pEGFP-N1-GGF2质粒的构建及其在大鼠脑内的表达

目的构建pEGFP-N1-GGF2质粒，观察其在大鼠脑组织中的表达。方法采用RT-PCR方法从人胚胎脑组织总RNA中扩增出人GGF2全长序列．并克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因真核表达载体pEGFP-N1上，构建pEGFP-N1-GGF2质粒．通过脂质体将pEGFP-NI-GGF2质粒转染大鼠脑组织．荧光显微镜下观察GGF2融合蛋白在大鼠脑内表达的时间和空间分布特征。结果成功构建了pEGFP-N1-GGF2表达载体，荧光显微镜观察可见，pEGFP-N1-GGF2表达载体转染6h大鼠脑内即可见GGF2融合蛋白表达．3d时融合蛋白表达最多，7d时表达量稍有下降但仍高，14d时表达量已明显下降。GGF2融合蛋白在脑内的表达以针道为中心向周围扩散．荧光信号可达皮层深部。结论脂质体介导的pEGFP-NI-GGF2质粒能够在大鼠脑内表达GGF2融合蛋白。     

腹腔镜下胆囊逆行切除术37例体会

１９９８年１２月～１９９９年１２月 ,我们共施行腹腔镜下胆囊切除术 (ＬＣ)５７７例 ,对其中因胆囊充满结石并萎缩、急性炎症、结石嵌顿及Ｃａｌｏｔ三角严重粘连等原因而难以常规顺行手术切除的３７例改行腹腔镜下胆囊逆行切除术 ,效果满意 ,报道如下。１．一般资料 :男１２例 ,女２５例 ;年龄２７～６９岁 ,平均４６．７岁。慢性胆囊炎伴结石３０例 ,急性胆囊炎伴结石７例。其中胆囊充满型结石２３例 ,萎缩性胆囊炎９例 ,ＭｉｒｉｚｚｉⅠ型３例 ,胆囊癌变２例 ,Ｃａｌｏｔ三角区严重粘连２６例。２．手术方法 :本组患者均按常规ＬＣ步…     

晚期阻塞性黄疸减黄术式选择

目的 了解各种肝内胆管引流治疗不能切除的恶性胆道梗阻的疗效。方法 采用肝门部胆囊床，肝表面，肝正中裂，肝方叶切除和介入治疗等方法行肝内胆管内或外引流术。结果 手术组；肝门部入路51例，经胆囊床入路5例，经肝表面入路27例，经肝正中裂入路50例，肝方切除10例；手术行肝内胆管外流术42例，行肝内胆管胆总管与空肠吻合术47例，行置管贺桥内引流术54例，所有病人无手术死亡，手术成功率为81%，减黄效果显著，减黄有效率78.3%，术后并发症有胆漏，膈下感染，切口感染和导管堵塞，介入组；右肝内胆管外引流（PTCD）7例，左右肝管外引流（PTCD）10例，行胆管外引流（PTBD PTBS）33例，减黄效果显著，减黄有效率80%，术后有胆管炎和胰腺炎发生。结论 肝内胆管引流是治疗不能切除的恶性胆道梗阻的重要方法。能减轻症状，提高生活质量和延长生命。     

胶质细胞生长因子真核表达载体的构建及其在脊髓内的表达

目的:构建胶质细胞生长因子2真核表达载体pEGFP-N1-GGF2,观察其在大鼠脊髓内的表达。方法:实验于2004-01／10在解放军第二军医大学长征医院神经外科实验室完成。出生1周SD大鼠2只和体质量250-300 g雄性成年SD大鼠12只。将成年大鼠分为对照组和实验组,每组6只。①采用反转录聚合酶链反应方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出胶质细胞生长因子2 的全序列cDNA。②以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1-GGF2。③采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pEGFP-M1-GGF2混合后转染至实验组大鼠胸段脊髓组织中;对照组大鼠只注射脂质体和空白质粒pEGFP-N1的混合物。基因注射后1周,两组各取3只大鼠麻醉后取材行反转录聚合酶链反应,另取3只大鼠麻醉后取出T8,T9脊髓,冰冻切片后行荧光照相,观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:12只大鼠均进入结果分析。①大鼠胶质细胞生长因子2 cDNA的克隆结果:成功克隆胶质细胞生长因子2 cDNA。②重组质粒pEGFP- N1-GGF2的构建结果:酶切鉴定及测序分析证实成功构建胶质细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-GGF2。③反转录聚合酶链反应证明胶质细胞生长因子mRNA表达:实验组基因转染1周后局部脊髓内胶质细胞生长因子2 mRNA的表达显著增加。④pECFP-N1-GGF2基因体内转染结果:实验组注射局部脊髓内灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达;而对照组未见荧光蛋白表达。结论:阳离子脂质体介导胶质细胞生长因子2基因体内转染的方法是可行的,增强型绿色荧光蛋白可作为报告基因观察胶质细胞生长因子2 基因在体内的表达。     

