尿道下裂修复方法的临床研究进展

尿道下裂是男性常见的泌尿生殖系统畸形,手术是惟一有效的治疗手段.但目前尚无一种公认的、令人满意的手术方式.尿道下裂手术方式正在不断改进发展.尿道下裂修复术后的治愈标准为[1]:①阴茎下曲完全矫正,阴茎头下曲常表现为球状阴茎头,也应矫正,恢复其正常圆锥状;②尿道口位于阴茎头尖;③阴茎外观满意,接近正常,能站立排尿,成年后能进行正常性生活.     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

Objective To obtain shRNA sequences that can stably block the expression of Nuclear Factor kappa- B (p65) in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector.And validate the gene function of p65 in the cell line. Methods According to p65 genetic information, we design siRNA1, siRNA2, siRNA3 those three siRNA sequences targeting the ods area of p65 gene and then form the corresponding four pairs of complementary single strand DNA of shRNA, including the sense strand and the antisense strand. The synthetic shRNA sequence was inserted into the empty pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector, and after transfecting the prostate cancer cells , the inhibitory effect of p65 mRNA by different sequences was detected through real-time PCR, and the inhibitory effect of p65 protein expression was detected by Western-blotting. Thus we can obtain highly effective shRNA sequences in the inhibition of p65 in prostate cancer cells. MTT, flow cytometry, transwell were chosen to test the cell growth, migration and invasive power in vitro to compare the difference of the experimental group, control group and negative group. Results The third shRNA sequence had the best inhibitory effect and the inhibitory effect of p65 mRNA in prostate cancer cell line was 59 % and the protein was 81%. It's position locates in p65 (NM_021975 ) 1096-1113 and it's stemloop sequence is 5'-GATCCGCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGATGACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'. After transfecting, the prostate cancer cell line had the low expression of p65 stably. Through MTT, we got the growth curve, which showed that the growth ability of experimental group was significantly decreased compared with the control group and the Logarithmic growth didn't appear in the first 96 hours. Flow cytometry test displayed that the percentage of G0-G1-phase cells in experimental group was 61.49%, and the control group was 44.89%, idle group was 41.52%, which was increasing oberviously. The S-phase cells in the experimental group was 28.58%, compared with the 47.36% and 46. 10% diminished. The results of transwell showed that the experimental group had 16. 5000±6. 62076 cells and the other two groups had 45. 6333 13. 54159 and 36. 8333±5. 68412 cells, which showed the invasive power of experimental group was significantly declined(P＜0.05).Conclusions It's successful to obtain shRNA sequences that can stably block the expression of p65 in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector. p65 can positively regulates the biological behavior of prostate cancer LNCaP cell line in the cell growth, migration and invasive power.     

膀胱癌细胞株T24中侧群细胞的分离和功能鉴定

目的 观察膀胱癌细胞株T24中是否存在侧群(SP)细胞及其比例,并鉴定其功能.方法 利用双波长流氏细胞仪(FACS)检测T24中SP细胞的比例,并证实这些SP细胞是否具有癌干细胞的特点.结果 T24中SP细胞占34.7%;与非侧群(NSP)细胞比较,SP细胞有更强的生长增殖能力和克隆形成能力(P＜0.05),表达更高的ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和干性基因,对放化疗有更强的抵抗能力,有更多的细胞处于G_0/G_1期(87.4%比63.3%,P＜0.05);分选后的sP和NSP细胞经过约10 d的常规培养,SP细胞中NSP的比例占76.2%,而NSP细胞中SP的比例只占2.6%.结论 膀胱癌细胞株T24中存在很高比例的SP细胞,而且这些SP细胞有癌干细胞的特点.     

隐睾合并对侧变通性鞘膜积液的腹腔镜治疗

隐睾是泌尿外科常见的临床畸形,高位隐睾合并对侧交通性鞘膜积液并不少见,临床上在行腹腔镜隐睾下降固定式时,往往忽视对侧内环口的观察,遗漏对侧潜在发生交通性鞘膜积液的可能。笔者自2007     

