新生大鼠脊髓神经干细胞的分离培养及鉴定

目的　从新生大鼠的脊髓中分离培养神经干细胞并观察其增殖和分化能力。方法　采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法。结果　分离的细胞生长旺盛 ,单克隆化生成的细胞团 ,BrdU掺入呈强阳性。分离培养获得的细胞团呈Nestin强阳性 ,至今已在体外连续传代 8个月。培养的细胞团经 1%小牛血清诱导可分化为神经元和星形胶质细胞。结论　成功分离培养了新生大鼠脊髓神经干细胞     

神经干细胞的端粒酶活性与其增殖分化的关系

目的探讨体外培养的神经干细胞端粒酶活性与细胞增殖、分化的关系,以及细胞分化后端粒酶逆转录酶的表达情况。方法采用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞；通过免疫荧光细胞染色鉴定神经干细胞；细胞计数法检测细胞的增殖情况；TRAP-ELISA法测定神经干细胞的端粒酶活性：RT-PCR法和Western-blot法测定细胞分化前后的端粒酶逆转录酶的表达。结果从新生大鼠脑皮质分离培养的神经干细胞具有端粒酶活性；体外培养12周内,神经干细胞的端粒酶活性未见变化,细胞的增殖速率亦未见明显不同；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,端粒酶逆转录酶的mRNA和蛋白质也均未见表达。结论在体外培养过程中,大鼠脑神经干细胞的端粒酶活性和细胞增殖速率未见变化；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,可能是由于端粒酶逆转录酶停止表达所致。     

环硫雄醇抗人乳腺癌和子宫颈癌细胞生长的作用

环硫雄醇(Epitiostanol)学名:2α,3α-环硫-5α-雄甾-17β醇,据报道有抗癌作用。最近我们在国内首次人工合成环硫雄醇纯品,并以免疫抑制小鼠及人乳腺癌细胞株(BCap-37)和子宫颈癌细胞株(HeLa)为模型,进行了抗癌活性的研究。实验方法与结果一、剂量反应试验:BCap-37及HeLa细胞传代并各接种21瓶(3×10~5细胞/瓶),随机分成7组,每3瓶一组;置37℃温箱培养24小时后更换新鲜培养液,分别加入0、50、100、250、500、1000μg/ml的环硫雄醇及50ml蒸馏水;在37℃温箱内作用12小时后以苔盼蓝排除法计算各剂量组的细胞存活率,取存活率50％对应剂量作为实验剂量。细胞存活率=(存活细胞数+修正数)/(3×10~5)×100％ (修正数=3×10~5-空白组细胞存活数)本实验结果取500μg/ml为实验剂量。     

”微岛“原代培养新生大鼠中脑腹侧多巴胺能神经元

目的 探讨“微岛”原代培养中脑腹侧多巴胺能神经元的方法,研究不同培养液维持多巴胺能神经元存活和生长的效果,及多巴胺能神经元与其他神经元在“微岛”上的共培养,为多巴胺能神经元的相关研究提供一种新的细胞模型。方法 利用神经细胞不能粘附于琼脂糖上生长的原理,先用琼脂糖制成非粘附性底物,再将胶原喷洒其上形成粘附性的“岛”样底物,接种神经胶质细胞形成微岛样饲养层后,将大鼠中脑腹侧神经元接种于“微岛”上生长。结果 中脑腹侧多巴胺能神经元可在“微岛”上生长,即使单个神经元也生长良好。在共培养时,能与其他神经元形成突触联系。结论 确定适于“微岛”原代培养中脑腹侧多巴胺能神经元的培养条件,该培养法可为多巴胺能神经元的相关研究提供一种新的细胞模型。     

神经节苷脂在神经系统发育过程中的作用

1935年，Klenk首先在大脑灰质的Ganglionzellen细胞中发现了一种新物质，命名为ganglioside-神经节苷脂，其种类繁多，至今已分离鉴定出70余种。神经节苷脂是一组含有唾液酸的鞘糖脂，分子由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成，广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜上，其中以神经系统含量最为丰富。通常根据唾液酸数目不同分为GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(二唾液酸神经节苷脂)和GT(三唾液酸神经节苷脂)等。又根据糖基数目不同将GM分为GMl(含4个糖基)、     

细胞移植术对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺的影响

目的 探讨细胞移植过程中麻醉以及细胞植入等操作对中枢神经递质谷氨酸和多巴胺的影响. 方法 体外培养的新生大鼠大脑神经干细胞定位植人正常成年大鼠大脑纹状体.采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态检测探针置人、麻醉剂氯胺酮和戊巴比妥钠以及移植细胞等操作对谷氨酸和多巴胺水平的影响. 结果 探针置人大鼠纹状体后15 min.纹状体内谷氨酸和多巴胺的水平均明显高于基础值,5～6h后方恢复至基础水平.戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉后15 min均可使大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平呈一过性升高.细胞植入本身对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平无明显影响. 结论 常规剂量的戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉均可使脑内谷氨酸和多巴胺水平短暂升高.进行脑微透析术检测谷氨酸和多巴胺应在探针置入至少6h后进行.     

不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的：探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法：分离培养大鼠脑神经干细胞，免疫荧光细胞染色加以鉴定，采用不同组合配方的培养液培养细胞，通过计数神经干细胞球数，判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果：在bFGF，EGF和N2组成的8种不同配方培养液中，bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方，是8周中与对照组比较所有P&;lt;0.05的惟一配方；EGF具有促进神经干细胞分化的作用，而促增殖能力不如bFGF；相比之下，N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论：bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用，其作用较EGF和N2强，EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察

背景：神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径，也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型，神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础。目的：分离培养和鉴定人脑神经干细胞。设计和方法：采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。地点和材料：实验在福建医科大学分子医学研究中心实施。实验材料为自然流产的孕龄6—8周的人胚胎脑组织。主要观察指标：人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能。结果：人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外大量增殖，经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞，是研究神经干细胞诱导分化的良好模型。     

Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组（P〈0．05）。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ～Ⅲ级显著高于Ⅳ级（P〈0．05）,Hes5的表达在2组间差别无统计学意义（P〉0．05）。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好（k=0．503）,与Hes5的表达一致性差（k=0．216）。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。     

人notch1—shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体,为Notch信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人notch1基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pENTR／U6质粒,通过与pLenti6／BLOCK—iT—DEST载体的LR重组,构建notch1—shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导人293FT细胞,包装成慢病毒。用该慢病毒感染人神经母细胞瘤系SH—SY5Y细胞,RT-PCR和Westernblot法检测细胞notch1基因的表达。结果目的序列成功连接于载体并包装成较高滴度的慢病毒,细胞mRNA和蛋白质的检测均表明构建的notch1—shRNA慢病毒表达载体LR-ND-A能显著抑制SH-SY5Y细胞notch1基因的表达。结论成功构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体。