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目的 研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对人血清白蛋白(HSA)致人肾近曲小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-β1、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连蛋白(FN)表达的影响,并探讨有关机制。方法 构建TGF-β1shRNA的pcDU6载体质粒,体外培养HK2细胞株。采用脂质体转染将表达TGF-β1shRNA的pcDU6质粒载体(pcDU6-A1-A2和peDU6-B1-B2)分别导人实验组细胞。用HSA(5g/L)刺激HK2细胞12h或24h。四甲基偶氮唑盐(MTF)比色法测定细胞增殖水平。RT-PCR半定量分析HK2细胞中TGF-β1、CTGF和FNmRNA的表达水平;双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-β1及FN蛋白质水平。结果 HK2细胞在HSA刺激下,其TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显上调,培养液中TGF-β1和FN的蛋白质含量亦明显升高(P〈0.05)。与pcDU6空载体组比较,pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA干扰组TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显下调(P〈0.05)。TGF-β1shRNA转染HK2细胞后12h或24h,细胞培养液中TGF-β1和FN蛋白质含量明显下降,HK2细胞增殖被部分抑制(P〈0.05)。在细胞增殖、TGF-β1、CTGF及FN基因表达方面,TGF-β1shRNA干扰组组间比较,以及pcDU6空载体转染组与HSA刺激组比较,差异均无统计学意义。结论 peDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制HSA刺激下HK2细胞增殖、TGF-β1、CTGF和FN基因的表达。HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-β1介导。 相似文献
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目的 研究PPAR -γ激动剂Troglitazone对高浓度葡萄糖作用的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的影响。方法 用高浓度葡萄糖和不同浓度Troglitazone作用大鼠肾小球系膜细胞 ,ELISA法检测上清液中mPGEs浓度。结果 5 %葡萄糖可使体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ( P <0 0 5 ) ;10~ 2 0nmol/L的Troglitazone可明显抑制 5 %葡萄糖诱导的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高 (P <0 0 5 )。结论 高浓度葡萄糖可诱导体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ,PPAR -γ激动剂Troglitazone可明显抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高 相似文献
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目的研究年龄对雄性大鼠碘对比剂急性肾损伤(CI.AKI)的影响。方法36只雄性SD大鼠根据月龄分为4月龄组、12月龄组和24月龄组,每组12只,各年龄组大鼠再随机分为正常对照组和对比剂组6个亚组,每组6只。禁水24h后,不同年龄鼠对比剂组大鼠尾静脉注射碘对比剂76%泛影葡胺(10ml/kg),相应对照组大鼠尾静脉注射等量生理盐水。检测尿肌酐(UCr)、尿N-乙酰-B.D.氨基葡萄糖苷酶(NAG)、血肌酐(SCr)、内生肌酐清除率(Ccr)、肾组织匀浆脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及血管紧张素转换酶(ACE)活性水平。48h后处死动物,观察肾脏的病理改变并检测。肾组织Sp1蛋白表达。结果注射对比剂后48h,24月龄鼠对比剂组SCr水平显著升高(P〈0.01),且升高幅度超过对照组的25%,Ccr明显下降(P〈0.05),肾组织匀浆ACE活性和MDA含量和肾小管损伤分数均明显增加(P〈0.01),肾组织Sp1蛋白的表达明显上调(P〈0.05);注射对比剂后24h尿NAG酶活性明显较注射前24h增高(P〈0.001)。12月龄鼠注射对比剂组与相应对照组比较,Scr明显上升(P〈0.05),但升高幅度小于对照组的25%,肾组织匀浆MDA和ACE、肾小管损伤分数以及肾组织Sp1蛋白表达有上升趋势,但均无统计学意义(P〉0.05)。4月龄鼠注射对比剂组与相应对照组相比,上述各项指标比较均无统计学意义(P〉0.05)。结论增龄是雄性大鼠碘CI—AKI的促进因素,氧化性应激、ACE和核转录因子Sp1在老龄雄性大鼠碘CI-AKI发病机制中起一定作用。 相似文献
