188Re-BAC5联合PYM-BAC5导向治疗鼻咽癌的体外实验研究

目的 在前人工作的基础上,分别设计了内放疗和化疗靶向治疗药物--鼻咽癌单克隆抗体188Re标记物[188Re-鼻咽癌单克隆抗体(BAC5)]和BAC5与平阳霉素(PYM)的耦联物(PYM-BAC5),观察了两药联合使用对体外培养的鼻咽癌细胞(CNE2)的抑制作用.方法 直接法标记188Re-BAC5.以SnCl2、2-巯基乙醇(2-ME)和柠檬酸-酒石酸作还原剂和耦联剂,葡聚糖T-40被氧化成多醛基葡聚糖(PAD)用以耦联PYM和BAC5.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2种抗肿瘤药物对体外培养CNE2的抑制作用,并以188ReO4-、188Re-mIgG和PYM为对照组,生理盐水为空白对照组.结果 188Re-BAC5标记率为92%～95%,放射性浓度为5254 kBq/ml;PYM-BAC5中m(PYM):m(BAC5)=1:0.526,n(PYM):n(BAC5)=1:51.2种药单独治疗组、联合治疗组及各自对照组的抑制效应都呈明显的剂量-效应关系.但188Re-BAC5对CNE2的抑制作用随放射性浓度的增加而增加,半数抑制浓度(IC50)为264 kBq/ml,抑制作用明显强于188ReO4-(IC50=882 kBq/ml)和188Re-mIgG(IC50=1062 kBq/ml)组.PYM-BAC5的IC50为10.07 μg/ml,而单纯PYM的IC50为63.60 μg/ml;联合用药中188Re-BAC5的IC50为32.1 kBq/ml,PYM-BAC5的IC50为1.70 μg/ml,分别明显小于2种药单用时各自的IC50,以上各组差异均有统计学意义(t=22.62和37.70,P＜0.01).结论 靶向治疗组(188Re-BAC5)抑瘤效果明显好于非靶向组;联合靶向治疗组(188Re-BAC5 +PYM-BAC5)的抑瘤效果明显好于单独用药组.     

牛视网膜提取物对人-鼠杂合细胞抗体产生的影响

目的：探讨牛视网膜提取物对人－鼠杂合细胞抗体产生的影响。方法：在ＰＲＭＩ１６４０完全培养基（ＣＭ）中加入２０ｍｇ／Ｌ牛视网膜提取蛋白,配成牛视网膜培养基（ＢＲＥＭ）。用ＭＴＴ测定、细胞克隆技术、夹心ＥＬＩＳＡ方法和染色体分析,比较人－鼠杂合细胞Ｇ１２在两种培养条件下的细胞活力、克隆效率、人ＩｇＭ分泌和人染色体阳性细胞比率之间的差异。结果：用ＢＲＥＭ培养的Ｇ１２细胞活力高于用ＣＭ培养（Ｐ＜００５）。用ＢＲＥＭ培养的Ｇ１２细胞克隆中分泌人ＩｇＭ者占１２／２４,用ＣＭ培养的克隆只占２／４７。Ｇ１２细胞传代培养３个月后,用ＢＲＥＭ培养的上清人ＩｇＭ水平Ａ４９０为０３３５±００５０,用ＣＭ培养的上清为００７０±００２７（Ｐ＜００５）。前者含人染色体阳性的细胞为２０％,后者２５％,两者间没有差异（Ｐ＞００５）。结论：添加牛视网膜提取物的培养基可以提高人－鼠杂合细胞的活力和人ＩｇＭ抗体的分泌能力。维持人源性ＩｇＭ持续分泌的条件不仅取决于杂合细胞中人染色体的存在和稳定,还有其它未知因素在起作用,牛视网提取蛋白可以提供这方面的需要。     

鼻咽癌放疗中唾液表皮生长因子浓度与口腔黏膜炎的相关性分析

唾液中的表皮生长凶子(epidemal growth factor,EGF)在保持黏膜上皮屏障的完整性及促进黏膜损伤的愈合中起着非常重要的作用.为此观察鼻咽癌患者放疗期间唾液中EGF浓度变化及其与放射性口腔黏膜炎严重程度的相关性.     

抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5单链抗体原核表达载体的构建和表达

[目的]构建抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5单链抗体的原核表达载体并观察其表达,为开展抗鼻咽癌单链抗体的进一步研究奠定基础.[方法]应用RT-PCR技术,扩增出鼻咽癌单克隆抗体BAC5的轻链、重链可变区基因,通过一段编码肽的序列进行连接,构建BAC5单链抗体表达载体pET22b-scFv,导人BL21(DE3)表达菌,并进行诱导表达.SDS-PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.[结果]克隆基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因特征;pET22b-scFv表达质粒拼接正确;表达产物以包涵体形式为主.[结论]成功构建了能表达BAC5单链抗体的原核表达载体.     

