鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建

目的 构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体。方法 应用重组ＤＮＡ技 术,将人工合成的尿激酶原信号肽基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合基因连接,并保 证在同一阅读框架,然后分别插科到pcＤＮＡ３和ＰＭＪＫ３两种真核表达载体中。结果构建成可以在真核细胞中分泌表 达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的重组质粒pcＤＮＡ３－Ｄ１和ｐＭＪＫ３－Ｄ１。结论为建 立稳定分泌表达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的细胞工程株奠定了基础。     

人重组卵泡刺激素研究进展

人卵泡刺激素(FSH)是由人脑垂体前叶嗜碱性细胞合成与分泌的一种糖蛋白类促性腺激素.FSH是糖蛋白家族成员之一,对女性的卵泡发育成熟和男性的精子发育具有重要意义,目前被广泛应用于治疗不育不孕症.     

低分子量单链尿激酶基因在大肠杆菌中的表达

高分子单链尿激酶(Scu-PA)被认为是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。Stump等于1986年在从人肺腺癌细胞培养物分离纯化Scu-PA过程中发现了低分子量单链尿激酶(Scu-PA-32k),它的分子量为32kDa,氨基酸序列相当于Scu-PA的第144～411aa。研究证明,它对血栓溶解具有选择性,溶栓效果与Scu-PA相似,可望成为一种新型溶栓剂。     

特异性鼠抗人交联纤维蛋白ScFv基因的克隆、表达及ScFv－Scu－PA－32K融合蛋白的构建

特异性鼠抗人交联纤维蛋白ＳｃＦｖ基因的克隆、表达及ＳｃＦｖ┐Ｓｃｕ┐ＰＡ┐３２Ｋ融合蛋白的构建黄君健黄翠芬俞炜源军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０为了获得具有导向作用的特异性抗体，采用目前最新的噬菌体抗体库技术，制备特异性抗人交联纤维蛋白单...     

t-PA cDNA基因的克隆

人组织型血纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,简称t-PA)由于与血纤蛋白(fibrin)有高度亲和力和不引起系统性出血副作用,被认为是一种比较理想的溶血栓制剂.但自组织或细胞培养液中提取含量极微,不可能满足临床应用上的大量需求.唯有基因工程是合理途径.1983年美国Genentech公司获得了t-PA cDNA克隆并公布了t-PA cDNA的全部核苷酸序列.目前其产品已应用于临床.由于t-PA具     

单链抗体—碱性磷酸酶检测系统的建立

目的：建立简便快速的单链抗体检测方法。方法：用PCR法和DNA重组技术构建了突变型碱性磷酸酶基因和单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因;利用IPTG诱导融合基因的表达,并用pNPP底物液检测碱性磷酸酶的活性,用ELISA法检测和比较了不同单链抗体的相对活性。结果：实现重组突变型碱性磷酸酶基因在大肠杆菌中的功能性表达,且活性较重组野生型碱性磷酸酶活性高30倍左右。重组单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因在大肠杆菌中获得功能性表达,周质中表达产物具有双功能,并成功地利用该系统分析了不同单链抗体的相对活性。结论：该单链抗体－碱性磷酸酶检测系统能够方便地应用于单链抗体的活性分析。     

鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的高效表达

目的：构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶融合基因,并在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中高效表达。方法：应用重组ＤＮＡ 技术,将编码尿激酶原信号肽的ＤＮＡ 片段,与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶基因融合在一起,并插入真核表达载体ｐＭＪＫ３ 中,构建成重组质粒ｐＭＪＫ３Ｄ。通过细胞电击穿孔法,将该重组质粒转染到中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株（ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－ ）中,转染细胞经选择培养基筛选,并采用ＭＴＸ加压扩增培养。结果：得到了高效表达融合蛋白的细胞株,表达水平为３００ Ｕ／（１０６ 细胞·ｄ）。通过ＥＬＩＳＡ 和溶解圈方法鉴定,该融合蛋白可与Ｄ－二聚体结合,并具有激活纤溶酶原溶解纤维蛋白的活性。结论：成功构建并获得高效表达双功能融合蛋白的细胞株,为进一步研究这一双功能融合蛋白的体内外特异溶栓活性以及评价其作为新型导向溶栓制剂奠定了基础。