高血流性肺动脉高压模型大鼠建立及病理生理改变

目的 建立大鼠颈总动脉与颈外静脉吻合高血流性肺动脉高压模型。方法 健康雄性SD大鼠45只分为分流组、结扎组和假手术组(n=15)。12 周后检查大鼠一般状态;超声心动图观察心脏情况、心排量及分流通畅情况;右心导管检查右心室收缩压,抽血气分析计算肺循环/体循环血流量比值(Qp/Qs); 右心室肥厚指数;肺组织HE染色及弹力纤维EVG染色。统计数据采用SPSS 16.0软件,对各组数据进行单因素方差验分析。结果 各组体重增加未见明显差异,吻合通畅率84.6%。分流组大鼠心脏明显增大,与假手术组、结扎组相比心排量明显增加[(309.8±33.1)mL/min·kg比(245.6±31.9)mL/min·kg,(240.8±30.9)mL/min·kg相比,P<0.05];分流组Qp/Qs 为2.16±0.38,右心室收缩压增加至(35.8±4.9)mmHg。分流组右心室肥厚指数0.3263±0.0342,比其它两组增加明显。与假手术组相比,分流组肺动脉中膜厚度明显增加[(22.3±1.7)% 比(10.6±1.7)%, P<0.05]。结论 大鼠颈总动脉与颈外静脉吻合法可以建立良好的高肺血流肺动脉高压模型。     

姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响

 目的 探讨姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、模型+姜黄素组,伤后24 h处死小鼠,左肺进行10%甲醛固定,石蜡包埋切片,右肺-80 ℃保存。HE染色观察肺组织爆震后病理改变;活性氧生成(reactive oxygen species,ROS)检测肺组织氧化应激损伤情况;Western blot检测氧化应激相关蛋白MDA5、SOD-1、IRE-α和信号通路相关蛋白p-PI3K、Nrf2、Keap1的表达。结果 胸部爆震后,模型组肺组织细胞排列明显紊乱、可见细胞变性和炎性细胞浸润;ROS检测显示,在紫外光激发下,模型组与对照组相比肺组织内蓝色荧光减少,红色荧光明显增加;Western blot检测结果显示模型组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.68±0.08、0.63±0.04、0.38±0.02、0.32±0.03和0.98±0.11,相比于对照组的0.33±0.03、0.29±0.02、0.81±0.09、0.43±0.05和0.44±0.04变化明显,而模型组p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.74±0.05,相比于对照组的0.30±0.02显著升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。姜黄素干预后,HE染色显示小鼠肺组织变性坏死明显缓解,炎性细胞浸润减轻;ROS检测显示模型+姜黄素组与模型组相比,肺组织内蓝色荧光增加,红色荧光明显减少;Western blot检测结果显示模型+姜黄素组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.48±0.07、0.36±0.06、0.51±0.07、0.71±0.08和0.53±0.06,p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.56±0.07,上述差异与模型组两两比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论 姜黄素对胸部爆震所致的肺组织氧化应激损伤有保护作用,其机制可能是通过PI3K/Nrf2/Keap1信号通路来实现的。     

壳寡糖对肺爆震伤小鼠氧化应激及凋亡作用影响

目的探讨壳寡糖对肺爆震伤小鼠氧化应激及凋亡作用影响。方法将30只昆明小鼠随机分为对照组、爆震伤组及爆震伤+壳寡糖组,每组各10只。检测肺爆震伤小鼠生理指标变化;末端标记法(TUNEL)检测肺组织凋亡蛋白表达;活性氧(ROS)检测肺组织氧化应激的表达;蛋白印记(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测氧化应激和凋亡相关蛋白表达。结果壳寡糖可以显著抑制爆震伤导致的肺组织氧化应激蛋白ROS、黑色素瘤分化相关基因5和肌醇依赖酶α表达,促进超氧化物歧化酶-1蛋白表达(P<0.05);壳寡糖可以显著抑制爆震伤导致的肺组织凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达(P<0.05),促进Bcl-2和非活化Caspase-8蛋白表达(P<0.05)。结论爆震伤导致小鼠肺组织发生氧化应激和凋亡等改变,壳寡糖对爆震伤导致的肺损伤有保护作用。     

