IL-6和IL-11对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响

目的： 探讨白细胞介素－6(IL-6)和白细胞介素－11(IL-11)对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞及其产生血小板的影响。方法: 采用免疫磁珠法(MACS)分选8例健康产妇足月顺产的胎儿脐血中CD34+细胞，以含血小板生成素（TPO 50 μg/L）、白细胞介素-3（IL-3 10 μg/L）、干细胞因子（SCF 50 μg/L）的无血清培养基作为对照组，分别添加10 μg/L IL-6、IL-11、IL-6+IL-11作为实验组，培养14 d后观察结果。利用细胞计数仪检测单个核细胞数；流式细胞仪计数培养体系中的CD41+细胞和血小板；用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况；用显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导后的血小板凝集情况。结果: 各实验组单个核细胞数与对照组无明显区别（P>0.05），而CD41+细胞和血小板数量明显多于对照组(P<0.05)。培养第14 d后倒置显微镜下可见实验组中血小板样颗粒物明显多于对照组，而且经凝血酶诱导后有明显血小板凝集。结论: IL-6和IL-11可诱导脐血中CD34+细胞分化为巨核细胞并产生功能性血小板。     

基于Ion Torrent S5平台的二代测序技术对HLA-DRB1基因分型模棱两可进行分析

目的基于Ion Torrent S5平台NGS法进行HLA-DRB1基因分型检测的模棱两可结果的种类、比例进行分析。方法对471例脐带血造血干细胞库标本采用基于Ion Torrent S5平台的二代测序法检测HLA-DRB1位点,并同步对其中的94例标本采用PCR-SBT测定HLA-DRB1位点,余下377例标本采用PCR-SSO流式磁珠法检测。使用分型软件指定NGS法的HLA-DRB1分型结果,以HLA-DRB1*后第三区的数字作为高分辨水平统计,直接计算法分析模棱两可组合比例。结果标本中470例HLA-DRB1基因NGS检测结果与PCR-SBT法或PCR-SSO法相符合;其中1例标本NGS法漏检一个等位基因,符合率为99.8%。NGS法检测结果中,471例标本中有160例标本HLA-DRB1等位基因型出现模棱两可,比例为33.97%(160/471)。最常见的模棱两可结果组合为DRB1*09∶01∶02/09∶21。结论基于Ion Torrent S5平台的NGS技术可降低HLA-DRB1基因分型的模棱两可结果比例,但仍有一定比例的模棱两可组合结果,同时应注意NGS法检测漏检等位基因的风险。     

一例Bw亚型的糖基转移酶等位基因鉴定及蛋白结构分析

目的对1例Bw亚型个体进行分子遗传学及蛋白结构分析。方法采用血清学技术进行红细胞表面抗原和血清中抗体的测定,并用PCR-基于序列的分型(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)方法进行ABO基因的全编码区序列和第1内含子区红系特异性调控元件的分析。进一步对存在突变位点的第5~7外显子扩增片段进行T-A克隆分离单倍体和序列验证分析。应用Pymol软件对突变蛋白进行3D结构的模拟,分析氨基酸残基的变化对蛋白结构稳定性的影响。结果该样本血清学表现为B抗原减弱,血清中含有抗-B抗体。ABO基因全编码区测序初步确定其基因型为ABO*B.01/ABO*O.01.01伴有c.734C/T的杂合突变。第1内含子红系特异性调控元件区碱基序列无异常。通过单倍体克隆分离,确定突变位点c.734T位于ABO*B.01等位基因链,另一个等位基因为ABO*O.01.01。该突变将B糖基转移酶活性中心245位Thr置换为Ile。蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸置换后,与之结合的残基未发生改变而连接的氢键距离发生变化,同时增加了与远距离水分子之间的连接。结论B糖基转移酶基因c.734C>T突变导致酶活性中心氨基酸置换,影响了突变B糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性减弱,从而产生了Bw变异型。     

Ael亚型的分子生物学研究

目的　研究汉族ABO血型系统Ael亚型分子基因基础。方法　在标准血清学鉴定的基础上 ,对 2例汉族Ael亚型进行PCR SSP基因分型。并根据第 6、7外显子及两侧内含子的保守序列设计引物进行扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果　PCR SSP基因分型排除了其中一个等位基因为A2 、B、O1和O2 基因的可能。DNA序列分析表明 ,该Ael亚型基因与A1基因相比 ,有 (798～ 80 4 )G插入和C(I 5 / 5 32 )T两处突变 ,推测的蛋白质除羧基端 86个氨基酸残基与A1糖基转移酶不同外 ,还比A1转移酶多 37个残基。结论 (798～ 80 4 )G插入和C(I 5 / 5 32 )T两处突变揭示了Ael亚型的分子基础     

