丙酮酸乙酯对人脑胶质母细胞瘤U251细胞和HMGB1的抑制作用

目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞的作用及可能的机制。方法不同浓度EP处理U251细胞后,分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆的方法检测EP对U251增殖及克隆形成能力的影响,并采用Hoechst 33258染色和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色流式细胞术观察细胞凋亡的变化,蛋白印迹法分析高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平的变化。结果 EP(10、15、20 mmol/L)分别作用8 h、16 h、24 h后均能抑制U251细胞的增殖,且存在显著的剂量-时间效应关系。与对照组相比,EP处理后U251细胞克隆形成能力减弱、细胞凋亡率升高。不同浓度组EP作用U251细胞24 h后HMGB1的蛋白表达水平随药物浓度的增加而降低。结论 EP能明显抑制人脑胶质母细胞瘤U251增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与下调HMGB1的表达水平有关。     

RIP1/RIP3通路介导氯化血红素诱导的HT-22海马神经细胞损伤的研究

目的探索受体相互作用蛋白激酶1（RIP1）/RIP3通路是否参与氯化血红素（hemin）诱导的HT-22海马神经细胞损伤以及研究Necrostatin-1（Nec-1）在hemin诱导的HT-22细胞死亡中潜在的神经保护作用。 方法给予不同浓度的hemin（0、25、50、100 μmol/L）作用HT-22细胞24 h后测定碘化丙啶（PI）阳性细胞数和细胞存活率。用Necrostatin-1、zVAD和活性氧（ROS）清除剂叔丁基茴香醚（BHA）分别处理hemin诱导的HT-22细胞,24 h后分别测定各组PI⁺细胞数、细胞存活率,使用MitoSox Red指示ROS水平。最后研究使用siRNA敲低RIP3水平对hemin诱导HT-22细胞死亡的影响,测定各组PI⁺细胞数、细胞存活率及ROS水平。 结果Hemin可剂量依赖性的诱导HT-22神经细胞死亡;RIP1抑制剂Necrostatin-1可显著抑制hemin诱导的HT-22细胞死亡,PI⁺细胞数明显减少,细胞存活率提高,并且减少ROS积聚;BHA可显著减少hemin诱导的HT-22细胞的PI⁺细胞数。更进一步的使用siRNA敲低RIP3表达水平可以显著减少hemin诱导的HT-22细胞死亡,PI⁺细胞数明显减少,细胞存活率明显提高,ROS积聚水平显著减低。 结论RIP1/RIP3通路及ROS可能介导hemin诱导的HT-22海马神经元细胞死亡,Necrostatin-1在其中起神经保护作用。