高效抑制核因子κ—B的茎环RNA基因序列的获得

目的获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列。方法根据核因子kappa—B基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对核因子kappa-B基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链：正义链序列按5’向3’顺序依次为：酶切位点（BamH Ⅰ）、干扰序列（19bp）、loop环（TFCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19bp）、中止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoR Ⅰ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real—timePCR检测不同序列片断对核因子kappa—B的mRNA抑制效果。结果设计的3条针对核因子kappa—B的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于核因子KAPPA—B（NM_021975）的1096到1113,茎环序列为5＇-GATCC GCCCTATCCCTITACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTITT G-3’。其对前列腺癌细胞株中核因子kappa—B的mRNA的干扰效率为59％,对其蛋白表达的抑制率为81％。转染细胞后,细胞可以稳定低表达核因子kappa—B。结论成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列,为后期研究核因子kappa-B在前列腺癌发病中的作用机理等研究提供了基础。     

保留前列腺包膜的膀胱全切除-原位回肠新膀胱术

目的 探讨保留前列腺包膜的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术的手术方法及疗效.方法 2002年5月至2008年9月,对35例浸润性膀胱癌患者施行了保留前列腺包膜的膀胱根治性切除-原位回肠新膀胱术,其中开放手术22例,腹腔镜手术13例.术中保留患者的前列腺包膜、精囊、输精管、神经血管束.术后对患者进行定期随访,了解患者的生活质量、排尿情况,并检测患者的残余尿量、新膀胱压力及性功能情况等.结果 全部患者均顺利完成保留前列腺包膜和勃起神经的膀胱根治性切除一原位回肠新膀胱术.其中开放手术时间为210～330 min,平均271 min;术中出血200～800 ml,平均460 ml.腹腔镜手术时间为210～420 min,平均343 min;术中出血80～800 ml,平均377 ml.术后3个月IVU及代膀胱造影检查,显示双肾显影良好,无输尿管返流及梗阻,代膀胱充盈良好,容量约250～350 ml.术后6个月随访,所有患者均能自行排尿,2例患者有夜间尿失禁.术后71.4%(20/28)的患者保留了阴茎勃起功能.无患者出现尿道残端或前列腺包膜肿瘤复发,有2例发生盆腔淋巴结转移,1例骨转移.结论 保留前列腺包膜的膀胱根治性切除术与标准的膀胱前列腺根治性切除术相比,具有操作简单、控尿效果好、可保留勃起神经等特点,适用于对性功能要求较强、肿瘤未累及膀胱颈及前列腺的较年轻的患者.然而,其肿瘤控制效果还有待于进一步观察.     

13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的： 探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法：140 mg/L 13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK）,p38, Fas 相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果：流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论：13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

螺旋CT肾动脉成像在腹腔镜肾部分切除术中的应用

目的：探讨术前肾血管CT血管成像（CTA）在指导腹腔镜下肾部分切除术中血管处理的作用。方法：15例患者中肾癌9例,肾错构瘤6例。术前均行。肾血管CTA。经腹膜后入路施行腹腔镜肾部分切除术,术中根据CTA提示寻找并阻断肾动脉。结果：CTA示肾门前肾动脉分支3例,占总病例数20％。副肾动脉1例,占总病例数6．7％。术中探查均发现CTA所提示的异常血管,探查未发现其他异常动脉。本组15例全部手术成功。结论：CTA能清楚显示血管的解剖及变异,为术中处理肾动脉提供有效的指导。     

一个影响前列腺癌中L-plastin启动子转录活性的多态性位点的成功鉴定

目的研究已发现的前列腺癌中L-plastin启动子一个多态性位点对其转录活性的影响和意义。方法扩增前列腺癌细胞株LNCaP中L-plastin启动子序列,发现在距离转录起始点-1751上存在多态性位点T后,利用定点突变技术构建文献报道的启动子序列质粒(-1751C),测定含-1751T质粒和含-1751C质粒的荧光素酶活性。用巢式PCR扩增前列腺癌细胞株和癌组织中该位点序列,并进行单链构象多态性分析。结果成功构建L-plastin启动子,并发现一个位于-1751的多态性位点(C/T);成功构建启动子序列含-1751C质粒;荧光素酶活性测定表明(-1751C)质粒启动子转录活性为(-1751T)质粒的4~5倍,2者受到雄激素刺激后活性均升高;单链构象多态性分析表明该位点多态性普遍存在于前列腺癌患者和细胞株。结论鉴定了一个普遍存在于前列腺癌的L-plastin基因启动子的多态性位点,含有不同碱基位点的启动子的转录活性明显不同。     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。