粉防己碱对兔瘢痕组织作用的实验研究

目的 :研究粉防己碱对兔病理性瘢痕的组织学作用 ,为瘢痕治疗提供一种新方法。方法 :采用兔耳腹侧瘢痕模型 ,用粉防己碱 5 0mg /ml、粉防己碱 10mg /ml、去炎松 40mg /ml及生理盐水分别注入瘢痕组织 ,图像分析瘢痕组织中成纤维细胞数量和胶原含量的变化。结果 :粉防己碱治疗组瘢痕组织中成纤维细胞数量与胶原含量均明显减少 ,呈剂量效应关系 ;与生理盐水对照组比较 ,有极显著差异 (P <0 .0 1) ;与去炎松对照组比较无显著差别 (P >0 .0 5 )。结论 :粉防己碱抑制瘢痕组织中成纤维细胞增殖 ,并使胶原合成减少 ,从而抑制瘢痕组织生长 ,有望成为防治病理性瘢痕的新药物     

烧伤患者血清sIL-2R水平的观察及临床意义

为探讨烧伤患者伤后免疫功能紊乱的可能机制以及烧伤患者病情监测、免疫状况评估的观察指标 ,动态观察了 35例大面积烧伤患者伤后一周、二周、三周及四周血清可溶性白介素 - 2受体 (s IL - 2 R)水平 ,并据烧伤严重程度分中、重、特重度烧伤组进行比较观察。结果发现 :(1)烧伤患者 s IL- 2 R水平明显高于正常对照组 (P<0 .0 1) ,至伤后四周仍无恢复 ;(2 )特重度烧伤患者 s IL- 2 R水平明显高于重度烧伤患者 ,重度烧伤患者 s IL- 2 R水平明显高于中度烧伤患者 (P<0 .0 1)。结论 :升高的 s IL- 2 R是影响烧伤患者免疫功能的众多原因中的重要原因之一 ,伤后 s IL- 2 R水平的观察对烧伤患者病情的监测及免疫状况的评估有一定的临床意义。     

几种生长因子在人表皮细胞无血清培养中的作用

目的为生长因子在烧伤创伤面的应用提供理论依据。方法采用无血清培养系统,以3H－TdR掺入法测定表皮生长因子（EGF）、牛垂体提取物（BPE）和乙醇胺（Etha）对人表皮细胞DNA合成的影响。结果EGF和BPE在无血清培养基中对培养表皮细胞DNA合成有明显的促进作用（P＜0．01）;Etha对培养表皮细胞DNA合成也有促进作用（P＜0．05）;EGF和Etha在本培养体系中具有协同作用（P＜0．05）。结论生长因子在烧伤创面的治疗中具有应用价值。     

粉防己碱对PDGF、TGF-β诱导瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的:探讨粉防己碱对血小板衍生生长因子(PDGF-BB)、转化生长因子β(TGF-β)诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的干预作用.方法:体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞加入PDGF-BB、TGF-β、粉防己碱, 用3H-TdR掺入法和3H-脯氨酸掺入法测定粉防己碱干预下PDGF-BB、TGF-β诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的变化.结果:粉防己碱在不抑制瘢痕成纤维细胞DNA合成的药物浓度(3μg/ml)时即可显著抑制其胶原合成,并可显著抑制PDGF-BB和TGF-β诱导的实验细胞DNA及胶原合成.结论:粉防己碱可抑制PDGF-BB、TGF-β诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成.     

注射用A型肉毒毒素联合眼袋整形术治疗眼周皮肤松弛的效果研究

目的：研究注射用A型肉毒毒素联合眼袋整形术治疗眼周皮肤松弛的临床意义。方法：选2011年1月至2012年1月我院89例求美者随机分为联合组（注射用A型肉毒毒素联合眼袋整形术组）和对照组（单纯眼袋整形术组）两组,其中联合组45例（90只眼）,对照组44例（88只眼）,观察不同治疗方案对患者术后满意度、鱼尾纹及眼袋减轻程度、皮肤光泽增强程度、不良反应发生率等指标的影响。结果：治疗后联合组各项有效指标的改善均优于对照组（P〈0．05）。在静态、动态情况下,联合组较对照组鱼尾纹及眼袋明显减轻,皮肤光泽增强,术后满意度高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。联合组与对照组发生不良发应差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：注射用A型肉毒毒素联合眼袋整形术较单纯眼袋整形术在治疗眼周皮肤松弛时使鱼尾纹及眼袋减轻程度更明显,皮肤光泽增强程度高,术后满意度高,显著改善了眼周皮肤状况,有显著的,临床意义。     

Experimental study on effect of endothelin in the proliferation and collagen synthesis of human scar-derived fibroblasts

Objective To investigate the role of endothelin(ET) in the proliferation and collagen synthesis of human scar-derived fibroblasts and the moduktion of its antagonists such as nitric oxide(NO), tetrandrine ( Tet). Methods With the cultured fibroblasts from the scarring tissue, the cell pdiferation was determined by[3H]-TdR incorporation, while the collagen synthesis was evaluated by[3H]-proline incorporation. Results The ET-1 was significantly increasing the proliferation and collagen synthesis of human scar-derived fibroblasts. The values of [3H]-TdR absorption in the 2.5 ng/ml,25 ng/ml and 100 ng/ml of ET-1 groups were 1.8 times,4 times and 4.9 times more than in the control group, respectively(P<0. 01),while the values of the [3H]-proline incorporation were 1.1 times,3.1 times and 3.8 times respectively(P<0.01). The fibroblasts, treated with 50 μg/ml of S-nitroso-N-acetyl penicillamine(SNAP), were no detectable effect on the basal level of DNA synthesis,but produced decreasing effect on the [3H]-TdR     

