建构主义教学理论在局部解剖学教学中的应用及反思

建构主义（constructivism）是在认知主义基础上发展起来的独特的学习观，它认为“学习不应该被看成是对于教师授予知识的被动接受，而是学习者以自身已有的知识和经验为基础主动的建构活动”。也就是说，学生学习过程是在教师创设的情境下，借助已有的知识和经验，主动探索，积极交流，从而建立新的认知结构的过程。基于建构主义教学理论而产生的新型教学模式，也在各类教学实践中得到普遍运用。     

免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射建立阿尔茨海默病动物模型的实验研究

目的建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)动物模型,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元改变。方法采用SD大鼠侧脑室注射192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),21d后行Y迷宫检测,28d后处死大鼠,免疫组化观察基底前脑神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元细胞数的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠的学习次数、记忆能力(107.38±9.34、3.75±0.71)较正常组明显下降(P<0.01)。免疫组化显示模型组损伤侧在内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)的NGFR阳性神经元细胞数(7.50±1.77、15.00±2.27)与正常组对应侧比较分别减少81.96%和84.23%(P<0.01),MS和VDB的NGFR阳性神经元面积和周长降低(P<0.05),灰度值升高(P<0.05)。结论免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射可以模拟AD行为学改变和部分病理学特征。     

穹窿海马伞损伤对成年鼠学习记忆和海马GFAP阳性细胞的影响

目的:探讨穹窿海马伞(ＦＦ)损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维性蛋白(ＧＦＡＰ)阳性细胞之间的关系。方法:切断ＳＤ成年大鼠左侧ＦＦ,用Ｙ迷宫和免疫组化结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马ＧＦＡＰ阳性细胞的变化情况及相互关系。结果:损伤２周后,损伤组损伤侧海马ＣＡ１区辐射层和齿状回分子层ＧＦＡＰ阳性细胞数密度(Ｎｖ)较正常组分别增多３０．２９%和３０．１５%(均Ｐ＜０．０１),胞体面积分别增加１６．０４%和１９．４２%(均Ｐ＜０．０１),齿状回分子层体密度(ＶｃｖＢ)增大１９．４０%(Ｐ＜０．０５)。经相关分析,大鼠学习记忆能力与海马ＣＡ１区ＧＦＡＰ阳性细胞Ｎｖ呈负相关(ｒ＝－０．８３６,Ｐ＜０．０１),与齿状回Ｎｖ呈负相关(ｒ＝－０．７９２,Ｐ＜０．０１)。结论:海马星形胶质细胞可能参与学习记忆过程。     

5-IAF标记兔心肌肌钙蛋白C的荧光特性

背景：心肌肌钙蛋白在检测心肌梗死的诊断中有极其重要的临床意义。 目的：将荧光标记物5-iodoaccetamidofluorescein (5-IAF)应用于心肌肌钙蛋白，观察其是否可用作与收缩调节蛋白之间相互作用的研究。 设计、时间及地点：随机对照实验，于2002-01/2005-12在广州医学院人体解剖教研室完成。 材料：成年兔，由广州医学院实验动物中心提供。 方法：利用反转录-聚合酶链反应技术制备兔心肌肌钙蛋白C的基因片段，应用基因重组技术将兔心肌肌钙蛋白C基因片段克隆到pET表达载体，根据PCR定点诱变的方法，取得突变型的兔cTnC(C35S)，分别将5-IAF和2- (4’-(iodoacetamido) anilino) naphthalene-6sulfonic acid (IAANS)标记在兔肌钙蛋白C(C35S)，并进行恒态荧光测定和时间-分辨荧光测定。 主要观察指标：兔cTnC(C35S)-IAF及cTnC(C35S)-IAANS的荧光特性。 结果：5-IAF标记的兔肌钙蛋白C在波长491 nm处进行激发，其发射峰值出现在波长520 nm处，加入饱和的镁离子可导致荧光强度减少35%，继续用饱和的钙离子滴定，其荧光强度再减少35%，而且波峰向蓝光方向移动3 nm。IAANS标记的cTnC(C35S)在加进镁离子和钙离子后引起的荧光反射的跃迁，并不出现在用5-IAF标记的cTnC上。然而，不管使用哪一种荧光标记物，钙引起cTnC的构象变化这个作用并没有改变。钙滴定实验表明，两种荧光标记物标记的荧光发射结合参数是一致的。 结论：5-IAF标记可以应用于心肌肌钙蛋白与其他收缩调节蛋白之间相互作用的研究。     

侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究

建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。     

5-IAF标记兔心肌肌钙蛋白C的荧光特性

背景：心肌肌钙蛋自在检测心肌梗死的诊断中有极其重要的临床意义。目的：将荧光标记物5-iodoaccetamidofluorescein（5-IAF）应用于心肌肌钙蛋白，观察其是否可用作与收缩调节蛋白之间相互作用的研究。设计、时间及地点：随机对照实验，于2002—01／2005—12在广州医学院人体解剖教研室完成。材料：成年兔，由广州医学院实验动物中心提供。方法：利用反转录一聚合酶链反应技术制备兔心肌肌钙蛋白C的基因片段，应用基因重组技术将兔心肌肌钙蛋白C基因片段克隆到pET表达载体，根据PCR定点诱变的方法，取得突变型的兔cTnC（C35S），分别将5-IAF和2-（4’-（iodoacetamido）anilino）naphthalene-6sulfonicacid（IAANS）标记在兔肌钙蛋白C（C35s），并进行恒态荧光测定和时间-分辨荧光测定。主要观察指标：兔cTnC（C35S），IAF及cTnC（C35S）-IAANS的荧光特性。结果：5-IAF标记的兔肌钙蛋白C在波长491nm处进行激发，其发射峰值出现在波长520nm处，加入饱和的镁离子可导致荧光强度减少35％，继续用饱和的钙离子滴定，其荧光强度再减少35％，而且波峰向蓝光方向移动3nm。IAANS标记的cTnC（C35S）在加进镁离子和钙离子后引起的荧光反射的跃迁，并不出现在用5-IAF标记的cTnC上。然而，不管使用哪一种荧光标记物，钙引起cTnC的构象变化这个作用并没有改变。钙滴定实验表明，两种荧光标记物标记的荧光发射结合参数是一致的。结论：5-IAF标记可以应用于心肌肌钙蛋白与其他收缩调节蛋白之间相互作用的研究。     

BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据 BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体 pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF。结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合。结论构建的重组逆转录病毒表达载体 pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源。