壳寡糖对爆震伤致小鼠急性肺损伤保护作用研究

目的探讨壳寡糖对爆震伤致小鼠急性肺损伤(ALI)保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法将30只昆明小鼠随机分为对照组、ALI组和ALI+壳寡糖组,检测肺干/湿重比变化;HE染色观察肺组织病理改变;ELISA检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6和IL-10的变化;Western blot、Real time PCR和免疫荧光检测炎症相关因子和通路相关蛋白DDAH1、ADMA和p38的表达。结果与ALI组相比,壳寡糖可以显著降低爆震伤导致的肺干/湿重比、炎症细胞浸润和炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10表达,升高抑炎因子IL-10表达,差异均有统计学意义(P<0.05);壳寡糖显著提高爆震伤导致的肺组织DDAH1蛋白表达,降低ADMA和p38蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论壳寡糖对爆震伤导致的小鼠ALI有保护作用,其可能通过抑制DDAH1表达,促进ADMA,进而激活MAPK通路来实现。     

猕猴桃根提取物抗肝细胞癌作用及相关机制研究

目的探讨猕猴桃根提取物抗肝细胞癌(HCC)的作用及相关机制。方法选取HCC细胞系HepG2和HUH7,根据猕猴桃根浓度分为0μg/ml(对照组)、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml组。采用噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验研究细胞的侵袭和转移;Real-time PCR和Western blot检测相关基因和蛋白表达。结果猕猴桃根对HCC增殖的抑制作用存在剂量和时间依赖性。克隆实验发现,与对照组比较,不同浓度猕猴桃根抑制HepG2和HUH7细胞增殖,且随浓度的增加,抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现,与对照组比较,50μg/ml、100μg/ml猕猴桃根促进细胞由G1期进入S期,抑制DNA复制,促进HepG2和HUH7细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果发现,与对照组比较,猕猴桃根显著促进HepG2和HUH7细胞迁移,具有剂量依懒性(P<0.05)。猕猴桃根促进Akt基因和蛋白表达,抑制p-Akt表达,抑制Akt磷酸化比例,促进PTEN基因和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论猕猴桃根通过p-Akt/PTEN调控HCC细胞增殖、周期停滞及细胞凋亡。     

小鼠肺爆震伤蛋白质组学研究

目的:通过检测不同时间点肺爆震伤小鼠肺蛋白质组学变化,探究肺爆震伤损伤机制。方法:60只健康雄性C57BL/6小鼠,随机（随机数字法）分为对照组、爆震后12 h组、24 h组、48 h组、72 h组及1周组（每组10只）。在北部战区总医院动物实验室进行实验,利用自主研发的精准爆震装置建立小鼠肺爆震伤模型;通过大体观察和HE染色评价肺组织损伤情况;基于液相色谱-串联质谱联用（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）的蛋白质组学技术对小鼠肺组织蛋白进行定量分析,筛选出差异表达蛋白,在此基础上利用生物信息学工具分析蛋白质组学变化。结果:肺爆震伤后,小鼠肺组织表面可观察到散在出血点,且随时间延长逐渐增多,24 h出血最为严重。HE染色可见爆震后12 h和24 h的肺泡正常组织结构消失,肺泡腔内弥漫性出血,大量炎细胞浸润,肺间质渗出液增多,肺泡壁增厚,肺泡腔萎陷融合。LC-MS/MS共鉴定到6 861个蛋白质,定量到608个差异表达蛋白,其中在12、24、48、72 h及1周分别有227个、140个、202个、258个和71个差异蛋白。基因本体论（gene ontology, GO）分析得到包括细胞粘附、细胞外基质组织及胶原原纤维组织等130个生物进程子类,外泌体、细胞外基质及细胞质等66个细胞组分子类,以及细胞外基质结构组成、肌动蛋白结合及抗氧化活性等43个分子功能子类。KEGG分析共得到细胞外基质受体相互作用、黏着斑及PI3K-Akt信号通路等24个子类。结论:小鼠肺爆震后早期不同时间点差异表达蛋白组合亦不同,损伤机制复杂,特别是12~24 h肺损伤最为严重,炎症反应显著。     

