抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定

目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体。方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因。测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coliBL21(DE3)中表达。目的蛋白通过NiNTA金属螯合层析柱进行纯化、复性。用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体。结果:得到约1.9kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体。结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体。     

野生型组织型纤溶酶原激活剂工程细胞株生物学特性分析

组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）是体内丝氨酸类蛋白酶。它能激活纤维蛋白溶酶原生成纤溶酶，后者将不溶性的纤维蛋白降解为可溶性肽段，使血栓溶解，血管再通。而且由于它与纤维蛋白有高亲和力，只激活血栓表面纤溶酶原，溶解局部血栓，因而引起全身出血倾向小。目前，...     

重组人组织型纤溶酶原激活剂及其突变体的溶血栓研究

目的 比较重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体FsGGI和FrGGI的溶血栓作用,验证突变体的构建思想。方法 采用兔颈静脉溶栓模型和体外溶栓试验对纯化的rht-PA及其突变体FsGGI和FrGGI进行家兔体内外溶栓研究。结果 rht-PA、FsGGI及FrGGI三者均有体内外溶栓作用,体外溶栓能力基本相似;体内溶栓活力突变体FsGGI与FrGGI类似,均显著高于rht-PA,溶栓度分别为20.1％、49.1％和46.6％。在体内溶栓作用的同时均未引起血浆纤维蛋白原滴度下降。结论 溶栓作用是血栓特异性的,两种突变体是优于野生型t-PA的溶栓剂,上游的构建思想是正确的。     

从SDS－PAGE中提纯t－PA及其抗原特性分析

从ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中提纯ｔ－ＰＡ及其抗原特性分析陈琳，徐秀英，刘士辉，朱恒奇，黄培堂（北京军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）是一种蛋白类溶栓药。与尿激酶、链激酶相比，ｔ－ＰＡ以其与纤维蛋白有特异亲和力，能高...     

重组人红细胞生成素大规模制备中反相色谱的条件优化

目的优化重组人红细胞生成素(rhEPO)大规模制备纯化中主要影响回收率的反相色谱的条件,提高回收率。方法采用反相纯化作为三步法纯化的第一步,利用R1型反相填料采用不同分步洗脱条件进行洗脱。结果优化后经第一步反相色谱所得rhEPO蛋白纯度达70%,再通过阴离子交换和凝胶过滤色谱纯化,rhEPO终产物的纯度可达100%,体内比活达1.91×105IU/mg,rhEPO蛋白的回收率提高了1.2倍。结论优化的反相纯化条件(30%乙醇-1.5 mol/L尿素,60%乙醇-3.0 mol/L尿素)能更有效的从培养上清中大量纯化出rhEPO,回收率高。获得的产品纯度高,体内外活性好。适合大规模纯化。