10株牛源非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析

本研究应用结核分枝杆菌的16S rDNA序列分析方法,鉴定非结核分枝杆菌菌株。应用PCR方法从10株牛源非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段并测序。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列相比较,计算种间相似性,构建系统发育树,对菌株进行分类与鉴定。结果显示,10株牛源非结核分枝杆菌中浅黄分枝杆菌1株;偶发分枝杆菌1株;母牛分枝杆菌2株;新金色分枝杆菌4株;另有2株N8和N9分别与新金色分枝杆菌和偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。检测结果提示,非结核分枝杆菌在牛群中存在应引起重视,而且它们对人畜的致病性需要进一步研究,以便采取有效的防制措施确保人类及畜群的健康。     

奶牛隐性乳房炎的病原菌分离鉴定与药敏试验

奶牛乳房炎是奶牛的多发病、常见病,也是危害奶牛较为严重的疾病。美国、日本报道,乳房炎头阳性率高达50%,乳区阳性率为20%~30%.我国奶牛乳房炎的发生率更高。萧乾庆等(1997)、杨章平等(1998),和李国江等(1998)报道我国奶牛隐性乳房炎头阳性率分别为51.3%,54.1%和46.4%;单志贵等(1996),萧乾庆等(1997)和杨章平等(1998)报道隐性乳房炎乳区阳性率分别为59.1%、31.9%和28.0%[1]。为了了解引起奶牛隐性乳房炎的病原菌种类及其对抗菌药物的敏感性,进行奶牛隐性乳房炎的病原菌分离鉴定及药敏试验就显得尤为重要。1材料与方法1.1奶牛隐性乳房炎的检…     

细菌的活的非可培养状态及其在动物微生态制剂生产中的应用

目前，由于多数益生菌（乳酸菌、双歧杆菌等）不耐热，在60℃几乎全部被杀灭，经受不住饲料制粒与膨化过程中高温高压的破坏作用，因而活菌数量少、菌种活性低就成了生产动物微生态制剂公认的难题。尽管采用冻干技术、稳定化技术、微胶囊化技术及包膜等先进工艺，但也克服不了高成本、繁制备等缺点。而且这类产品在饲喂过程中不经常单独使用，而是与抗生素、矿物质预混剂、多维预混剂、浓缩料等配合使用，这样也会使活菌数显著下降，并且产品贮存条件要求较高，需密封、低温、避光、冷藏等等。因此，利用细菌的活的非可培养状态（viable but noneuhurablestate，VBNC）性质，筛选VBNC菌种将会为动物微生态制剂的生产提供新的办法和解决思路。     

2株鲤鱼源乳酸菌体外抗逆性研究

对2株鲤鱼源乳酸菌作为益生菌候选菌株进行体外抗逆性试验。通过耐受胆盐、耐受pH 值、耐受蛋白酶和耐高温等试验, 对这2株乳酸菌进行研究。其中在胆盐耐受性试验中, YL- 1和YL- 7在胆盐浓度0. 4%、培养4 h时仍有30%以上的存活率; 在pH 值耐受性试验时, 2株乳酸菌均可在一定的酸性和碱性条件下存活; 胰蛋白酶对2株菌的存活率没有影响; 在70e 的高温中, 2株乳酸菌均有一定的耐受性。     

气单胞菌外膜蛋白基因工程疫苗的研究进展

就气单胞菌外膜蛋白的基因工程亚单位疫苗、DNA疫苗、重组活载体疫苗等基因工程疫苗的研究现状、免疫方式以及不足之处进行了综述,以期为气单胞菌疫苗研制提供参考。     

维氏气单胞菌菌影疫苗的构建及其溶菌动力学研究

细菌菌影(Bacterial ghosts)是通过诱导PhiX 174噬菌体中裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达所获得的无细胞内容物的空细菌体.它保持了与活菌相同的膜蛋白成分、天然结构、细胞表面抗原等特性,是一种新型的死菌疫苗.为优化维氏气单胞菌(A.veronii)菌影制备条件,本实验将带有庆大抗性的裂解基因E转入A.veroniiATCC35624株中,通过温度变化对其进行溶菌动力学试验,每隔30 min对菌液OD600nm及其活菌数进行测定,当OD600nm稳定不再下降时,通过扫描电镜观察裂解后菌体的形态变化.结果显示,在诱导30 min后OD600nm值开始持续下降,当其下降到最低值时,活菌检测结果表明几乎无活菌存在.本研究利用菌影形成机制构建A.veronii菌影,为新型疫苗的制备提供依据.     

ROS对氯化镉诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

为研究活性氧(ROS)对氯化镉(CdCl2)诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,本文采用荧光探针DHR检测CdCl2诱导的MCF-7细胞内ROS的变化水平;分别采用MTT法和DNA Ladder法检测CdCl2对细胞的毒性作用和细胞DNA的凋亡情况;通过加入自由基清除剂LNAC抑制细胞内的ROS水平,从而研究ROS对细胞凋亡的影响。结果显示,1.00×10-3 mol/L的CdCl2处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的2.04倍,细胞存活率为26.54%,DNA出现片段化分解。用CdCl2+LNAC复合处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的1.25倍,细胞存活率为61.17%,DNA不出现凋亡条带。因此,由CdCl2所导致的MCF-7细胞凋亡和DNA片段化分解,与细胞内ROS水平的升高有关。     

禽流感病毒H9N2亚型HA基因的序列分析

试验对1株H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆,然后对毒株的HA基因进行阳性克隆鉴定。测序结果表明:所扩增的HA基因全长1 683 bp,编码560个氨基酸;该毒株的裂解位点的氨基酸序列为R-S-S-R,属于低致病力毒株,该毒株有7个潜在糖基化位点,受体结合位点的氨基酸分别为YWT-NVLY,左侧壁氨基酸为NGQQG,右侧壁为GTSKA。将该毒株与国内一些参考毒株的HA基因序列进行比较分析,结果表明,核苷酸与氨基酸同源率较高,核苷酸同源率为93.0%~97.3%,氨基酸同源率为95.4%~96.6%,亲源关系比较近;与韩国毒株核苷酸和氨基酸同源率分别为83.3%和87.3%,亲源关系比较远。     

利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测.通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测.结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292 bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性.因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验.     

布鲁氏菌诊断学研究进展

布鲁氏菌病是一种人兽共患传染性疾病,分布广泛,严重威胁公共卫生事业和畜牧业的发展,布鲁氏菌的诊断是防控该疫病的关键。本文对细菌学、常规免疫学、酶联免疫吸附（ELISA）、免疫胶体金层析法（GICA）、荧光偏振法（FPA）、聚合酶链式反应（PCR）和基因探针等布鲁氏菌检测技术及其优缺点和应用现状进行综述,并对诊断技术的发展前景进行了展望。