阴毛稀少常呈女性型分布,约25%有乳房发育呈女性型。体型常呈去睾体型,身材较高,耻跟距常大于顶耻距。智能发育可正常,但大部分患者可有不同程度的智力低下。本组8例的临床表现见表1。遗传学检查结果见表2。可见,5例核型为47,XXY,3例为46,XY/47,XXY;     

热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控

目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。     

男子停服棉酚后的精液、血液生化和激素水平随访观察

<正> 我国科学工作者首先发现棉酚的抗生育作用,对其避孕效果和副作用已有详述本文对长期服用棉酚者停药后的生精恢复、血液生化及激素水平进行了观察,现报告如下。对象和方法一、20名已服用棉酚2～9年(平均5年)的志愿者,年龄为29～48岁(平均40岁),服药总量为4.8～27.5克(平均12.1克)。二、停药后六个月内每月检查一次,以后每两个月检查一次,连续三次精子密度d≥20×10~5/ml即终止观察。三、检查指标均按WHO男性生育调节随访表格要求进行,包括(1)体检(含胸透,肝、胆脾超声波     

严重污染林县粮食的圆弧青霉的诱变性研究

圆孤青霉也是严重污染林县粮食的主要产毒霉菌,在我们研究食管癌的霉菌病工作中,除已证明链格孢与人的食管癌有密切关系外,因考虑到霉菌病因也可能是多因素的问题,我们对圆孤青霉也作了多方面的诱变性研究。     

FILIP-1L 蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的： 表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白,制备FILIP-1L多克隆抗体。方法：pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化E-coliBL21大肠杆菌,IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达,Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备FILIP-1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价,Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果：在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白,经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔,获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体,WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论：成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。