消化系统癌症患者血清α1—抗胰蛋白酶检测及临床意义

作者采用酶法及免疫电泳法同时测定了多种消化系统癌症患者血清α１－抗胰蛋白酶水平，结果显示数种消化系统癌症患者血清α１－ＡＴ水平均较正常对照组显著增高（Ｐ〈０．００１），两种测定方法结果一致。结果证明血清α１－ＡＴ，作为一种急性时相反应物，在各种消化系统瘤发生时可非特异性升高，因此α１－ＡＴ测定对这些肿瘤的诊断有一定临床价值，两种测定方法的比较说明免疫电泳法是血清α１－ＡＴ临床测定的较好方法。     

IBA损伤老化鼠脑Meynert核的AD模型动物研究

目的研究定位损伤脑胆碱能系Alzheimer病(AD)模型大鼠学习能力及相关脑神经肽免疫组化改变.方法用兴奋性毒素鹅膏蕈氨酸(IBA)定位损伤大鼠脑右侧Meynert核,观察模型动物学习能力改变(Y型迷宫法),并用分光光度法和免疫组化染色法观察动物脑胆碱酯酶(AchE)活性和皮层及海马β-淀粉样肽前体(β-APP)、生长抑素(SOM)及P物质(SP)的表达情况.结果模型组老化大鼠经损伤后,学习能力及脑AchE活性显著低于对照组(P均＜0.05).β-APP在额叶皮层和海马的表达均升高,而S()M表达则显著减少,用IBA及β-AP25-35同时损伤鼠脑时,可显示脑皮质区SP表达增加(P均＜0. 01).单独用IBA注射无效.结论IBA损伤老化大鼠脑Meynert核建立的动物模型,显示胆碱能系统损伤,学习能力障碍,β-APP过表达而神经肽SOM表达降低,一定条件下SP表达增加,与AD病人某些临床和病理特征基本一致.     

人胃癌SGC-7901细胞胞浆胞核性激素受体测定

 作者采用葡聚糖包被活性碳饱和分析法(DCC法)分别测定了培养的人胃低分化腺癌SGC-7901细胞的胞浆及胞核KCL抽提液中的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和雄激素受体(AR)的含量。 结果证明胃癌SGC-7901细胞的胞浆及胞核抽提液中ER含量为30.2和35.7fmol/mg蛋白，而PR的含量为20.3和22.7fmol/ng蛋白, 但AR均为阴性(<10fmol/mg蛋白), 这说明SGC-7901细胞为ER及PR阳性细胞, 其ER和PR在胞浆、胞核中均有分布。 提示胃癌可能为性激素依赖性肿瘤, 有内分泌治疗的可能。     

人源性中性内肽酶稳定转染细胞株的建立

目的：获得中性内肽酶（NEP）及失活中性内肽酶（inNEP）稳定表达的细胞株。方法：用酶切及基因测序鉴定质粒pcDNA3．1-hNEP及pcDNA3．1-inNEP（E585V）；以脂质体Ljpofectamjne^TM2000介导pcDNA3．1-hNEP及pcDNA3．1-inNEP（E585V）转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH，分别获得两者的稳定表达细胞株；用RT-PCR及Western blot分析NEP的表达。结果：转染4周后，可见G418单克隆抗性细胞株形成，转染pcDNA3．1．hNEP及pcDNA3．1-inNEP（E585V）的细胞NEP表达均增高。结论：获得稳定转染pcDNA3．1-hNEP及ocDNA3．1-inNEP（E585V）的细胞株。     

氯化锰致PC12细胞损伤的研究

探讨氯化锰（MnCl2）对PC12细胞的损伤作用。方法：构建MnCl2诱导的PC12细胞模型，用MTT法检测细胞存活率，用荧光分光光度法检测乳酸脱氢酶（LDH）和活性氧（ROS）生成量，用化学比色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：MnCl2诱导的PC12细胞存活率明显下降，并与诱导时间和浓度呈正相关；MnCl2使PC12细胞LDH外溢量和ROS生成量显著增加，同时细胞内MDA含量增加，SOD活性下降。结论：MnCl2可导致PC12细胞的氧化损伤。     

氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制

目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。     

两种培养人胃癌细胞性激素受体含量与比较

培养两种不同分化程度的人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１和ＮＫＭ－４５细胞，分离其胞浆和胞核ＫＣＩ抽提液。用葡聚糖包被活性炭饱和分析法分别测定各细胞组分中雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）、雄激素受体（ＡＲ）。结果：ＳＧＣ－７９０１细胞胞浆胞核抽提液中ＥＲ含量为３０．２和３５．７ｆｍｏｌ／ｍｇ（１ｆｍｏｌ＝１０－１５ｍｏｌ）蛋白，ＰＲ含量为２０．３和２２．７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，ＮＫＭ－４５细胞胞浆和胞核抽提液中ＥＲ含量为２４．８和２５．１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，ＰＲ含量为１６．４和１８．６ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。而两种细胞ＡＲ均为阴性（＜６～１０ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）。结果说明两种胃癌细胞均为ＥＲ、ＰＲ阳性，而分化程度更低、转移性较强的ＳＧＣ－７９０１细胞株ＥＲ、ＰＲ含量较高。提示ＥＲ水平与胃癌细胞的分化程度相关，ＥＲ阳性胃癌组织似为性激素依赖性，内分泌治疗可能有效果。     

中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 确定中性内肽酶（NEP）高表达对β-淀粉样肽（AB）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和免疫印迹法（Western blot法）检测基因在细胞中的表达。利用AB25-35诱导PC12细胞，CellTiter96AQueous单溶液检测系统（MTS）检测细胞存活率；分光光度法检测乳酸脱氢酶（LDH）含量、活性氧（ROS）生成量水平变化；化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化。结果 在AB25-35诱导PC12细胞凋亡中，NEP高表达可明显提高细胞存活率，降低培养基中LDH含量和ROS生成量；提高细胞ATP释放量；抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活，与正常PC12细胞相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论 NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤，抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活，从而提高AB25-35诱导的神经细胞的存活率。     

培养神经细胞的氧自由基损伤及银杏叶提取物的治疗作用

目的 探讨氧自由基在Alzheimer病(AD)发病中的作用和评价银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract，EGb)的临床应用价值。方法 以产生超氧阴离子系统黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶(X／XO)作用于PC12细胞，并以EGb拮抗其作用，电镜观察细胞形态变化，MTF法检测细胞存活率，流式细胞术分析细胞凋亡情况，RT-PCR技术分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达变化。结果 经X／XO损伤后，细胞存活率降低，凋亡率增加，促凋亡基因Bax表达上调。EGb(20mg／L)能改善凋亡情况。结论氧 自由基可诱导神经细胞凋亡而促进AD发生，EGb对神经细胞有保护作用，提示可用于AD的临床治疗与预防．