西藏地区藏族人群血清抗─HCV反应性的研究

丙型肝炎病毒（HCV）基因组核着酸序列的阐明，使得HCV抗原的基因重组表达和化学合成成为可能，以这些基因重组或化学合成抗原研制的执一HCV酶联免疫吸附诊断试剂盒（HCVELISA）可用于诊断HCV感染或血源筛查。目前所用的第二代抗一HCV检测试剂盒在灵敏度与特异度上比较第一代产     

CR2-CD59和CD59-CR2靶向补体抑制物的构建、表达与鉴定

CD59是补体的细胞膜抑制剂,它通过与C8和C9结合,可达到阻止MAC(membrane attack complex)组装的目的.而且CD59不影响补体调理素、C3a或C5a的产生.目前研究结果表明可溶性CD59(soluble forms of CD59,sCD59)对补体相关疾病的治疗作用甚微[1,2].直接将靶向补体抑制物定位至补体相关疾病位点的策略可能提高对补体的抑制效率,同时可以避免由于系统性和长期性补体抑制带来的副作用.已有研究表明,抗体-CD59靶向融合蛋白比非靶向补体抑制物能更有效保护目标细胞[3].因此,本研究拟采用可溶性CR2作为将补体抑制物(CD59)定位至补体相关疾病位置的载体,从而构建一种更有效的靶向补体抑制物,使其只对补体激活位点产生抑制,而不影响机体免疫系统正常的补体调节,为研制炎症相关性疾病新的治疗药物奠定基础.     

C3aR拮抗剂治疗PR8/MRSA共感染小鼠肺炎损伤的研究

目的 补体异常激活可大量产生过敏毒素C3a分子,通过利用C3aR受体拮抗剂(C3aRa)可抑制C3a功能,达到治疗流感病毒和金黄色葡萄球菌(PR8/MRSA)共感染小鼠肺炎损伤的目的 ,探究一种治疗共感染重症肺炎损伤的新策略.方法 PR8/MRSA共感染小鼠尾静脉注射C3aR受体拮抗剂C3aRa,剂量1 mg/kg,1次/2 d,观察记录小鼠死亡率变化;测量共感染小鼠体质量,取新鲜肺组织称重,计算肺指数;制备小鼠肺组织石蜡切片并行HE染色,观察肺部病理改变.结果 经过敏毒素受体拮抗剂C3aRa干预后的共感染小鼠较对照组生存率提高了30％,肺组织充血、水肿和出血程度减轻,肺指数明显下降(P＜0.001).结论 C3aRa在流感/细菌共感染重症肺炎的治疗中具有一定疗效,为临床利用补体干预治疗共感染重症肺炎提供了一种新策略.     

CRISPR系统与哺乳动物免疫系统的比较及其功能的研究进展

原核生物防御噬菌体入侵的机制与哺乳类免疫防御机制有很多相似之处,尤其是特异性免疫机制,原核生物的特异性免疫系统即成簇规律间隔短回文重复序列（ clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）与哺乳类特异性免疫系统在很多环节体现了相似的规律。通过比较,能够加深对CRISPR的免疫功能的认识。近年发现,除了发挥特异性免疫功能,CRISPR系统还参与了许多细菌生长代谢过程的调控机制,调控基因表达的能力更是受到广泛的关注。 CRISPR系统功能的复杂程度远远超出免疫防御的范畴,值得深入研究。     

人源抗HIV-1V3环噬菌体抗体筛选与鉴定

目的 以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp120 V3环的合成环肽为抗原,从人的噬菌体抗体组合文库中筛选出与抗HIV-1 V3肽有结合活性的人源噬菌体抗体(Fab段).方法 用噬菌体抗体库技术筛选人源抗HIV-1V3环噬菌体抗体,ELISA测定其活性,竞争抑制实验证实了该噬菌体抗体的特异性.结果 序列分析表明.重链基因为IgG1亚类,可变区属VHI亚群.与胚系基因DP-88同源性最高,D区为D3-3、J区为JH5;轻链为k亚型.可变区属VL IV亚群,D区为DPK22,J链为Jk4胚系.结论 成功筛选了人源抗HIV-1 V3环噬菌体抗体.其具有很好的生物学活性和特异性.     

PCR产物直接测序快速识别病原菌

[目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法.[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌.[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增.[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法.     

抗HBsAg dsFv和α-干扰素融合基因表达载体构建

目的构建抗HBsAg dsFv抗体在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达载体及抗HBsAg dsFv抗体与α-干扰素融合蛋白在CHO细胞表达载体。方法通过重叠延伸PCR方法成功地将VL基因与α-干扰素基因通过Linker连接,并利用分子生物学技术构建其在CHO细胞表达载体。结果获得靶向HBsAg的dsFv抗体与α-干扰素融合蛋白在CHO细胞表达系统。通过测序证明,基因工程抗体dsFv片段和α-干扰素在分子水平上重组,形成融合基因。结论成功构建抗HBsAg dsFv和α-干扰素融合基因,使表达的融合蛋白可能发挥双重作用,即抗体的导向作用和α-干扰素的抗病毒作用,不仅克服了单独使用α-干扰素治疗乙型肝炎的各种不足,而且还消除了人鼠单克隆抗体对人体产生过敏反应的危险,增强抗体在人体中的生物学效应。     

用套式PCR分析我国不同地区的HCV基因型

目的:了解我国不同地区HCV基因型分布的特点.方法:根据不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)核心区基因序列,合成一条通用引物和四条型特异性引物用于套式PCR扩增反应,所得不同长度的扩增产物分别对应于HCVⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ基因型,用此方法对采自北京、上海、天津、山西、西藏和新疆共455份丙型肝炎病毒阳性血清进行了基因型分析.结果:在我国HCV基因型分布以Ⅱ型(66.2%)为主,其次为Ⅲ型(20.2%),并有一些混合型(11.4%)及少量Ⅰ型(2.2%).结论:除新疆地区HCV混合型(43.1%)较多外,其它地区HCV基因型分布差别不大.     

人源抗-HBsAg dsFv-IFN融合基因的构建及在CHO细胞中的表达

目的 :探讨用抗体工程技术研制乙型肝炎导向干扰素。方法 :在已有的抗HBsAg_dsFv的基础上 ,用重叠延伸PCR的方法将抗_HBsAg_dsFvVL 基因和α_干扰素基因连接 ,形成融合基因。为避免IFN与dsFv空间折叠的影响 ,其间引入 15个氨基酸的柔性短肽 ;分别构建重链VH 基因、轻链VL_IFN融合基因的CHO表达载体 ,共转染CHO细胞。结果 :从细胞培养上清中检测到有抗病毒活性的IFN存在 ,有抗_HBsAg活性 ,但dsFv与抗原的结合活性较低。结论 :本研究为研制乙肝导向干扰素奠定了基础。     

食源性疾病现场调查与分析系统的优化与应用

<正>目前食源性疾病已成为最重要的公共卫生事件之一。根据美国国家CDC的数据估计每年的食源性疾病患者人数将近7600万人,其中由于病情严重的住院的人数达到325 000人,并且有近5 200人死亡。而我国平均每年发生食源性疾病暴发事件约数十万起,发病人数愈千万人次。目前,食源性疾病现场