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目的转化生长因子-β1(TGF-β1)是腹膜纤维化的关键介质之一,在此前的实验中已经制备了靶向TGF-β1的shRNA表达质粒。本研究使用化学修饰的方法制备了一种新型的非病毒载体-磷酸钙纳米颗粒(CPNP),透射电镜和Zeta电位显示其直径23.5~34.5nm,表面电荷为+16.8mV。在本研究中探讨使用CPNP介导转染shRNA质粒,研究其对高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表达TGF-β1和纤维连接蛋白(FN)的影响。方法shRNA表达质粒或作为对照的空白质粒在磷酸钙纳米颗粒介导下转染体外培育的HPMC,转染后的细胞被高浓度D-glucose(50mmol/L)刺激48h,然后监测TGF-β1和FN的表达。结果HPMC被高浓度葡萄糖刺激48h后其TGF-β1和FN的表达均上调,而使用磷酸钙纳米颗粒介导转染shRNA表达质粒则可明显抑制高糖对TGF-β1和FN的诱导效应。结论鉴于shRNA表达质粒对腹膜间皮细胞TGF-β1的有效抑制和CPNP的载体作用,我们认为联合shRNA表达质粒和CPNP可能成为腹膜纤维化基因治疗极具前景的新方法。 相似文献
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目的建立与应用持续性非卧床腹膜透析(CAPD)患者健康教育考核体系,以提高患者自我管理能力,减少CAPD并发症。方法将首次住院行腹膜透析的39例尿毒症患者按时间先后顺序分为对照组(16例)和观察组(23例),两组住院期间均分阶段进行健康教育。对照组出院前可完成CAPD操作,未经标准化操作与知识考核出院;观察组于出院前2~3d由CAPD专职护士根据自行建立的CAPD患者健康教育考核体系(下称考核体系),于床边对操作者进行相关知识和操作考核,合格者按计划出院,不合格者继续接受培训至合格后出院。1年后评价两组腹膜炎发生率和患者依从性。结果腹膜炎发生率观察组显著低于对照组(P0.05)。结论考核体系有助于居家CAPD的顺利开展,对于提高患者生活质量、减少并发症有重要意义。 相似文献
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目的建立与应用持续性非卧床腹膜透析(CAPD)患者健康教育考核体系,以提高患者自我管理能力,减少CAPD并发症。方法将首次住院行腹膜透析的39例尿毒症患者按时间先后顺序分为对照组(16例)和观察组(23例),两组住院期间均分阶段进行健康教育。对照组出院前可完成cAPD操作,未经标准化操作与知识考核出院;观察组于出院前2~3d由cAPD专职护士根据自行建立的CAPD患者健康教育考核体系(下称考核体系),于床边对操作者进行相关知识和操作考核,合格者按计划出院,不合格者继续接受培训至合格后出院。1年后评价两组腹膜炎发生率和患者依从性。结果腹膜炎发生率观察组显著低于对照组(P〈0.05)。结论考核体系有助于居家CAPD的顺利开展,对于提高患者生活质量、减少并发症有重要意义。 相似文献
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目的 研究线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液(PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HPMC)通透性升高中的作用,探讨高糖PDS导致腹膜高通透状态的分子机制。 方法 体外培养HPMC,用不同浓度葡萄糖PDS加或不加抗氧化剂谷胱甘肽,培养24 h。采用跨细胞电阻(TER)技术测定HPMC通透性的变化;免疫荧光及Western印迹观察claudin-1的表达;线粒体活性氧(ROS)荧光探针检测细胞线粒体ROS的生成;线粒体呼吸链酶复合物活性检测试剂盒检测复合物Ⅰ~Ⅳ的活性变化。 结果 各组细胞的TER值均随时间的延长而下降,4.25% PDS组TER值24 h内从(34.7±1.5) Ω8226;cm2下降至(4.3±1.4) Ω8226;cm2;高糖PDS使细胞间连接蛋白claudin-1的表达显著下调,葡萄糖浓度越高作用越明显;同时高糖PDS导致线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ活性较对照组下降89.2%(P < 0.01),进而使线粒体ROS产生增加。谷胱甘肽可逆转上述指标的变化。 结论 高浓度葡萄糖PDS通过抑制线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ的活性,引起HPMC的氧化损伤,进而导致腹膜间皮细胞层的高通透性增高。 相似文献
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肾脏纤维化是多种慢性肾脏疾病最终导致肾衰竭的主要病理改变和共同通路,延缓和防止。肾纤维化是防治慢性肾脏病进展的关键。几乎所有肾脏纤维化疾病都有胶原蛋白合成和沉积的增加。 相似文献