外源基因在大肠杆菌中的表达

随着生物技术的迅猛发展,采用基因工程方法大量制备一些有用蛋白质,特别是医用蛋白质药物已成为可能.目前,表达系统可分为原核表达系统和真核表达系统.原核表达系统主要是指大肠杆菌表达体系,其它尚有枯草杆菌体系等;真核表达系统包括酵母细胞表达体系、杆状病毒-昆虫细胞表达体系和哺乳动物细胞表达体系.各种表达体系都     

包装菌株XL-pⅢ的构建及缺陷型辅助噬菌体的制备

目的构建能用来制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株。方法采用重叠延伸PCR方法将完整的噬菌体基因Ⅲ和氯霉素抗性基因体外拼接起来,利用λRed重组系统将其整合到E.coliXL1-Blue染色体上的组氨酸操纵元位点构建包装菌株,用氯霉素抗性进行筛选,并用PCR及组氨酸表型鉴定;用PCR法构建功能基因Ⅲ缺失的噬菌体基因组,将其转化到包装菌株中培养制备辅助噬菌体,以集落形成来测定滴度。结果重组菌株能在氯霉素抗性平板上生长,PCR扩增可得到目的片段,组氨酸表型缺失,说明靶基因定向重组到了细菌染色体的靶位点,将重组包装菌株命名为XL-pⅢ,以其制备的缺陷噬菌体滴度可达到3.7×108,只具备一次感染力。结论成功构建包装菌株,并能制备辅助噬菌体,有望用于选择感染性噬菌体(SIP)体系。     

重组人αD型干扰素的纯化研究

αD型干扰素(IFN αD,亦称白细胞干扰素)具有广谱的抗病毒、抑制肿瘤细胞及免疫调节等多种重要的生物活性。现行的IFN αD纯化工艺存在着纯化效率低、时间长、影响因素多等不足。本研究建立了新的纯化工艺流程。该工艺将制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳,放在了阴离子纤维素层析之前,并省略了阳离子纤维素层析的步骤。这种改进的主要优点是提高了IFN     

抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

采用ＷｅｓｔｅｒｎｔＢｌｏｔ对表达产物进行分析鉴定。重组抗ＨＢｓＡｇ－碱性磷酸酶双功能抗体非还原态分子量为２００ＫＤ左右，显著，其为有活性的双聚体；为了评价重组双功能抗体在临床检测中的应用价值，     

海水浸泡对大鼠晶状体Na+,K+-ATP酶表达的影响

目的研究大鼠晶状体海水浸泡伤后Na^＋，K^＋浓度和Na^＋，K^＋-ATP酶在mRNA水平的表达与形态学损伤之间的关系。方法用逆转录聚合酶链式反应法测定大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶α亚单位在mRNA水平的表达状况，并与Na^＋，K^＋浓度和超微结构的变化进行对比分析。结果海水浸泡大鼠晶状体Na^＋，K^＋-ATP酶的α1，α2，α3亚单位mRNA水平的表达首先代偿性增高，随后呈失代偿性降低，并随时间的延长而逐渐降低。海水浸泡30min缝合伤口观察1周组的α1及α2亚单位的表达高于对照组，α3亚单位的表达基本恢复正常。结论在晶状体海水浸泡伤的病变过程中，Na^＋，K^＋-ATP酶亚单位活性的表达有不同变化。     

血浆置换与血液灌流治疗重型肝炎临床对比研究

目的对比研究人工肝治疗中血浆置换、血液灌流的临床疗效。方法选择重型肝炎102例患者,在常规治疗的基础上随机分成两组,60例进行血浆置换治疗;42例进行血液灌流治疗,观察患者治疗前后TIB、ALB、PTA、NH,、Na、K、Crea、Urea的变化及临床症状改善。结果两组表现在TIB、ALB、PTA、NH,治疗前后有显著性差异（P〈0．01）;而Na^＋、K^＋、Crea、Urea治疗前后无显著性差异（P〉0．05）;两组治疗好转率比较：无显著性差异（P〉0．05）。结论人工肝治疗中血浆置换、血液灌流的临床疗效无明显差异,主要并发症发生率有明显差异,因为血浆置换需大量血浆,治疗过程中患者总住院费用远远超过血液灌流。     

人白细胞介素6逆转录病毒表达载体的构建

实验以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒为载体，构建了人白细胞介素６次级克隆ｐＢＩＬ－６。用限制性内切ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＩＬ－６，分离并回收了ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段，并在其平未端加入了ＢａｍＨＩ接头。实验将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＩＬ－６全基因片段插入到了逆转录病毒载体ｐＺＬＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１的ＢａｍＨＩ位点上，构建了重组质粒ｐＺＬＰＩＬ－６。经对重组予ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳、限制住内切酶分析和核酸杂交鉴定，筛选出了含有ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段及插入方向正确的ｐＺＬＰＩＬ－６。     

抗乙肝病毒表面抗原单链抗体在大肠杆菌中的高效表达

在大肠杆菌中高效表达抗乙肝表面抗原的单链抗体。方法：通过ＰＣＲ将单链抗体基因重组到原核细胞表达载体ＰＴ１７中,构建单链抗体高效表达载体ＰＴ７ＳＣ。将ＰＴ７ＳＣ质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１,ＴＰＴＧ诱导进行表达。     

肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建

目的 构建大肠杆菌ＣＳ３菌毛呈现载体,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法 通过对ＣＳ３亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析,确定外源表位的插入位点,重叠延伸ＰＣＲ方法进行定点突变,将口蹄疫病毒ＶＰＩ插入到ＣＳ３中以验证表现呈现能力;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果 在大肠杆菌ＣＳ３的１３６位氨基酸残在后突变插入ＢａｍＨⅠ酶切点构建成呈现载体,全细胞ＥＬＩＳＡ、电镜和免疫