鼻咽癌细胞EB病毒早期抗原（EA—R）的表达：采用单克隆抗体BAE—5的观察

以正丁酸和巴豆油诱导的Raji细胞为免疫原,应用杂交瘤技术制备一种抗EB病毒(EBV)早期R型抗原(EA-R)的鼠IgM单克隆抗体,命名为BAE-5。以BAE-5为一抗应用APAAP免疫组织化学技术检测34例鼻咽癌和29例非鼻咽癌,结果表明,所有的鼻咽癌(34例)和29例非鼻咽癌肿瘤中的9例能与BAE-5显阳性反应。与已进行EB病毒DNA原位杂交的34例鼻咽癌结果对比认为:大多数鼻咽癌细胞不仅可检测出EBV-DNA,而且这些细胞中的一部分还可表达EA-R。说明这些细胞中的EBV-DNA处于激活状态。一些非鼻咽癌肿瘤能与BAE-5起阳性反应,可能是由于这些肿瘤细胞中也有EB病毒早期抗原存在或者可能存在与EA-R抗原决定簇相类似结构的多肽而引起交叉反应。作者认为这些结果对了解EB病毒有关的多肽,特别是EA复合物在鼻咽癌和一些含EBV-DNA的非鼻咽癌肿瘤的发生和发展中的作用具有理论意义。     

应用随机多肽文库分析BAC5单抗相关的抗原表位

目的　鉴定能被BAC5单抗识别的定位于鼻咽癌细胞表面的抗原表位。方法　应用BAC5单抗作为靶抗体对噬菌体呈现的随机 12肽文库进行 3轮生物淘洗 ,用抗体捕获和竞争试验的夹心ELISA方法选择和鉴定阳性噬菌体克隆 ,对阳性和阴性噬菌体的外源性DNA片段进行序列分析 ,推导和比较由这些噬菌体所呈现的多肽氨基酸序列。结果　通过 3轮生物淘洗能被抗体捕获的噬菌体克隆为 77% ( 35 /45 )。用竞争试验从所捕获的克隆中测得 8个阳性克隆。来自这 8个克隆的噬菌体呈现三种外源多肽 ,即$CH Q S H Y P Y P V V S L ( 4/8)$CQ N Q A W F S Q P P V R M ( 3/8)和 T Q A Y K G F P V L P S ( 1/8) ,与来自阴性克隆的多肽序列 N H Q S T F W Q K W T A ( 6 /6 )比较 ,前 3个序列在靠近肽的N端都具有相同的脯氨酸 (P)和缬氨酸 (V)结构 ( P V )。结论　BAC5单抗能识别近N端含有脯氨酸和缬氨酸结构的多肽。这些多肽可能模拟存在于鼻咽癌细胞表面并与BAC5单抗相关的抗原表位的构象。     

131I-BAC5和CT-BAC5联合应用对鼻咽癌CNE-2细胞微球的作用

目的 观察中华眼镜膜毒素（CT）和131I与抗鼻咽癌（NPC）单克隆抗体BAC5的偶联物，对NPC CNE－2细胞微球的抑制或破坏作用。方法 采用氯胺－T法制备131－I－BAC5，并用异型双功能交联剂（SPDP）偶联CT－BAC5，分别或联合应用于NPC CNE－2细胞微球，观察微球生长的体积变化率和评价其受抑制或受破坏的情况，结果 CT和BAC5的偶联率为32．4％，与对照组比较，CT对微球的生长无明显抑制作用（P＞0．05），CT－BAC5的偶联率为32．4％，与对照组比较，CT对微球的生长无明显抑制作用（P＞0．05），CT－BAC5有明显的抑制作用（P＜0．05），131I－BAC5，131I－BAC5＋CT－BAC5有非常明显的破坏作用（P＜0．01），结论 肿瘤多细胞微球是一种用于体外研究肿瘤治疗效果的理想模型之一，CT－BAC5和131I－BAC5联合免疫导向治疗NPC比单项治疗效果更好。     

肝癌组织中P73蛋白表达的意义

【目的】检测肝癌组织中P73蛋白表达 ,了解P73在肝癌中的意义。【方法】采用LSAB免疫组织化学方法检测 5 8例原发性肝癌组织中P73α、β蛋白表达 ,并与相应的癌旁肝组织、远癌正常肝组织进行比较。同时用LSAB法检测P5 3和PCNA ,探讨P73蛋白与这两者间的关系。【结果】①P73蛋白在正常肝组织、癌旁肝组织和肝癌组织中的表达比例分别为 97% ,88%和 2 6 % ;②缺失P73蛋白的肝癌细胞PC NA高增殖指数的比例高于P73蛋白表达阳性组 ,前者 79% ,后者 2 7% ;③缺失P73蛋白的肝癌病例在P5 3蛋白阳性组和阴性组中的比例分别为 79%和 6 8% ,二者间无统计学差异。但是在P5 3阳性的病例中 ,伴有P73蛋白缺失时PCNA高增殖指数的比例高于P73蛋白无缺失组 ,前者 80 % ,后者 2 9%。【结论】P73蛋白在正常肝细胞、癌旁肝细胞和肝癌细胞中的表达呈递减趋势 ,缺失P73蛋白的肝癌细胞生长快 ,P73在肝癌中可能起着抑癌基因的作用。P73的缺失与P5 3的异常表达无关系 ,但是在P5 3异常表达的情况下 ,如果存在P73蛋白时可能对细胞有一定的调控作用 ,抑制细胞增殖 ,起补偿作用。     

迅速发展型鼻咽癌——31例临床病理分析

作者报道一种病程短,很快发生远处转移并导致死亡的鼻咽癌,称为迅速发展型鼻咽癌。其临床病理特点是:(l)患者从自觉症状至死亡的时间平均仅11.7个月。(2)多数患者来诊时已有大块或累及锁骨上区的颈淋巴结转移(N_3病例占51.6％)。(3)角化性鳞癌和非角化性癌所占比例较高(43.3％)。(4)癌组织中淋巴细胞,树状突细胞以及单核/巨噬细胞的浸润较少。临床大夫如能及时识别这一特殊类型的鼻咽癌,并采取相应措施,将达到减少远处转移,提高疗效的目的。