Novel multi-probe RNase protection assay set for detection of endotoxin associated receptors gene expression

Objective: To construct the multi-probe ribonuclease protection assay (RPA) template set to be used for detecting expression patterns of MD-2, TLR4, CD14 mRNAs in human peripheral blood mononuclear cells. Methods : The designed cDNA fragments of the three genes were generated by polymerase chain reaction (PCR)using specific primers and directionally cloned into EcoR I and Hind III sites of expression plasmid pSP72 containing the T7/ promoter, the linearized plasmids was used as template to synthesize anti-sense RNA probes. Then we extracted total RNA from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and detected the dynamic expression patterns of the three genes with RPA method. Results: The proper sequence and orientation of the template set were confirmed by sequencing and the template set was successfully used to assay TLR4, MD-2 and CD14 mRNAs in human PBMC. The results showed that the three detected genes decreased transiently 1-3 hours after 100 ng/ml LPS stimulation. Conclusions: These new RPA multi-probe set provided valuable tool for the simultaneous quantitative determination of expression of TLR4, CD14 and MD-2 mRNAs in both constitutive and inducible types.     

阿糖胞苷诱导NF-κB活化与白血病细胞凋亡的关系

目的：研究地塞米松(DXM)和长春新碱(VCR)对阿糖胞苷(Ara—C)诱导HL60—n白血病细胞凋亡与核因子—κB(NF—κB)活化的影响。方法：采用TdT介导的dUTP缺口末端标记(Tunel)和DNA电泳技术检测H160—n细胞凋亡；采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测HL60—n细胞NF—κB活化水平。结果：Ara—C同时具有诱导HL60—n细胞凋亡和NF—κB活化的作用；DXM lμmol/L和VCR0．1μmol/L能显著增强Ara—C诱导的HL60—n细胞凋亡和抑制Ara—C诱导的HL60—n细胞的NF—κB活化，细胞凋亡增强率分别为39．1％和59．2％(均P＜0．05)，NF—κB活化抑制率分别为31．0％和47．0％(均P＜0．05)。结论：Ara—C诱导HL60—n细胞凋亡的同时激活NF—κB；DXM和VCR可通过抑制NF—κB活化，增强其诱导HL60—n细胞凋亡的作用。     

E类前列腺素(PGE)的微量放射免疫测定法及其应用

为了进一步探索E类前列腺素(PGE)在免疫调变巨噬细胞系统中可能的作用机理,我们建立了PGE微量放射免疫检测法,应用高比度的~3H-PGE_2以及高度纯化的抗PGE_2抗体,直接定量检测待测样品的PGE含量。此法快速、灵敏、有效、简便。其可测定度在10p8左右,完成整个检测只需4小时左右。此法也可应用于其它种类前列腺素的测定,只须配备相应的抗体以及标准品。体外培养分化成熟的人体激活巨噬细胞仅分泌相当少的PGE,而免疫调变巨噬细胞的PGE分泌量为激活巨噬细胞的50～100倍,提示抑制性巨噬细胞的免疫抑制效应似乎不是PGE介导的。     

地塞米松抑制核因子-κB活化增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡

目的 研究化疗药物诱导HL60—n白血病细胞核因子—κB（NF—κB)活化与凋亡的关系，并探讨地塞米松(DXM)对其的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF—κB活化水平；采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导HL60—n白血病细胞NF—κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关，1μmol/L DXM能显著抑制高三尖杉酯碱(HHT)0．5μmol/L或足叶乙甙(VP—16)1μmol/L诱导的HL60—n细胞NF—κB活化，抑制率分别为49．69％和44．35％，并增强它们诱导HL60—n细胞凋亡的作用，凋亡增加率分别为57．5％和37．2％。HL60—n细胞在接触化疗药物前，NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物在诱导HL60—n白血病细胞凋亡的同时活化NF—κB，DXM可通过抑制NF—κB活化以增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

