稳定增殖神经干细胞的实验研究

目的探讨稳定、可靠建立神经干细胞体外增殖的方法,并对增殖培养的细胞进行鉴定。方法获取胚胎大鼠的脑组织,通过加入神经生长因子和采用保留细胞联系技术操作,使脑组织中的神经干细胞在体外克隆增殖并稳定传代。以免疫荧光方法对增殖克隆的神经干细胞球进行鉴定。结果神经干细胞不断增殖形成神经干细胞球且神经干细胞能快速稳定传代增殖。培养的细胞为神经干细胞特异性巢蛋白(nestin)染色阳性细胞。结论在神经生长因子的作用下,利用保留细胞联系技术操作,神经干细胞可以在体外快速、稳定克隆增殖并传代。     

立体定向技术建立大鼠颞叶癫痫模型

目的 探讨立体定向技术在建立大鼠颞叶癫痫模型的实用性及模型长久癫痫敏感性的病理学基础。方法 按公斤体重计算的红藻氨酸剂量，应用立体定向手术一次性注入大鼠的海马组织，于手术后不同的时间段观察大鼠的癫痫发作情况和海马组织的形态学变化。结果 手术后的大鼠在经历“湿狗样抖动”、口唇和头的自运动症、前肢抽搐、后肢抽搐后，进入强直一阵挛性全身发作。以后，每周均有自行发作，发作表现与人类颞叶癫痫发作基本一致。海马神经元的缺失、胶质细胞增生是模型长期癫痫敏感性的基础。结论 立体定向手术建立的大鼠颞叶癫痫模型发作形式、病理学基础与人类的颞叶癫痫基本一致，并且具有长期的癫痫敏感性。同时，应用立体定向技术局部注药，用药量较系统给药明显减少，耗资大大降低，是临床科研中既可靠又经济实用的方法。     

神经干细胞的基础和临床研究

由于固有观念的束缚,直到最近神经干细胞（neural stemcells）的概念才开始应用于成熟的中枢神经系统研究中。 一、基础研究 1.神经干细胞的定义和特性:1989年,Anderson参照造血系统干细胞的特性,提出了神经干细胞的概念:一类具有自我更新能力、高增殖潜能以及多分化潜能的细胞。关于神经干细胞的概念,目前尚无统一的定义。有人称之为神经祖细胞（neural progenitor cell）或神经前体细胞（neural precursorcell）。但这3个概念还是存在一定差异的,神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。祖细胞是相对于干细胞而言,仅具有单潜能或双潜能分化能力或其干细胞样特性只能维持较短的时间。而前体细胞则是一个不太严格的术语,是指在发育进程中较另一种细胞处于更早阶段的细胞,可统称干细胞和祖细胞。     

神经干细胞的增殖分化及在癫痫治疗中的应用

神经干细胞是中枢神经系统中一类具有自我更新能力、高增殖潜能以及分化潜能的细胞 ,它来源于室管膜细胞 ,存在于胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统脑室系统周围的广泛区域。神经干细胞的增殖和分化受到多种因素的调控 ,目前研究较多的是碱性成纤维细胞生长因子 (basicfi broblastgrowthfactor,bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor ,EGF)。在成功地培养了神经干细胞之后 ,它被用来进行移植治疗 ,同时借助外界某种刺激可使中枢神经系统内的神经干细胞激活 ,促进神经元和胶质细胞的生成。向γ 氨基丁酸能神经元分化的神经干细胞的移植…     

建立海人酸颞叶癫模型的实验研究

目的建立用立体定向技术制作大鼠海人酸颞叶癫癎模型的方法,并对模型永久癫癎敏感性的原因进行研究。方法将海人酸通过立体定向手术注入大鼠的海马组织,于不同的时间观察大鼠的癫癎发作情况和海马组织的病理学改变。结果大鼠在经历“湿狗样抖动”、口唇和头的自运动症、前肢抽搐、后肢抽搐后,进入强直-阵挛性全身发作,之后,每周均有自行发作,表现与人类颞叶癫癎极为一致。海马神经元的缺失、胶质细胞增生是模型长期癫癎敏感性的基础。结论立体定向方法建立的大鼠颞叶癫癎模型的发作形式及病理学改变与人类的颞叶癫癎极为一致,并且具有长期的癫癎敏感性。另外,立体定向局部注药所用海人酸的量较系统给药明显减少,花费显著减少。因此,该模型即可靠又经济。     

