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目的 探讨RNA相关蛋白LSM家族成员14A(LSM14A)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的功能及其潜在的分子机制.方法 通过慢病毒包装方法构建稳定敲低LSM14A的HepG2.2.15细胞株和稳定过表达LSM14A的HepG2.2.15细胞株,利用CRISPR/Cas9技术构建LSM14A敲除的HepG2.2.15细胞.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western印迹)检测敲低、过表达和敲除效果.利用RT-qPCR和Northern印迹杂交检测HBV RNA的表达水平;RT-qPCR检测HBV DNA的表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)的表达水平.利用Western印迹检测下游分子,RT-qPCR检测干扰素的分泌.结果 在HepG2.2.15细胞中过表达LSMJ 4A可显著抑制HBV的复制,而敲低或敲除LSM14A可显著促进HBV的复制.过表达LSM14A后,p-TBK1、p-IRF3、Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的表达水平均显著增加.结论 在HepG2.2.15细胞中LSM14A蛋白通过促进IRF3的磷酸化诱导Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的表达,进而抑制HBV的复制. 相似文献
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目的 探讨含DEAD框解旋酶41 (DDX41)基因对乙型肝炎病毒(HBV)复制能力的影响及其作用机制.方法 通过慢病毒包装将稳定过表达DDX41或特异敲低DDX41的短发卡RNA (shRNA)重组质粒转染至HepG2.2.15细胞系,筛选和建立稳定过表达或敲低DDX41的细胞株;通过CRISPR-Cas9技术构建敲除DDX41的HepG2.2.15细胞株;蛋白免疫印迹法检测DDX41蛋白表达水平以及通路验证;酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达水平;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HBV复制相关DNA、RNA以及干扰素mRNA表达水平;Noahern印迹法检测HBV总RNA.结果 过表达DDX41可显著抑制HepG2.2.15细胞系中HBV的复制;而敲低或敲除DDX41可显著促进HepG2.2.15细胞系中HBV的复制.过表达DDX41可显著促进干扰素调节因子3(IRF3)的磷酸化和干扰素β(IFN-β)的表达;而敲低或敲除DDX41可显著抑制IRF3的磷酸化和IFN-β的表达.结论 在肝癌细胞系HepG2.2.15中,DDX41蛋白通过促进IRF3的磷酸化并诱导干扰素β的表达,进而发挥抑制HBV复制的功能. 相似文献
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干扰素-α治疗慢性乙型肝炎的机制、疗效及其影响因素的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
干扰素(IFN)_α是目前治疗慢性乙型肝炎(CHB)的主要药物之一,具有广谱抗病毒和免疫调节两方面的作用,可抑制病毒DNA复制和RNA合成,促进病毒RNA降解,抑制病毒蛋白的合成和转运及病毒颗粒的成熟和分泌,能促进人类白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类分子的表达及增强CTL、APC和NK细胞等的活性。及时应用IFN_α治疗,对于机体阻断HBV感染的慢性化以及随后的病程进展具有积极的疗效,且用改良后的新一代聚乙二醇_IFN_α(PEG_IFN_α)治疗CHB患者,取得了更加不错的疗效。然而,IFN_α有较严格的适应征,其治疗CHB的总有效率至今不超过40%。许多研究表明,HBV的基因型、特定的环境因素和人体的遗传因素是影响IFN_α疗效的主要因素。要提高IFN_α的治疗效果,就必须对以上各影响因素的分子机制进行研究,以改善疗效,指导未来临床合理化或个体化用药。 相似文献
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目的 探讨中国汉族人群中白介素33(IL-33,interleukin-33)基因单核苷酸多态性(SNP,single nucleotide polymorphism)与脓毒症发生风险及疾病严重程度的相关性.方法 采用病例-对照研究设计,通过白介素33基因的连锁不平衡结构选择标签SNP(tagging SNP,tagSNP),应用Sequenom MassARRAY SNP检测技术完成对IL-33基因的标签SNP分型.采用非条件Logistic回归分析,并对性别、年龄、吸烟、饮酒、APACHEⅡ评分和慢性病状态等混杂因素进行校正后,评估IL-33单核苷酸多态性与脓毒症易感性的关系,以及脓毒症继发的严重脓毒症、脓毒症休克、死亡等表型的相关性.结果 在所选的7个IL-33标签SNP (rs10118795 C/T,rs16924159 G/A,rs1891385 A/C,rs2210463 A/G,rs72614079 A/G,rs76864631 G/A,rs7849201 C/T)中,rs76864631不符合HaZy-Weinberg平衡定律,其余6个多态位点及单体型与脓毒症的发生风险和疾病的严重程度均无明显相关性(P>0.0 125).结论 IL-33基因多态性可能与中国汉族人群脓毒症的发生、发展和病程转归无关. 相似文献