介入栓塞治疗Cobb综合征1例报告

1临床资料患者,男性,26岁,因"双上肢麻木、乏力1年,加重2个月"于2007年7月26日入住第二军医大学长征医院神经外科.患者于2006年7月无明显诱因出现双上肢麻木、乏力,以左侧上肢明显.     

胃癌术后经肝动脉化疗的临床研究

胃癌术后血行转移是影响胃癌术后生存率的重要因素之一。本报告21例胃癌病人在行胃癌根治术中经胃十二指肠动脉肝动脉插管并右上腹皮下埋泵．术后第1．3．6．12月经皮下泵向肝动脉内灌注抗癌药物(5-Fu．丝裂霉素．表阿霉素)．并与同期54例胃癌根治术后经静脉全身化疗进行比较。结果显示两组病人的肝,肺转移率、腹腔内转移率．毒副反应及生存率均存在统计学差异(P<0．01及P<0．05),我们认为胃癌术后经肝动脉插管化疗比全身静脉化疗能更有效地防止胃癌术后的血行转移且毒副反应小,并能提高生存率。     

颅内压监测阶梯治疗方案治疗继发严重外伤性脑水肿

目的 探讨颅内压监测下的阶梯治疗方案对于严重外伤性脑水肿的治疗有效性.方法 24例入院评分GCS 14或15分的轻度颅脑损伤患者继发严重脑水肿,经有创颅内压监测,阶梯治疗方案有效控制高颅压,缓解脑水肿.结果 颅内压监测下的阶梯治疗安全有效地治疗此病例组的脑水肿和高颅压,其中14例手术清除血肿去骨瓣减压,10例仅阶梯治疗就良好控制颅内压,所有病例组无死亡和严重并发症,3个月后随访所有病例GOS评分均为5分.结论 颅内压监测下阶梯治疗方案在控制轻度颅脑损伤患者继发严重脑水肿是有效的;颅内压是此类患者治疗重要的监测标准.     

脂质体介导增强型绿色荧光蛋白和胶质细胞生长因子双基因载体在脊髓内共转染表达

目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)和胶质细胞生长因子2(glial growth factor 2, GGF2)的双基因真核表达载体pIRES2-EGFP-GGF2, 研究GGF2在大鼠脊髓内的表达.方法:采用RT-PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出GGF2全序列cDNA,利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(internal ribosome entry site, IRES),构建GGF2与EGFP双基因真核表达载体pIRES2-EGFP-GGF2.采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pIRES2-EGFP-GGF2基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中,观察GGF2在大鼠脊髓中的表达.结果:成功构建pIRES2-EGFP-GGF2质粒,在转染的局部脊髓内观察到GGF2 mRNA表达显著增加.荧光显微镜下观察发现,注射局部灰质和白质神经元内均有较多绿色荧光蛋白表达.结论:阳离子脂质体能介导EGFP和GGF2双基因载体在脊髓内同时表达,EGFP可作为报告基因观察GGF2在脊髓内的表达.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的　探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法　取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论　PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高可能与激活细胞内蛋白激酶A和蛋白激酶C信号转导系统有关     

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自 1990年 11月至 1995年 5月 ,我们对行肝癌根治性切除术的 85例病人 ,于术中同时行肝动脉门静脉双埋泵(ＩＤＤＳ) ,用以术后化疗与栓塞 ,取得了良好的疗效。现对照同期未行埋泵术的 2 9例肝癌手术病人 ,报告如下。1　临床资料治疗组 85例 ,男 76例 ,女 9例。年龄平均 49岁 ( 2 4～73岁 )。全部病例均为肝细胞癌。单发肿瘤 75例 ,肿瘤位于肝脏某一段或有数段同时累及。多发肿瘤 ( 2处病灶 ) 10例 ,肿瘤分别位于左右肝或不相邻的两个肝段。肿瘤大小1 8～ 2 7ｃｍ不等。对照组 2 9例 ,男 2 5例 ,女 4例。年龄平均 45岁 ( 2 2～ 6 9岁 )。肿瘤…