噬菌体基因组PaP1的鸟枪法测序及其生物信息学分析

目的对分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP1进行全基因组测序，并进行初步的生物信息学分析，为噬菌体的改造及其治疗奠定基础。方法采用鸟枪法随机测序和重叠群组装的策略对PaP1进行基因组测序，并通过EditSeq、开放读码框架（ORF）finder、GeneMark^TM、BPROM、FindTerm、Palindromes、Equicktandem及FAStRNA等软件对所获得的基因组序列的一般特征、蛋白质同源性序列及tRNA基因等进行分析和预测。结果PaP1基因组约为90000bp，其中最大重叠群为28249bp。在已获得序列中预测出120个ORFs、41个推定基因及9个簇集在5’末端的tRNA基因。在41个推定基因中，预测出编码DNA末端酶大亚单位、DNA解旋酶B亚单位、肽聚糖结合蛋白及3个尾丝蛋白等6个基因的功能。结论鸟枪法只能测出噬菌体基因组PaP1的部分序列，重复序列的存在是该基因组测序困难的原因。     

高温变性对双链DNA分子的损害

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这一事实 ,最近我们使用煮沸法来灭菌欲无菌保存的ＤＮＡ样品 ,结果意外发现 10 0℃加温处理可以不同程度地损害ＤＮＡ分子 ,引起了我们对高温变性处理双链ＤＮＡ分子的高度重视 ,特设计实验观察高温对ＤＮＡ损害的程度以及高温对不同来源ＤＮＡ的损害是否有差异。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验材料…     

儿童嗜麦芽窄食单胞菌感染特点及耐药性分析

目的分析该地区儿童嗜麦芽窄食单胞菌(SMA)感染的特点及菌株的耐药性,为临床治疗和预防该菌感染提供依据。方法统计分析2011年9月至2012年9月52例入住该院的SMA培养阳性患儿临床资料,并分析其抗菌药物敏感性试验结果。结果临床资料分析显示患儿感染SMA在年龄及性别上并无区别,在检出科室中以新生儿重症监护科(NICU)和儿童重症监护科(PICU)为主,有82.7%的感染SMA患儿都有侵入操作史,有95.92%的SMA患儿有碳青霉烯类药物使用史,感染SMA患儿住院时间较长,平均为(22.3±19.0)d;实验室资料分析显示SMA主要检出标本类型为痰液,占63.5%,4种临床常用药物耐药性较高,磺胺类药物最高达到21.9%。结论儿童SMA感染与碳青霉烯类药物使用及侵入性操作密切相关,耐药情况严重,合理使用抗菌药物成为治疗关键。     

医学微生物学教学改革的实践研究

本文旨在探讨医学微生物学教学改革的实践及效果.采取的方法有重组更新教学内容,反映学科的知识前沿,加强与学科课程间的横向联系,实验课教学相对独立,开设综合性和探索性实验课,构建医学微生物学教学新体系等.同时,编写配套的教学辅助教材.课程改革后的教学效果受到教学督导组和广大学生以及同行专家的肯定.     

HSV-1 UL15 exon-Ⅱ的原核表达及抗体制备

目的 构建pQE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ原核表达载体,在大肠埃希菌中高效表达并免疫家兔制备抗体.方法 以HSV-1感染后的Vero细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增HSV-1 UL15 exon-Ⅱ基因,克隆入原核表达载体pQE-31;重组质粒经酶切、测序鉴定无误后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE检测蛋白表达情况;表达蛋白用Ni-NTA亲和层析纯化及透析复性处理后免疫家兔制备特异性抗体,抗体的免疫原性用Western blotting进行检测.结果 通过RT-PCR扩增获得了HSV-1 UL15 exon-Ⅱ全长基因;构建的pOE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ重组质粒经酶切及测序鉴定无误;阳性转化菌株经WIG诱导后SDS-PAGE电泳显示表达蛋白的相对分子质量约为43 000,与理论值一致,蛋白表达率约为35%～40%;表达蛋白经纯化及透析复性后免疫家兔获得的抗血清经Western blotting鉴定具有较好的特异性和敏感性.结论 成功构建了pQE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ原核表达载体,诱导蛋白表达并进一步用表达的蛋白制备了特异性抗体,为HSV-1末端酶全长基因表达情况的鉴定及最终构建抗病毒组装药物的分子筛选模型奠定了前期实验基础.     

