抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达

目的 构建抗前列腺特异抗原（PSA）单链抗体（scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽（linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。     

前列腺癌相关雄激素受体突变体的促细胞增殖效应

目的评价前列腺癌相关雄激素受体突变体(mtAR)对细胞生长的促进作用。方法利用三种腺病毒表达载体:野生型雄激素受体(Ad-wtAR);一个被广泛研究的前列腺癌(CaP)相关的mtAR(Ad-mtAR,T877A);以及作为对照的腺病毒载体,我们评价并比较了野生型AR及mtAR的促细胞生长效应。结果相对于被野生型或者对照的腺病毒转染的LNCaP、PC3细胞,转染mtAR的LNCaP、PC3细胞无论有无合成的雄激素(R1881)存在的情况下均显示出更强的细胞增殖作用。并且,用腺病毒载体转染T877A的LNCaP和PC3细胞显示了对R1881更强的反应性。结论这些发现提出了崭新的关于mtAR在CaP细胞中作用的细胞生物学方面的见解,并且表明mtAR(T877A)可能为前列腺癌病程的进展提供了选择性的细胞生长的便利。     

输尿管支架在恶性肿瘤引起的输尿管梗阻治疗中的应用新进展

正恶性肿瘤引起的输尿管梗阻(malignant ureteral obstruction,MUO)通常由盆腔恶性肿瘤局部侵犯或压迫输尿管导致,大多数病例来自妇科、消化道及腹膜后肿瘤,且肿瘤的放化疗导致输尿管周围纤维化会加重梗阻的程度,此类患者如不进行治疗,将很快出现上尿路功能损害,甚至器官功能衰竭。上尿路减压和维持输尿管通畅为首选的治疗方案,治疗的目标是解除输尿管梗阻,避免泌尿系统的并发症,为患者提供继续治疗原发肿瘤的机会。随着技术进步及新材料的开发,各种输尿管支架包括聚合物输尿管支架、金属输尿管支架被应用于临床治疗MUO,为泌尿外科医师提供了更多的选择,同时有助于提高患者生活质量。     

应用焦磷酸微测序技术行HLA-DRB基因型分析

目的应用焦磷酸微测序技术进行HLA-DRB基因型分析.方法PCR扩增外显子2基因片段,经链亲和素包被磁珠纯化、制备单链DNA测序模板,应用焦磷酸微测序技术进行实时测序和HLA-DRB基因分型.结果焦磷酸微测序技术-次可判读40～80个碱基,采用3-4个微测序可以判读全部扩增区域的多态性位点,测序结果与HLA数据库基因序列比较,可准确进行HLA-DRB基因型分析.结论焦磷酸微测序技术应用于HLA-DRB基因型分析具有高分辨率、高通量和快速等优点,该方法可应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查.     

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及与临床意义. 方法 采用RT-PCR、免疫荧光法分别检测正常膀胱组织(12例)及膀胱癌标本中EZH2 mRNA(38例)及EZH2蛋白(68例)的表达. 结果 免疫荧光法检测显示正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为33.3%、79.4%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2蛋白表达率分别为65.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2蛋白表达率分别为68.9%、100.0%(P<0.05).RT-PCR检测结果 :正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为25.0%、84.2%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2 mRNA表达率分别为70.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2 mRNA表达率分别为72.7%、100.0%(P<0.05).EZH2在膀胱尿路上皮癌明显地高表达,EZH2表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期密切相关. 结论 结果 提示EZH2对于膀胱尿路上皮癌的早期诊断及判断预后可能有重要的意义.     

肾移植围手术期的补液监控

目的探讨肾移植围手术期的水电解质平衡维护及营养支持的方法和时机。方法以移植肾动、静脉血流开放时间为分界点,总结患者围手术期的生理特点,分析患者血流开放前、多尿期及恢复期的营养支持治疗及水、电解质平衡的维护,并依据输液方案进行治疗。结果移植肾动、静脉血流开放前的输液应以胶体如浓缩红细胞、血浆及清蛋白为主,多尿期应规律及时补充水及电解质,适当的营养支持有助于吻合口愈合,尿量稳定后应预防代谢性酸中毒。结论肾移植患者围手术期内环境复杂多变,及时有效地维护水、糖、电解质平衡及营养支持治疗至关重要。     

半导体激光治疗高龄、高危BPH（N100例报告）

我院于1999年4月至2000年4月采用美国强生公司最新型产品Indigo830E增强型组织内凝固激光治疗仪治疗BPH患者100例。报道如下。临床资料：BPH病人100例，年龄65～92岁，平均81岁，均有典型的前列腺增生症临床表现。其中急性尿潴留65例，经B超检查，计算出前列腺体积30～120ml。尿流动力学检查患者尿流率曲线上升缓慢。表现TQmax延长。     

前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测

目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.     

术前新辅助靶向治疗联合机器人辅助腔镜手术治疗转移性肾癌

目的:对术前新辅助靶向治疗联合机器人腔镜手术治疗转移性肾癌的疗效进行评价。方法:回顾性分析我院2013年12月~2017年12月收治的18例术前新辅助靶向治疗联合机器人辅助腔镜手术治疗的转移性肾癌患者,对新辅助靶向治疗效果、不良反应以及机器人辅助腔镜手术的疗效进行评价。结果:舒尼替尼组10例患者治疗前原发灶直径为(5.21±0.71)cm,治疗后为(4.36±0.82)cm,P=0.024;索拉非尼组7例患者治疗前原发灶直径为(5.14±1.13)cm,治疗后为(4.6±1.4)cm,P=0.442;接受阿西替尼治疗的1例患者原发灶直径由5.2cm降至4.5cm;18例患者的原发灶直径由(5.18±0.85)cm降至(4.46±1.03)cm,P=0.029。接受舒尼替尼患者治疗前肺转移灶直径为(3.44±0.19)cm,治疗后为(2.87±0.19)cm,P=0.049;接受索拉非尼患者治疗前肺转移灶直径为(3.13±0.18)cm,治疗后为(2.73±0.18)cm,P=0.141;接受阿西替尼治疗的患者肺转移灶直径由2.8cm降至2.2cm;18例患者的肺转移灶直径由(3.28±0.13)cm降至(2.77±0.13)cm,P=0.009。接受舒尼替尼患者肝转移转移灶治疗前为3.5cm,治疗后为2.6cm;接受索拉非尼的患者治疗前肝转移灶直径为4.1cm,治疗后为3.8cm;接受阿西替尼治疗的患者肝转移灶直径由3.3cm降至2.2cm;3例患者的肝转移灶直径由(3.63±0.24)cm降至(3.10±0.35)cm,P=0.278,所有接受新辅助靶向治疗的患者仅发生1~2级不良反应。所有患者接受机器人辅助腔镜手术,其中行保留肾单位手术(NSS)17例,行根治性肾切除术(RN)1例。接受保留肾单位手术的患者术中肾动脉阻断时间为(12.64±1.69)min。术前与术后患者肾小球滤过率(GFR)比较差异无统计学意义。结论:术前新辅助靶向治疗可降低转移性肾癌的原发肿瘤直径,为患者赢得行NSS时机。机器人辅助腔镜手术具有热缺血时间短、创伤小等优势,可最大限度保护患者肾脏功能,使患者长期受益。这一结论仍需要大量多中心随机对照试验证实。