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尽管脓毒症的诊断和治疗取得了长足进步,但严重脓毒症和脓毒性休克的病死率仍居高不下.社会人口统计学和临床风险因素预测模型不能完全解释为什么在遭受相似程度打击后,有些人群易于发生脓毒症和多器官功能障碍综合征,有的患者却病情较轻而易于恢复.近年来,人们认识到遗传因素会影响脓毒症的易感性和预后.随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成,脓毒症的遗传易感基因研究成为当前国内外研究的热点和焦点.基因多态性研究可以加深对脓毒症的发生、发展机制的认识,提供更精确的个体化靶向治疗措施.本文就基因多态性研究的相关概念、方法和在脓毒症基因关联研究中的策略及存在的问题作简要概述. 相似文献
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周钢桥 《国际流行病学传染病学杂志》1998,(1)
本文作者建立了一种简便、快速的斑点免疫酶法直接检测血清标本中的细小病毒B19衣壳抗原VP1和VP2。取10μl血清标本,加入20μl SDS变性缓冲液(2.3%SDS,5%β-琉基乙醇,0.015M Tris盐酸盐,pH6.8),室温下孵育10分钟.然后再加入70μl蒸溜水,混匀,点样渗滤至尼龙膜上。待膜自然干燥 相似文献
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目的:分析Holliday交叉识别蛋白(Holliday Junction Recognition Protein,HJURP)rs3771333多态性与原发性肝癌(HCC)的临床病理特征的关系。方法:采用Taqman基因分型方法检测rs3771333的基因型,分析各基因型与146例HCC患者的TNM分期、癌栓形成等指征的关系,并对可能影响亚组间匹配的混杂因素如性别等5个因素进行校正。结果:在146例肝癌患者中,HJURP rs3771333位点的AA、AC和CC基因型的频率分别为69.2%(101/146)、29.5%(43/146)和1.3%(2/146)。在使用性别等因素校正后,AC基因型在原发灶T1组中的频率高于T2~T4组中的频率(36.4%vs 23.8%),AC基因型在原发灶数目〈3个组中的频率高于≥3个组中的频率(34.0%vs 19.6%),但差异均无统计学意义(均P〉0.05)。结论:HJURP rs3771333位点的多态性与HCC的临床特征可能无相关性,该位点的多态性与HCC的疾病演变的关系还需要进一步验证。 相似文献
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目的探讨白介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK4)多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的关联性。方法采用Hapmap单倍型标签SNPs(htSNPs)策略和SNPstream分型方法,对255例脓毒症患者和260例对照个体进行分型。采用Logistic回归分析,校正性别、年龄、吸烟和饮酒、慢性病状态、A-PACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素的影响,评价IRAK4多态性位点与脓毒症的发生风险,以及脓毒症性休克、死亡和多器官功能障碍的遗传相关性。结果 IRAK4基因在中国人群中共捕获6个htSNPs。rs4251431 G/T,rs4251460A/C,rs4251513 G/C和rs4251545 G/A最终用于分型研究。4个htSNPs位点在病例和对照组中的基因型分布均呈Hardy-Weinberg平衡状态。IRAK4多态性位点及单倍体与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无明显相关性。结论在中国人群中,IRAK4基因多态性位点在脓毒症的发生、发展和病程转归中可能不发挥重要作用。 相似文献
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乙型肝炎病毒基因型的临床意义研究进展 总被引:1,自引:1,他引:1
根据病毒基因组序列的同源性,可将乙型肝炎病毒(HBV)分为至少8种不同的基因型,分别命名为基因型A至H。近来的研究显示,不同的HBV基因型之间在致病性和病毒特性上可能存在差异,并且由此可能影响病毒的致病过程和治疗的疗效或预后状况。因此,确定慢性乙型肝炎患者体内HBV的基因型对于HBV感染后疾病进展的风险预测和治疗方案的选择具有一定的意义。本文对HBV基因型与HBeAg的血清转换、HBV感染后疾病严重程度、HBV感染后的慢性化以及抗病毒疗效之间的关系进行了综述。 相似文献