克罗恩病患者血清miR-223表达与炎性反应状态及预后的关系

目的探究克罗恩病(CD)患者血清miR-223表达水平与炎性反应状态及预后的关系。方法选择2017年4月至2018年1月于青岛市第八人民医院就诊的64例CD患者作为CD组,另选择53例同期健康体检者作为对照组。采用RT-qPCR法检测两组的血清miR-223相对表达量并进行比较,同时分析miR-223的相对表达量与CD患者炎性反应状态及预后的关系。结果 CD组患者血清miR-223的相对表达量高于对照组,且CD缓解期患者血清miR-223的相对表达量低于活动期患者,差异均有统计学意义(P均0.05)。CD组患者血清miR-223的相对表达量与CD活动指数及CD简化内镜评分均呈正相关。单因素及Logistic多因素回归分析结果显示,存在肛周病变、疾病行为狭窄型和血清miR-223相对表达量2.13的CD患者的预后不良风险较高。结论 CD患者血清miR-223的相对表达量与炎性反应状态及预后均相关。检测CD患者血清miR-223的相对表达量有助于了解其病情及预后。     

人髓核细胞诱导人尿源性干细胞向髓核样细胞分化作用的研究

【摘要】 目的：探讨人髓核细胞（NPCs）诱导对人尿源性干细胞（USCs）向髓核样细胞分化的作用。方法：手术时获取腰椎间盘突出症患者L4/5的髓核组织,并采用贴壁法体外分离培养NPCs;从健康成年人尿液中获取USCs并进行体外培养,通过倒置显微镜观察细胞形态,并采用成骨、成脂、成软骨三系诱导分化及蛋白免疫印迹技术（Western blot,WB）对所获取的USCs进行形态、分化潜能及细胞表面标志蛋白鉴定。使用Transwell小室将P3代NPCs与USCs培养以建立共培养体系,设实验组、对照组及NPCs组,实验组为NPCs与USCs共培养组,对照组为单独USCs培养,NPCs组为单独NPCs培养;培养14d后应用倒置显微镜观察细胞形态;应用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）及WB分别检测实验组USCs、对照组USCs与NPCs组NPCs中蛋白多糖（ACAN）、SOX-9（SRY-related high mobility groupbox gene 9）、Ⅱ型胶原（COL2）及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的mRNA及蛋白的表达情况;免疫荧光染色观察3组 COL2A1及ACAN荧光表达。结果：培养的USCs成骨、成脂、成软骨三系分化实验结果均为阳性;USCs中干细胞阳性标志物CD29、CD44、CD73和CD90呈高表达,未检出干细胞阴性标志物CD34和CD45。培养14d后倒置显微镜下对照组及NPCs组细胞形态无变化,实验组USCs向髓核样细胞分化,形态变化明显。经共培养诱导14d后实验组及NPCs组中的ACAN、SOX-9、COL2A1及HIF-1α基因mRNA及蛋白表达均显著高于对照组（P<0.05）,ACAN及COL2A1荧光强度明显高于对照组;实验组上述各种mRNA及蛋白表达与NPCs组比较均无统计学差异（P＞0.05）,实验组荧光强度与NPCs组比较无明显差异。结论：在体外实验中,人NPCs可通过共培养的方式诱导人USCs分化为髓核样细胞,可为椎间盘组织工程研究提供NPCs来源。     

人尿源干细胞外泌体对退变髓核细胞生物学功能的影响

目的:探讨人尿源干细胞外泌体(USC-Exos)对退变髓核细胞(NPCs)生物学功能的影响。方法 :从健康成人尿液中获得人尿源干细胞(USCs)并进行体外培养,通过成骨、成软骨、成脂诱导分化及蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)技术对所提取细胞进行鉴定。使用USCs完全培养基培养USCs 48h后采用差速离心法从培养基中提取外泌体,应用电子显微镜、粒径分析及WB技术对USC-Exos进行形态、直径及表面标志物检测。从腰椎间盘突出症患者术中摘除的髓核中提取NPCs,并培养至P6。以加入50μg/ml USC-Exos干预的P6NPCs为实验组,以50μg/ml未培养过细胞的USCs完全培养基离心沉淀物干预的P6 NPCs为对照组,分别在干预后1～6d使用CCK-8法检测NPCs增殖情况。使用PKH26荧光染料标记USC-Exos,并用标记后的USCExos干预P6 NPCs,12h后在激光共聚焦显微镜下观察NPCs对USC-Exos的摄取情况。两组在干预后48h进行β-半乳糖苷酶衰老染色检测NPCs衰老比例,免疫荧光染色观察蛋白聚糖(ACAN)、Ⅱ型胶原(COL2)的表达。干预后3d、5d、7d时用RT-PCR和WB检测两组NPCs中ACAN、COL2、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)、多肿瘤抑制基因P16(P16)的mRNA及对应蛋白的表达量,对两组ACAN、COL2、TIMP1、P16基因的相对表达量进行比较,P0.05为有统计学差异。结果:从人尿中提取的细胞具有干细胞特性,传代培养后可从中提取粒径为50～100nm的椭圆形囊泡结构,其表达CD63和Tsg101,不表达Calnexin蛋白,符合Exos特性。P6 NPCs经USC-Exos干预后细胞增殖速度变快。经PKH26标记的USC-Exos可被NPCs摄取。干预后48h实验组衰老细胞比例[(13.8±1.4)%]低于对照组[(19.6±2.4)%],ACAN、COL2的荧光强度高于对照组。干预后3d、5d、7d时,实验组细胞中ACAN、COL2、TIMP1 mRNA及对应蛋白的相对表达量较对照组显著性升高(P0.05),P16基因mRNA及对应蛋白的相对表达量较对照组显著性降低(P0.05),而同组内不同时间点比较无显著性差异。结论:USC-Exos在体外条件下可促进退变NPCs的增殖,提高退变NPCs中ACAN、COL2、TIMP1 mRNA及对应蛋白的表达,降低P16 mRNA及对应蛋白的表达。     