病灶切除联合热灼术治疗顽固性继发癫癎的疗效初探

目的　探讨病灶切除联合灶皮质横纤维热灼术治疗顽固性继发癫的效果。方法　对病灶切除联合热灼组与病灶及周围非功能区灶皮质切除组的疗效随访 2 .5～ 5 .5年 ,平均 4 .0年 ,并进行比较。结果　病灶切除联合热灼组效果明显优于病灶及周围非功能区灶皮质切除组 ,两组存在显著性差异(P <0 .0 1)。同时 ,病灶切除加热灼无永久性术后并发症。结论　病灶切除联合皮质灶热灼术是治疗顽固性继发癫安全有效的创新方法 ,远期疗效尚需进一步观察     

神经干细胞的定向分化调控及移植治疗颞叶癫痫

一、神经干细胞的来源和分裂 神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。     

闭合性腹部创伤致失血性休克早期抢救的护理体会

我院1990－1997年共抢救闭合性腹部创伤致失血性休克对例，其中，复合伤48例，肝破裂26例，脾破裂19例。结果治愈89例，死亡4例。我们体会到，对闭合性腹部创伤患者进行早期病情观察，可以协助医生早期诊断，进行抢救，对挽救病人的生命及愈合有重大意义。现将抢救及护理体会，总结如下。l观察病人的神志，皮肤粘膜色泽，温度。早期休克患者易烦躁、精神紧张、面色苍白、出冷汗、四肢发凉。如病人出现紫组、反应迟钝、表情淡漠、说明休克加重。应迅速给予抗休克治疗。2迅速建立静脉通道，便于快速补充血容量，为抢救赢得时间，必要时，建立…     

神经干细胞NgR基因沉默移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 探讨是否可以通过沉默Nogo-66的受体(NgR)基因的方法提高神经干细胞(NSCs)移植对脊髓半横断损伤大鼠的治疗效果.方法 取胎龄为14～16 d的Wistar胎鼠脑组织,体外培养NSCs,经小分子干扰RNA(siRNA)转染以沉默NgR基因,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测NSCs在转染前后NgR的蛋白表达.另将36只Wistar大鼠按随机数字表法均分成3组,切断胸8、胸9段右半侧脊髓致伤.A组为注射等量不含NSCs的培养液对照组;B组为单纯NSCs移植组;C组为沉默NgR基因NSCs移植组.各组分别于伤后1、2、4、6、8周采用斜板实验进行行为学评估,观察神经恢复情况.第4周取脊髓组织制备病理切片,行苏木素-伊红(HE)染色及5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫组化染色;8周后取脊髓组织,行辣根过氧化物酶(HRP)示踪观察.结果 转染siRNA后,NgR的蛋白表达水平较转染前明显降低(1.03±0.08比1.88±0.15,P=0.002).斜板实验:8周时,B、C两组大鼠后肢运动功能均明显恢复,C组较B组为快(P＜0.05).A组切片未见神经轴索通过,B、C组可见少量神经轴索样结构.BrdU阳性细胞及HRP阳性神经纤维束数C组＞B组＞A组(BrdU阳性细胞:A组(39.82±14.07)个、B组(91.68±12.34)个、C组(103.67±11.52)个,HRP阳性神经纤维束:A组(11.35±1.71)个、B组(39.87±2.42)个、C组(83.64±2.13)个],且各组间差异有统计学意义(均P＜0.01).结论 NSCs的NgR基因沉默后移植治疗大鼠脊髓损伤可明显改善损伤后大鼠的后肢功能.     

神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元的诱导分化

目的探索海马神经干细胞在特定条件下分化成γ-氨基丁酸能神经元的情况,为颞叶癫痫的细胞替代学治疗奠定基础。方法新生大鼠海马组织中的神经干细胞在体外增殖后,加入特定的细胞因子进行诱导,使其向γ-氨基丁酸能神经元分化,对分化的细胞进行神经元烯醇化酶（NSE）、微管相关蛋白（MAP-2）、γ-氨基丁酸（GABA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和半乳糖脑苷脂酶（GalC）免疫荧光染色鉴定,判断其分化成γ-氨基丁酸能神经元的情况。结果海马神经干细胞诱导贴壁后即发生分化,其中几乎全部分化成神经元（γ-氨基丁酸能神经元）,只有极少的胶质细胞和少突胶质细胞形成。结论从海马神经干细胞中几乎可以完全诱导形成γ-氨基丁酸能神经元,这为颞叶癫痫的细胞替代学治疗奠定了基础。