Rh阴性血型者Del表型和RhD基因的检测

目的 初步探讨中国汉族人群Rh阴性血型者Del表型与RhD基因之间的关系。方法 对67例血清学方法检测为Rh阴性的供血者样本进行吸收放散试验以检测Del型，并扩增RhD基因的外显子3，4，5，7，10，检测RhD基因存在情况。结果 吸收放散试验表明67例样本中Del型22例，占32．8％，非Del型45例，占67．2％。在所有表型为ccee,ccEe的38例RhD(-)个体中，Del试验均为阴性，RhD基因完全缺失；而在表型为Ccee或CcEe的29例RhD(-)个体中，22例Del试验阳性，其中20例携带完整的RhD基因，2例有部分RhD基因；7例Del试验阴性，其中6例携带部分RhD基因，1例D基因完全缺失。结论 中国汉族人群中Rh阴性血型者RhD基因的存在及多态性多由Del引起。     

Rh阴性血型者Del表型和RhD基因的检测

目的初步探讨中国汉族人群Rh阴性血型者Del表型与RhD基因之间的关系.方法对67例血清学方法检测为Rh阴性的供血者样本进行吸收放散试验以检测Del型,并扩增RhD基因的外显子3,4,5,7,10,检测RhD基因存在情况.结果吸收放散试验表明67例样本中Del型22例,占32.8%,非Del型45例,占67.2%.在所有表型为ccee,ccEe的38例RhD(-)个体中,Del试验均为阴性,RhD基因完全缺失;而在表型为Ccee或CcEe的29例RhD(-)个体中,22例Del试验阳性,其中20例携带完整的RhD基因,2例有部分RhD基因;7例Del试验阴性,其中6例携带部分RhD基因,1例D基因完全缺失.结论中国汉族人群中Rh阴性血型者RhD基因的存在及多态性多由Del引起.     

不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响

目的比较H4534与GF-H4434两种甲基纤维素培养基对脐血生成粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）的影响。方法从新鲜脐血标本中分离出造血干细胞,接种于H4534和GF—H4434培养基,于37℃、5％二氧化碳饱和湿度条件下培养14—16d。结果在样本中CD34＋细胞百分率和有核细胞总数检测结果相似的情况下,H4534与GF—H4434培养条件下CFU-GM集落数分别为（55．71±28．24）／105与（66．28±31．99）／105,两者比较差异有统计学意义（u=4．16,P〈0．05）。GF-H4434培养条件下还产生了红细胞爆裂型集落形成单位（64．89±34．95）／105和粒细胞-红细胞-巨噬细胞-单核细胞集落形成单位（2．53±2．08）／105。结论GF—H4434甲基纤维素培养基中脐血样本CFU-GM集落形成能力更强,更适合脐血质量鉴定。     

人血小板表面CD36糖蛋白检测方法的建立及初步应用

个体血小板表面CD36抗原缺乏在随机输注时有产生抗-CD36免疫反应的风险,是血小板输注无效的原因之一。本研究应用流式细胞术检测杭州地区单采血小板供者的血小板表面CD36抗原表达情况,并分析个体血小板上CD36缺失表型的频率。留取献血者新鲜抗凝血样,经离心获取富血小板血浆,洗涤并调整血小板计数至1×106。采用CD36-FITC、CD41-PE单克隆抗体和血小板孵育反应,然后用流式细胞仪检测和分析血小板表面糖蛋白CD36抗原表达情况。对于血小板表面CD36抗原阴性的标本,进一步筛查其单核细胞表面CD36的表达情况。结果表明:192例无偿献血者筛查出7例血小板表面CD36抗原阴性,CD36缺失型频率为3.6%,均为Ⅱ型缺失。人群中个体CD36抗原表达强度存在差异,参照CD36几何平均荧光强度数值大小,59例为低表达,126例为高表达。结论:人群中存在CD36Ⅱ型缺失表型,这些数据将为研究CD36抗原分布提供参考,有助于解决血小板输注无效问题。     

应用基因芯片技术检测人脐带血CD34+细胞体外扩增的巨核细胞基因表达

目的 研究人脐带血CD34+细胞体外扩增巨核细胞的基因表达,从分子水平探讨巨核细胞的表达机制.方法 采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统获取人脐带血CD34+细胞.100 ng/ml TPO诱导培养12 d后,应用抗CD+41单克隆抗体免疫磁珠法分选巨核细胞.应用基因芯片技术检测巨核细胞、非巨核细胞和meg-01细胞株...