老年腰椎间盘突出症的手术疗效观察

目的 回顾性观察老年腰椎间盘突出症患者术后疗效。方法报告1994年7月至2011年11月因腰椎间盘突出症在我院手术治疗的患者共95例,年龄60～85（平均70-3）岁,男59例,女36例,随访时间3个月～10年（平均35．7个月）。采用中华医学会骨科学分会脊柱外科学组腰背痛手术评定标准和日本骨科学会评分标准,比较不同手术方式（单纯椎间盘切除和椎间盘切除并内固定融合）、不同减压方式（开窗、半椎板切除和全椎板切除）和不同随访时间（3年以内,3～5年,5年以上）的疗效。结果95例患者总优良率为84．2％,单纯椎间盘切除组和椎间盘切除并内固定融合组优良率分别为80．5％,87．0％,两组差异无统计学意义（P=O．694）;改善率分别为（60．89±32．62）％,（65．74±26．32）％,两组改善率差异无统计学意义（P=0．636）。开窗组、半椎板切除组和全椎板切除组优良率分别为80．6％,91．3％和85．4％,3组间差异无统计学（P=O．958）,3组改善率分别为（59．84±29．84）％,（62．30±27．10）％和（62．94±31．96）％,3组间差异无统计学（P=O．835）。随访时间3年以内组,3～5年组,5年以上组,其优良率分别为90．6％,77．8％和79．2％,3组间优良率差异无统计学（P=0．660）;3组术后改善率分别为（62．01±25．97）％,（55．06±35．89）％,（60．83±33．73）％,3组间差异无统计学意义（P=0．811）。结论单纯椎间盘切除与椎间盘切除并内固定融合治疗老年腰椎间盘突出症随访可获得良好疗效,开窗组、半椎板切除和全椎板切除均可获得良好疗效,且其疗效随着随访时间延长无明显变化。     

腰骶部移行椎与腰椎间盘突出症的关系

背景：目前,腰骶部移行椎与腰椎间盘突出症的关系尚存争议。目的：探讨腰骶部移行椎与腰椎间盘突出症的关系和腰骶部移行椎对腰椎间盘再突出的影响。方法：本研究共分为三组：腰椎间盘突出症组193例,选取2008年6月至2010年8月初次行手术治疗的腰椎间盘突出症患者,包括有腰骶部移行椎患者111例和无腰骶部移行椎患者82例;对照组220例,选取同期健康查体的无症状人群;腰椎间盘再突出组33例,选取2004年4月至2010年8月手术治疗的腰椎间盘再突出患者,包括有腰骶部移行椎患者18例和无腰骶部移行椎患者15例。分别对三组行影像学检查,统计腰骶部移行椎的发生率和类型,观察椎间盘突出部位与腰骶部移行椎的关系。结果：腰椎间盘突出症组、对照组和腰椎间盘再突出组的腰骶部移行椎的发生率分别为：57.51%、51.82%和54.55%,相比较无统计学差异（χ2=1.34,P〉0.05）。其中CastellviⅠ型的发生率分别为38.86%、45.00%和36.36%,相比较无统计学差异（χ2=2.01,P〉0.05）;Ⅱ型的发生率分别为：12.95%、4.55%和15.15%,腰椎间盘突出症组与对照组比较有统计学差异（χ2=9.35,P〈0.01）,而腰椎间盘突出症组与腰椎间盘再突出组比较无统计学差异（χ2=0.12,P〉0.05）;Ⅲ型的发生率分别为5.18%,2.27%和0,相比较无统计学差异（χ2=3.92,P〉0.05）;Ⅳ型的发生率为0.52%、0和3.03%,相比较无统计学差异（χ2=5.94,P〉0.05）。腰椎间盘突出症组中腰骶部移行椎患者L4~5节段突出71.17%、L5~S1节段突出26.13%,分别与无腰骶部移行椎患者L4~5节段突出48.78%、L5~S1节段突出47.56%,比较均有统计学差异（χ2=10.00,P〈0.01;χ2=9.49,P〈0.01）。腰椎间盘突出症组中Ⅰb和Ⅱa型腰骶部移行椎患者的腰椎间盘突出节段以L4~5多见,分别为30.63%和12.61%,与L5~S1节段发生率为11.71%和1.80%相比较均有统计学差异（χ2=11.90,P〈0.01;χ2=15.20,P〈0.01?     

