17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48 h;此后选用10-10mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L作用48 h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182,780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的 利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/β-catenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17β-E 2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用.方法 体外分离培养内异症患者ESCs,利用Lipofectamine TM 2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs.选用10 -10 mol/L 17β-E 2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达.结果 17β-E 2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10 -10 mol/L作用48 h最明显(P ＜0.05).转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均 P ＜0.05).结论 阻断Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制17β-E 2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用.雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植.     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用.方法 体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0～120 min),然后用MTT法和免疫印迹法(Western blot)检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化.结果 1×10-6 mol/L 的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关.     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对17β-雌二醇作用后子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞活化的影响

目的 探讨17β-雌二醇(17β-E2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对ESC活化的影响.方法 体外分离培养内异症患者在位ESC,用0.1 nmol/L 17β-E2处理ESC 48 h.免疫细胞化学染色检测17β-E2作用后β-cate-nin在ESC中的表达.通过转染T细胞因子(T-cell facter,TCF)依赖的荧光索酶报告质粒(PGL3一OT)检测ESC内的Wnt/β-catenin信号,以PGL3-OF为阴性对照.将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染ESC,阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Western blot法检测ESC血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化.结果 免疫细胞化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在ESC核内的表达.17β-E2(0.1 nmol/L)作用后,转染相同量的质粒,PGL3-OT组细胞荧光活性明显高于PGL3-OF组(P<0.01).Western blot检测结果显示17β-E2能明显促进ESC VEGF和MMP-9的表达;转染dnTCF-3阻断Wnt/β-catenin信号通路,ESC中VEGF和MMP-9的表达较转染空载体(pcDNA3)组均显著下降(均P<0.01).结论 17β-E2能促进内异症患者ESC Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制ESC的活化.     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜问质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-立群雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48h；此后选用10^-10mol／L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blotting）检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182，780（10μmol／L）对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达，并呈剂量和时间依赖性，于10^-10mol／L作用48h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182，780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt／β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的影响

目的:探讨Wnt信号通路在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:体外分离培养内异症患者在位内膜间质细胞,应用RT-PCR检测不同浓度(0mol/L,10-14mol/L,10-12mol/L,10-10mol/L,10-8mol/L,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用子宫内膜间质细胞48h和17β-E2(10-10mol/L)作用子宫内膜间质细胞不同时间(0h,12h,24h,48h)后β-catenin mRNA的表达水平。同法检测雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA表达的影响。结果:17β-E2体外能明显促进在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L17β-E2作用48h最明显。ICI182,780能明显抑制雌激素对在位内膜间质细胞β-catenin mRNA的表达。结论:Wnt信号通路可能参与了EMs的发生及发展。     

宫腔镜防治人工流产术后宫腔粘连的时机探讨

目的:探讨宫腔镜防治人工流产术后宫腔粘连的最佳镜检时机。方法:选择2010-05-2011-03期间我院门诊诊治的80例人工流产术后未来有生育要求的患者,按人工流产术后复诊时间分两组进行宫腔镜检,三个月内组为A组,三个月以后组为B组,比较两组镜检及治疗结果。结果:A组发现的宫腔粘连多为Ⅰ～Ⅱ度,B组发现的宫腔粘连多为Ⅲ～Ⅳ度,说明宫腔粘连的发生程度与术后时间存在明显关联。A组宫腔镜电切治疗后月经恢复率比B组高。结论:人工流产术后早期宫腔镜检,能及时发现宫腔粘连的发生,有效预防、阻止宫腔粘连的发展,宫腔粘连的早期发现和治疗能改善患者生育条件,有利于提高术后妊娠率。     

成人型卵巢颗粒细胞瘤合并高黄体生成素血症2例报告并文献复习

卵巢颗粒细胞瘤(granulosa cell tumor,GCT)是起源于卵巢颗粒细胞的低度恶性肿瘤,占卵巢恶性肿瘤的1%~3%[1],是最常见卵巢性索间质肿瘤,约占70%[2]。GCT具有分泌激素的功能,最常见为雌激素,故临床多表现为与雌激素升高的相关症状,而仅2%~3%的GCT分泌雄激素[3]。本文报道2例主要表现为高雄激素血症、高黄体生成素(luteinizing hormone,LH)血症及继发闭经的成人型颗粒细胞瘤(adult granulosa cell tumor,AGCT)病例,并结合文献复习,现报道如下。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞PI3K/Akt信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞磷脂酰肌醇3激酶/Akt(PI3K/Akt)信号转导通路活化的影响,探讨PI3K/Akt信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用. 方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0、10、20、30、120 min),然后用MTT法检测子宫内膜间质细胞的活性,Western blot法检测细胞Akt的活化情况,确定子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度PI3K抑制剂LY294002对1×10-6 mol/L 17β-E2作用子宫内膜间质细胞20 min后Akt、细胞活性的影响. 结果 1×10-6 mol/L 17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,Akt活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着LY294002作用浓度的增加,Akt活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着LY294002作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强在位子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的PI3K/Akt信号转导通路有关.     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的 探究子宫内膜异位症（EM）患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞（ESCs）中miR-539表达水平, 以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9（MMP-9）对ESCs侵袭和迁移的影响。方法 收集60例EM患者子宫内膜异位 组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平, 并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics 组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移; Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 mRNA水平 显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9 具有明显的靶向关系（P＜0.05）。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数 量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）;与inhibitors NC组相比,miR-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕 愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。结论 miR-539可靶向调节MMP-9表达水 平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。