血管内皮生长因子165基因修饰人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质构建活性组织工程皮肤

背景:利用组织工程原理构建的人工皮肤替代物用于皮肤移植可有效解决供皮不足这一难题,但组织工程皮肤很大程度上受制于移植物血管网缺乏造成的细胞供养障碍而导致失效。目的:以血管内皮生长因子165基因修饰的人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质,拟构建活性组织工程皮肤。设计、时间和地点:以基因工程为基础的组织构建实验,于2008-03/06在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料:普通级新西兰大白兔5只用于提取脱细胞真皮基质原料,由南昌大学医学院动物科学部提供,人骨髓间充质干细胞取自临床骨髓穿刺检查正常的患者,pShuttle-CMV/VEGF165质粒转化大肠杆菌菌种由武汉协和医院郜勇博士惠赠。方法:无菌条件下切取兔耳全层皮肤,将2cm×2cm皮片置于0.25%胰酶-EDTA消化液中去掉表皮,再置入曲拉通X-100溶液使真皮细胞完全脱净,磷酸盐缓冲液反复清洗,即为脱细胞真皮基质,4℃保存备用。采用密度梯度离心与贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,按5×105/孔密度接种,待细胞达80%融合时进行脂质体介导的pShuttle-CMV/VEGF165质粒转染,接种于制备好的脱细胞真皮基质上体外联合培养。主要观察指标:骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质的形态观察,组织工程皮肤结构观察。结果:体外培养的骨髓间充质干细胞大部分呈梭形,基因转染后细胞形态及活性无明显影响;脱细胞真皮基质呈瓷白色,柔韧有弹性。血管内皮生长因子165基因修饰的骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质共培养2d后,所构建的组织工程皮肤呈淡红色,质软,接种细胞生长状态正常,苏木精-伊红染色及扫描电镜观察可见在脱细胞真皮基质的间隙中有大量长梭形细胞附着生长。结论:血管内皮生长因子165基因转染的人骨髓间充质干细胞在兔脱细胞真皮基质中生长良好,可在体外联合构建活性组织工程皮肤。     

现代敷料研究现状

传统的纱布敷料于创面修复中仅起单纯覆盖创面的作用,随着分子生物学的迅速发展,现代敷料不仅要覆盖创面,还应具有促进组织修复的功能。文章就创面保湿环境愈合新概念和创伤敷料的研究现状作一阐述。     

脱细胞角膜基质与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化活性人工角膜

目的:观察以脱细胞角膜基质作为支架材料、以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合构建组织工程化人工活性角膜的可行性。方法:实验于2004-09/2005-06在南昌大学江西医学院烧伤研究所完成。①取兔新鲜角膜,浸入1.25g/L胰蛋白酶和0.1g/L乙二胺四乙酸溶液中作用24h,然后浸入1%曲拉通X-100溶液中作用120h,制备成脱细胞角膜基质,进行常规组织学苏木精-伊红染色观察。②采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化人骨髓间充质干细胞,用含10μg/L表皮生长因子的Dulbecco最低必需培养基进行诱导培养。③将经诱导培养的骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,复合构建组织工程化人工活性角膜,观察细胞与材料的黏附、细胞增殖情况。结果:①脱细胞角膜基质主要由胶原纤维组成,未见细胞成分残留。②经表皮生长因子诱导培养的人骨髓间充质干细胞体外增殖良好,24h后贴壁细胞增多,7～10d细胞多为梭形,呈有规则的集束辐射状排列;14～21d左右细胞基本融合。③将人骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,细胞铺展和增殖良好。结论:以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合脱细胞角膜基质支架材料可成功构建组织工程化人工活性角膜,有望成为一种修复角膜缺损的新技术方法。     

人血管内皮生长因子165基因转染人骨髓间充质干细胞的实验研究

Objective To establish an effective method of transfecting human marrow mesenchymal stem cells (MSC) with human vascular endothelial growth factor 165 ( VEGF 165) gene. Methods MSCs isolated and cultured in vitro were divided into transfection group (pShuttle-CMV/VEGF 165 plasmid was transfected into MSCs through liposome-mediating method), empty plasmid group (pShuttle-CMV vehi-cle was transfected into MSCs as control), liposome group (liposome was transfected into MSCs as control) and control group(normal culture). Expressions of Mrna and protein of MSCs were determined by RT-PCR, enzyme-linked immunosorbent assay and Western Blot. Sensitivity to MSCs on VEGF plasmid transfec-tion was detected by MTT test. Results Expression level of VEGF 165 gene Mrna in transfection group, empty plasmid group, liposome group, and control group was respectively 0.89 ± 0.03, 0. 34 ± 0.04, 0.40 ± 0.03, and 0.30 ± 0.03, and the difference between transfection group and the other three groups was statistically significant ( P <0. 01 ). Content of VEGF protein in transfection group, empty plasmid group, liposome group, and control group was respectively (778 ± 35 ), (543 ± 24), (561 ± 28), (571 ± 23) pg/Ml, and the difference between transfection group and the other three groups was statistically significant ( P <0.01 ). In the transfection group, expression level of VEGF protein peaked on 7th day after transfec-tion, which was decreased gradually later. In transfection group, expression level of V EGF 165 protein was obviously higher than that of the other three groups ( P <0. 01 ), and no inhibitory effect of VEGF plasmid transfection on MSCs proliferation was found. Conclusions The method for transfecting human VEGF 165 gene into MSCs is established in this research, through which target gene and protein can express effectively.