纳秒级陡脉冲电场诱导癌细胞凋亡的实验及作用机理研究

观察纳秒级陡脉冲电场诱导人浆液囊腺性卵巢癌SKOV3癌细胞凋亡效应,及其对细胞内钙离子浓度即[Ca2＋]i的影响并探讨其作用机理。采用场强为10kV/cm、脉宽为100ns、重复频率为1Hz的纳秒级陡脉冲电场作用于SKOV3癌细胞悬液5min。4h后采用Annexin V-FITC/PI双标记并结合流式细胞仪分析SKOV3癌细胞的凋亡率,采用扫描和透射电子显微镜观察癌细胞凋亡的超微结构变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲电场对SKOV3癌细胞[Ca2＋]i的影响,及[Ca2＋]i变化时的Ca2＋来源。结果显示,流式细胞术检测到癌细胞的早期凋亡率为（22.21±2.71）%,明显高于对照组的（3.04±0.44）%（P〈0.01）,扫描和透射电子显微镜均观察到典型的凋亡细胞形态,证实纳秒级陡脉冲电场能够有效诱导SKOV3癌细胞发生凋亡;同时纳秒级陡脉冲电场可明显升高细胞[Ca2＋]i（P〈0.01）,而与细胞外钙离子浓度无关（P〉0.05）。由于纳秒级陡脉冲电场的等值频率很高,容易穿透细胞膜,其诱导凋亡的机制之一可能是通过激活细胞内钙库（内质网、线粒体）,引起细胞内钙离子升高,从而介导凋亡信号通路。     

纳秒级陡脉冲可用于治疗裸鼠人恶性黑色素瘤

 摘要 目的:观察纳秒级陡脉冲(Nanosecond Pulsed Electric Fields, nsPEF)治疗裸鼠皮下人恶性黑色素瘤的效果及其机制。方法：建立裸鼠皮下人黑色素瘤模型,随机分为长期治疗组及对照组各10只,观察肿瘤生长、裸鼠存活率时间,和短期治疗组(=10;分2h、4d组及对照组(分别为4、6和6只),以HE染色检查细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳、TUNEL法分析细胞凋亡,Western blot法、免疫组织化学方法分析组织肿瘤Bax、Bcl-2的表达。两组均用电场峰值40kV/cm、脉冲宽度200ns、频率1Hz、脉冲次数1000个的nsPEF进行治疗。结果：长期治疗后即刻看到肿瘤区均变为灰白色,表面皮肤均没有出血现象,肿瘤质地变硬;随生存时间延长,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.01);平均生存时间（天）较对照组（天）明显延长(P<0.01);短期治疗组,4d时坏死区域增多;4d时琼脂糖凝胶电泳显示较对照组有明显“ladder”状分布,凋亡率明显高于对照组(P<0.01),较对照组相比Bax表达明显增高(P<0.01)、而Bcl-2表达明显降低(P<0.01)。结论：nsPEF对裸鼠皮下人黑色素瘤有明显的治疗效果,可能是通过调控Bax、Bcl-2 基因表达诱导细胞凋亡。     

子宫肌瘤的微创治疗现状

子宫肌瘤足女性生殖器官中最常见的良性肿瘤,常见于30～50岁妇女。随着现代医学的发展,越来越多的妇女对生活质量的更高要求,新的治疗手段应运而生。近年来,微创技术在子宫肌瘤的治疗上有了快速的发展,将成为未来治疗子宫肌瘤的主要趋势,现将子宫肌瘤的微创治疗现状综述如下。     

腹腔镜在早期诊治异位妊娠中的价值

目的探讨腹腔镜对异位妊娠的早期诊治价值。方法收集自1996年1月至2003年12月在我院以临床怀疑异位妊娠进行腹腔镜检查的146例患者的临床资料。结果除1例为子宫内孕外,145例患者均为异位妊娠。其中85例患者有流产或破裂征象,盆腹腔内少量积血,平均出血量30ml,60例患者病变部位完整,无腹腔内出血。同时在腹腔镜下进行手术144例。结论腹腔镜能及时、准确地对不典型的异位妊娠作出早期诊断和及时治疗,避免并发症的发生。     

