Rag1、Rag2基因缺陷小鼠的构建及在异种肿瘤移植中的应用

目的 建立重组激活基因,Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,并对其表型和异种肿瘤移植的成瘤性进行分析.方法 通过传统的胚胎干细胞(ES)细胞打靶、囊胚注射方式,分别构建Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型;通过流式细胞术对缺陷小鼠外周血T/B淋巴细胞含量进行检测;通过外源异种肿瘤细胞移植实验,对移植肿瘤细胞的成瘤性进行评价.结果 建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种基因突变纯合子小鼠模型外周血中T、B淋巴细胞含量较野生型小鼠显著降低;人源肿瘤细胞A549在上述两种基因突变纯合子小鼠中较BALB/c-nu(裸小鼠)或(NOD-SCID)非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠表现出更强的成瘤性.结论 分别成功建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种小鼠模型均发生了T、B淋巴细胞生成障碍,导致免疫系统严重缺陷,可作为异种外源肿瘤移植的受体,用于小鼠荷瘤模型的建立.     

胃动素受体多克隆抗体的制备及其受体在人胃的表达

目的制备胃动素受体多克隆抗体和研究该受体在人胃中的组织定位。方法通过合成肽耦联钥孔戚血蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin,KLH)制备抗体,以ELISA方法测定效价。用含有GPR38基因(胃动素受体)的质粒转染293细胞株,以RT-PCR方法鉴定。Westernblot和免疫组织化学法检测转染的293细胞和组织中胃动素受体的表达。结果制备的兔抗人的多抗效价达1∶500000,有较好的特异性。成功转染293细胞,该细胞能够瞬时表达胃动素受体,而该受体在人胃窦胃体的黏膜腺上皮中表达。结论应用合成肽-KLH成功地制备了胃动素受体的兔抗人多克隆抗体,用该抗体检测到人胃窦胃体黏膜上皮细胞存在胃动素受体的表达。     

丙酸睾酮致小鼠多囊卵巢综合症动物模型的建立

目的 运用雄激素丙酸睾酮早期注射建立不孕症小鼠动物模型 方法 出生5日龄BALB/c小鼠颈背部皮下注射丙酸睾酮,观察阴道上皮细胞角化情况、交配见栓、妊娠情况、雄激素水平、葡萄糖糖耐量及血清胰岛素测定、卵巢病理切片.结果 模型小鼠出现阴道上皮细胞持续角化、交配见栓率、妊娠率显著低于对照组,血游离睾酮水平较对照组小鼠显著升高(P＜0.05),模型鼠的基础血糖较对照组有所升高(P＜0.05),糖代谢正常,模型组胰岛素水平有所升高,但与对照组无显著性差异.卵巢卵泡和正常卵巢相比明显成多囊样发育,见囊状扩张卵泡.结论 丙酸睾酮干预新生小鼠可致雌性小鼠成年后出现交配见栓率低、不孕、血清游离睾酮水平升高,并伴随基础血糖升高,卵巢卵泡呈多囊样改变等多囊卵巢综合症的表现.