人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖和Neurocan基因表达的影响

目的观察人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖及硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan基因表达的影响,并探讨IKVAV潜在的促进受损脊髓功能恢复的作用。方法设计IKVAV序列,人工合成IKVAV多肽,将星形胶质细胞接种于1%IKVAV包被的培养板上,分别于培养1 d、3 d、5 d、7 d、9 d后在激光共聚焦显微镜下观察IKVAV多肽和星形胶质细胞的组织相容性,用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖情况,用荧光定量PCR法检测星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan的表达,并与对照组比较,进行统计学分析。结果与对照组相比,实验组培养板上星形胶质细胞总数明显减少,但细胞存活率〉95%。荧光定量PCR结果显示实验组星形胶质细胞Neu-rocan的表达量较对照组显著降低。结论人工合成IKVAV多肽可抑制星形胶质细胞增殖、下调硫酸硫酸软骨素蛋白多糖的表达,从而抑制受损脊髓胶质瘢痕的形成,促进脊髓功能恢复。     

单纯髓核摘除术治疗腰椎椎间盘突出症的长期疗效观察

目的回顾性观察腰椎椎间盘突出症患者行单纯髓核摘除术后的远期疗效。方法 1988年11月～2003年6月因腰椎椎间盘突出行单纯髓核摘除术且随访≥10年的患者共54例。采用中华医学会骨科学分会脊柱外科学组腰背痛手术评定标准和日本骨科学会（Japanese Orthopaedic Association,JOA）评分标准,比较不同随访时间的疗效。结果依据中华医学会骨科学分会脊柱学组腰背痛手术评定标准,54例患者总优良率为83.3%,开窗组、半椎板组和全椎板组优良率分别为83.3%、88.9%、66.7%,3组间差异无统计学意义（P〉0.05）。术前JOA评分为7.86±4.31分,术后为22.86±6.59分。3组JOA改善率分别为（71.99±28.64）%、（72.43±21.85）%、（67.02±44.68）%,3组间JOA改善率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论单纯髓核摘除术治疗腰椎椎间盘突出症长期随访可获得良好疗效,且开窗、半椎板切除和全椎板切除疗效无明显差异。     

胸椎手术后急性硬脊膜外血肿

 目的 探讨胸椎手术后急性硬脊膜外血肿的形成原因、血肿压迫时间对脊髓神经功能的影响及预防措施。方法 回顾性分析2002年5月至2012年5月经手术证实的胸椎后路手术后发生急性硬脊膜外血肿致神经功能障碍的14例患者资料,男6例,女8例;年龄41～69岁,平均61.2岁;胸椎管狭窄症10例,胸椎管内脊膜瘤3例,胸椎转移瘤1例;胸椎后路手术后3～14 h,平均6.6 h,患者脊髓神经功能出现恶化,ASIA分级A级5例,B级9例。对比血肿清除前、后以及随访时患者神经功能评分及神经功能恢复率。分析神经功能恢复率与血肿压迫时间及血肿清除前神经功能的关系。结果 14例患者血肿清除后AISA分级为：B级1例,C级2例,D级4例,E级7例。其中B、C级3例患者血肿压迫时间均 ＞10 h。血肿清除前、后神经功能比较差异有统计学意义,血肿清除后神经功能恢复率为63.7%±23.3%,与血肿压迫时间呈负相关,与血肿清除前神经功能呈正相关。血肿清除前神经功能与随访神经功能比较差异有统计学意义,随访神经功能恢复率为86.97%±17.58%,与血肿压迫时间呈负相关,与血肿清除术前神经功能呈正相关。结论 胸椎术后急性硬脊膜外血肿可致脊髓神经功能严重损害。脊髓神经功能恢复与血肿压迫时间有直接关系。早期诊断并清除血肿压迫是挽救脊髓功能的关键。     

Survivin在胎儿椎间盘组织中的表达及意义

目的探讨Survivin蛋白在胎儿椎间盘组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学技术检测3例胎儿11个椎间盘组织中Survivin蛋白的表达。结果胎龄为20、26、28周胎儿椎间盘组织中Survivin阳性细胞百分率分别为(4.79±3.44)%、(3.98±3.72)%和(3.12±1.56)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Sur-vivin在胎儿椎间盘中表达,可能对胎儿椎间盘的发育起重要作用。