钙离子在纳秒级陡脉冲诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡通路中的作用

摘要：目的证明纳秒级陡脉冲能够诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡,且钙离子是其凋亡通路的重要介质。方法用不同参
数组的纳秒级陡脉冲处理细胞,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测其早期凋亡率及坏死率,用0、25、50、100 μmol/L BAPTA-
AM分组螯合细胞内因纳秒级陡脉冲处理而增高的游离Ca2+后,MTT检测细胞存活率,Hoechst33342荧光染色检测细
胞凋亡率,Western-blot技术检测caspase12蛋白表达的变化。结果Annexin V/PI双染流式细胞术结果示：最佳治疗参数
为场强90KV/cm;脉宽：100 ns;脉冲作用时间：30 s;频率：1Hz,其凋亡率最高(60.31±5.67)%,坏死率为(1.35±0.39)%;
BAPTA-AM作用过的细胞经纳秒级陡脉冲最佳治疗参数处理后细胞存活率明显高于单用纳秒级陡脉冲处理的细胞（P<
0.05）,凋亡率也同时降低（P<0.05）,caspase-12蛋白表达水平也相应降低（P<0.05）。结论纳秒级陡脉冲能诱导SKOV3
细胞凋亡,细胞内游离的钙离子增高是其凋亡通路的重要介质,并有可能介导内质网通路。     

二氧化碳气腹环境对人卵巢癌细胞系SKOV3侵袭能力的影响

目的 研究腹腔镜手术中二氧化碳(CO2)气腹环境对恶性卵巢肿瘤细胞黏附、侵袭能力的影响,探讨恶性肿瘤行腹腔镜手术的安全性.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,模拟腹腔镜CO2气腹环境处理肿瘤细胞,噻唑蓝比色(MTT)法和Boyden小室侵袭运动实验检测SKOV3细胞的黏附、运动和侵袭能力;免疫组化和半定量RT-PCR方法检测SKOV3细胞黏附分子CD44及促血管生成因子bFGF的蛋白和mRNA表达.结果 与对照组比较,CO2处理组细胞对人工基底膜的黏附力明显增加(P＜0.01);处理组细胞运动和侵袭能力明显增强(P＜0.01);其CD44和bFGF蛋白分泌和mRNA表达量显著增加(P＜0.05).结论 CO2气腹环境能促进体外培养的恶性卵巢肿瘤细胞的侵袭转移,其作用机制可能与其促进卵巢癌细胞异质黏附和运动能力;增加细胞黏附分子和促血管生成因子的表达有关.     

SHORT－TIME ANALYSIS FOR ADJUVANT CHEMOTHERAPY IN PATIENTS WITH EARLY－STAGE BULKY CERVICAL CARCINOMA

Bulky early-stage cervical cancer is defined as stage I~IIa cervical carcinoma with the diameter of enlarged cervix reaching 4 centimeters or more. These patients have higher recurrence rate and poor prognosis compared to those with smaller tumors at the same stage[1-3]. In or study, 21 patients with early-stage bulky cervical cancer were assigned to receive the addition of cisplatin-based chemotherapy for 1~2 courses followed by radical hysterectomy and the effect was analyzed. MATERIS…     

米非司酮治疗异位妊娠23例临床分析

随着高灵敏度血清ＨＣＧ检测方法及Ｂ超在妇产科的应用,异位妊娠的早期诊断率不断提高,这为其非手术治疗创造了条件。既往已有ＭＴＸ、５－ＦＵ等抗代谢药物及中药治疗异位妊娠成功的报道。我们采用新型口服抗孕激素药物米非司酮治疗异位妊娠２３例,分析如下：１资料与方法１．１研究对象１９９７年１月至７月,在我院就诊符合本研究适应症的异位妊娠患者２３例。年龄２１～３６岁,平均２６．３岁。有少量不规则阴道流血２３例,流血时间２～３０天,下腹隐痛５小时～２７天１８例,肛门坠胀２～３天２例,有停经史１３例,停经３６～４…