淋巴网细胞瘤与其他肿瘤病人用“免疫”RNA传递细胞媒介的皮肤反应

以皮试反应阳性的正常人或病人的“免疫”RNA,对皮试阴性的44例淋巴网细胞瘤(何杰金氏病)与其他肿瘤病人作皮试反应传递作用的试验。用作皮试反应的为:链激酶与链道酶(streptokinase andstreptodornase 或称 Varidase),经纯化的蛋白衍生物(PPD),念珠菌提取物,腮腺炎病毒抗原,与 Trichophyton 提取物。“免疫”RNA(总 RNA)是分别从下述三个人的外周淋巴细胞或脾细胞取得的:(1)一个     

静脉注射特异性激活的巨噬细胞抑制癌的肺部转移

对 B-16黑色素瘤在体内致敏的异种淋巴细胞和 B-16肿瘤细胞一起在体外培养,将其上清与带有 B-16肿瘤的 G57BL/6小鼠的巨噬细胞在体外培养,经培养的巨噬细胞静脉注入接种过 B-16肿瘤的G57BL/6小鼠,抑制了肿瘤在肺部的转移。用2毫升 thioglycollate 腹腔注入进行性生长的 B-16黑色素瘤小鼠,4～5天     

氨氯地平抑制人血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的　观察氨氯地平对人血管平滑肌细胞（VSMC）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性的影响。方法　取人乳腺下动脉培养VSMC,用bFGF刺激细胞增殖,观察氨氯地平对bFGF激活的MAPK活性的影响,用p42/p44磷酸化抗体蛋白免疫印迹法测定MAPK活性。 结果　bFGF对MAPK有显著激活作用,激活峰值出现在5～15 min,维持至3 h; 此活化作用被MAPK激酶的特异抑制剂PD98059抑制; 无论瞬时或持久的bFGF激活的MAPK活性均被氨氯地平抑制。 结论　氨氯地平通过MAPK信号转导途径抑制bFGF所致的细胞增殖。     

巨噬细胞在烧伤感染中的作用研究

感染和炎症反应是烧伤过程中重要的病理变化。近年来的研究表明 ,创伤或烧伤患者因体表生理防御屏障功能损害以及创伤、烧伤本身造成的应激反应 ,使机体免疫功能下降是导致细菌侵入、繁衍、增殖 ,引起全身性感染最终因脓毒症、多器官功能衰竭而死亡的主要原因之一[1-4] 。换言之 ,创伤后引起的较高死亡率与感染密切相关。炎症是白细胞、血浆蛋白在感染部位的聚集和激活 ;炎症反应也是一把双刃剑 ,适度的炎症可以动员机体的免疫防御机制 ,有利于控制感染保护宿主 ,但失控的、过强的炎症反应则会导致组织损伤疾病[5] 。巨噬细胞指单核吞噬细胞…     

大鼠肿瘤细胞由同系“免疫”RNA而引起的免疫细胞溶解

用甲基胆蒽诱发的Fischer 344/N大鼠的纤维肉瘤(MC3-R),并在同系大鼠接种,当肿瘤长到1～2厘米时,取其脾淋巴细胞,提取“免疫”RNA。“免疫”RNA和正常同系大鼠的脾淋巴细胞一起温育后,能特异地传递对肿瘤特异抗原的免疫反应。     

丝裂素活化蛋白激酶的激活和转核与大鼠 血管平滑肌细胞增殖关系的研究

目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）激活、转核与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞（VSMC）增殖间的关系。方法 本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC。用^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入法测定DNA合成,用p43/p44磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定MAPK蛋白量,用免疫细胞化学技术观察MAPK活化并转位入细胞核的过程。结果 （1）AngⅡt和PD98059的上述作用都呈剂量依赖性。（2）AngⅡ对MAPK蛋白表达有显著增强作用。此作用同样被PD98059以剂量依赖方式抑制。（3）AngⅡ刺激5min后,MAPK出现在VSMC的细胞浆中,30min时MAPK进入细胞核,3h后MAPK染色从核内消失,上述MAPK转核过程被PD98059抑制。结论 本实验证实人细胞核,3h后MAPK染色从核人消失,上述MAPK转核过程被PD98059抑制。结论 本实验证实AngⅡ能激活培养大鼠主动脉VSMC的MAPK,活化的MAPK从细胞浆转位进入细胞核导致VSMC增殖。