中西医结合治疗急性重症胰腺炎疗效观察

目的：探讨中西医结合对急性重症胰腺炎（SAP）的治疗价值。方法：将118例SAP患者随机分成A、B两组。A组采用中西医结合疗法,B组单纯用西医方法治疗。两组西医疗法完全相同。结果：A组治疗后血尿淀粉酶和C反应蛋白显著下降。A、B组并发症的发生率分别为14．70％、60．0％（P〈0．01）,病死率分别为18．64％、34％（P〈0．01）,中转手术率分别为4．41％、14％（P〈0．01）。结论：中西医结合方法治疗重症胰腺炎疗效显著,能明显降低病死率、中转手术率以及并发症发生率。     

增强CT对进展期胃癌术前的评估价值

目的探讨增强CT在术前评估进展期胃癌TNM分期、切除范围及手术方式中的价值。 方法回顾性分析2014年3月至2015年5月收治的150例进展期胃癌患者的资料,均经手术病理证实。所有患者术前均行上腹部增强CT检查,据此评估肿瘤的TNM分期,决策手术方式及切除范围,以手术及病理结果为标准判断增强CT分期的准确度。 结果在CT评估TNM分期方面,T分期准确度分别为：T2期84.0%（126/150）,T3期76.7%（115/150）,T4期92.7%（139/150）;N分期脾门、脾血管及腹主动脉旁区淋巴结判断的准确度较高（96.3%、97.0%、94.8%）,胃小弯侧淋巴结有较高的敏感度（87.0%）和特异度（96.6%）;M分期总体准确度和敏感度分别为87.3%（131/150）、93.3%（126/135）。在CT评估切除范围方面,对近端、远端次全切及全胃切除术预测的准确度分别为87.9%（29/33）、88.6%（62/70）,72.7%（32/44）。在评估手术方式方面,腹腔镜辅助与开腹的准确度分别为87.7%（100/114）、85.7%（30/35）。 结论增强CT在判断淋巴结转移及远处脏器转移方面有较高的准确度,在决策术式及切除范围方面有重要的参考价值,应作为进展期胃癌术前的一项常规检查。     

弥漫型胃癌淋巴道转移研究进展

弥漫型胃癌发病率高且易转移,综合治疗效果差,长期存活率低,对人类健康影响巨大。大部分进展期甚至早期弥漫型胃癌病人伴随淋巴道转移,是影响其术后存活率的重要因素。本文对相关文献加以综述,从术前病理分型、淋巴道转移程度的判断、对精准医疗的影响等方面进行讨论。     

一个承载分子的设计与肽抗生素hPAB-β的高效表达

目的 通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB-β，为大量制备hPAB-β奠定基础。方法 根据肽抗生素的特性，确立4条设计原则，并据此设计一489bp的承载蛋白编码序列，用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE-32中构建成表达载体，进一步将肽抗生素hPAB-β基因插入上述表达载体，肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列3'－端，两者构成融合基因，将含融合基因的表达载体转化大肠杆菌JM109，筛选阳性重组子，并用阳性重组子表达融合蛋白。结果 设计的承载蛋白为163个氨基酸，分子量17668.80，等电点5.621。用承载分子与肽抗生素hPAB-β构建的融合蛋白表达载体转化细菌后，筛选到4个阳性重组子，均能高效表达肽抗生素融合蛋白，融合蛋白的产量占细菌总蛋白的40％－45％。结论 设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生素的高效表达。