蓝莓花色苷对放射性心脏损伤的保护机制研究

目的:探讨IL-1和TGF-β在放射所致心脏损伤组织中的表达变化及蓝莓花色苷干预的影响。方法:将40只大鼠随机分成空白对照组、单纯照射组、20mg/kg蓝莓花色苷照射组、80mg/kg蓝莓花色苷照射组,每组各10只。照射前蓝莓花色苷灌胃给药,然后通过单次全胸15Gy照射剂量进行照射,照射后每天对大鼠的状态进行观察并继续灌胃。饲养8d后,对大鼠心肌酶谱指标进行检测,苏木精-伊红及Masson染色观察心肌组织病理变化,运用荧光定量PCR仪对IL-1和TGF-β相对表达量的变化进行分析。结果:与空白对照组比较,单纯照射组的苏木精-伊红及Masson染色显示心肌有一定程度的损伤,血清谷草转氨酶和磷酸肌酸激酶等心肌酶谱含量升高(P0.05),IL-1和TGF-β相对表达量升高(P0.05);与单纯照射组比较,蓝莓干预组的苏木精-伊红及Masson染色显示心肌损伤的程度轻,血清谷草转氨酶和磷酸肌酸激酶等含量低,IL-1和TGF-β相对表达量低,相关指标均高于空白对照组(P0.05)。结论:心肌组织中IL-1和TGF-β表达升高在心肌损伤的发生机制中起到重要作用。在一定剂量范围内,蓝莓花色苷可以降低放射性心肌损伤程度,且随着剂量升高呈现正相关,其机制可能与降低IL-1和TGF-β的表达有关。     

硫化氢对腹主动脉缩窄致心肌损伤大鼠心肌组织COXII表达的影响

目的：探讨细胞色素C氧化酶II（COXII）在腹主动脉缩窄所致的心力衰竭组织中的表达变化及硫化氢（H2S）干预的影响。方法：30只健康雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、心衰组和H2S干预组,每组10只。通过腹主动脉结扎术制作大鼠心衰模型,术后12周,采用动物超声监测舒张末室间隔厚度（IVS）、舒张末期左心室后壁厚度（LVPW）、左心室射血分数（LVEF）;血流动力学监测左心室收缩压力（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压上升或下降最大速率（LV±dp/dtmax）;记录左心室质量指数（LVMI）;苏木精-伊红及Masson染色观察心肌组织病理变化;采用Real-time PCR及Western blot检测心肌组织中COXII的表达。结果：与心衰组比较,H2S干预组大鼠LVMI、IVS、LVPW、LVEDP及LVEF明显降低,而LVSP、LV±dp/dtmax显著升高（P〈0.05）。苏木精-伊红及Masson染色显示心肌损伤程度减轻。Real-time PCR及Western blot结果显示干预组大鼠心肌组织中COXII mRNA及蛋白明显高于心衰组（P〈0.05）。结论：心肌组织中COXII表达升高在心肌衰竭的发病机制中起到重要作用,而H2S可以改善心力衰竭的心肌损伤程度,其机制可能与提高COXII蛋白的表达有关。     

丹参酮ⅡA对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用

 目的 探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用。方法 建立小鼠肺爆震伤致脑损伤模型。将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Sham)、肺爆震伤组(Blast)和Tan ⅡA干预组,每组10只。冲击伤后48 h采集标本,通过HE和ROS染色观察脑组织病理改变,Western blot检测脑损伤标志物Tau和S100β,炎性相关因子IL-1β、TNF-α和IL-10,氧化应激相关因子SOD-1、IRE-α和MDA5,以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt和NF-κB的表达情况。结果 蛋白结果显示,与Sham组相比,Blast组S100β升高到(31.5±4.19),其他相关促进因子均升高,而通路上NF-κB升高到(12.25±1.92),PI3K和Akt的磷酸化分别升高到(4.36±0.41)和(27.00±0.09),而与Blast组相比,Tan ⅡA组S100β降低到(0.21±0.09),Tan ⅡA恢复了冲击波导致的相关因子改变,NF-κB降低到(0.32±0.02),PI3K和Akt的磷酸化分别降低到(0.47±0.01)和(0.18±0.04),上述差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tan ⅡA对肺爆震伤导致的脑损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路来实现的。