中村芽胞杆菌壳聚糖酶在大肠杆菌中重组表达及酶学性质

壳聚糖是一类来源丰富的大分子聚合物,在化工、食品、生物等多个领域都有广泛的应用价值,然而,只有降解成小分子的低聚糖才能更好地发挥其活性。随着酶法降解壳聚糖相较于其它方法的优势愈来愈明显,探索新型稳定高效的壳聚糖酶引起研究者的关注。参考GeneBank数据库中中村芽胞杆菌(Bacillus nakamurai)的壳聚糖酶氨基酸序列设计相应的编码基因,利用大肠杆菌原核表达系统表达和纯化重组蛋白。酶学性质研究结果显示:该酶在最适温度37 ℃,46 ℃处理30 min时仍有50%的相对酶活,最适pH值4.5。在pH 2.5条件下处理60 min时,仍可保持60%相对酶活。Ag+、Hg+完全抑制酶活性,Mn2+、Mg2+、Ca2+对酶活性有促进作用,K+、Na+、EDTA对酶活性无明显作用。本文首次研究来源于中村芽胞杆菌的壳聚糖酶的酶学性质,以拓展该酶库资源,为该酶后续研究和应用提供理论依据。     

基于非靶向代谢组学分析酿酒酵母甲酸胁迫的响应和耐受性机制

采用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MC)的非靶向代谢组学,探究酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)响应甲酸胁迫的代谢机制.主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多元统计结果表明,甲酸处理后酿酒酵母中发生显著变化(P＜0.0...     

对羟基苯甲醛和阿魏酸对酿酒酵母理化特性的影响

研究木质纤维素水解液中的酚类物质对羟基苯甲醛和阿魏酸对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）GGSF16理化特性的影响。结果表明,经药物处理后酿酒酵母的糖代谢时间和乙醇发酵时间延长,胞外核酸、蛋白质和胞内海藻糖含量均显著增加（P＜0.05）,扫描电子显微镜图可以看出,原本完整光滑的细胞经对羟基苯甲醛和阿魏酸处理后细胞表面出现褶皱、粘黏、裂解现象,结合傅里叶变换红外光谱呈现的代表脂质、蛋白质、核酸等分子成分官能团的改变可以得出,对羟基苯甲醛和阿魏酸能够破坏酿酒酵母的细胞壁,增大细胞膜的通透性,从而使细胞内容物流出,导致细胞损伤。     

邻苯二酚对酿酒酵母理化特性的影响

邻苯二酚是木质纤维素水解液中一种主要的细胞生长抑制物,毒性作用较强,能抑制后续酒精发酵过程中酿酒酵母的生长和发酵性能。本文研究邻苯二酚对酿酒酵母GGSF16理化特性的影响,结果表明,邻苯二酚质量浓度为1.2 g/L时,明显抑制酿酒酵母细胞的生长和代谢,导致消耗葡萄糖的时间变慢和乙醇发酵周期变长,降低乙醇生成率;明显改变酵母细胞的膜通透性,使胞内核酸和蛋白质发生内漏,含量分别是对照组的2.50,2.01倍;细胞内的应激代谢物海藻糖含量显著升高2.89倍;此外,为了抵抗细胞的氧化损伤,胞内GSH含量显著降低70.63%。扫描电子显微镜显示：用邻苯二酚处理后,表面光滑、饱满的酵母细胞的细胞壁和细胞膜被破坏,出现空洞、大量撕裂碎片和彼此之间粘黏等现象,细胞失去保护作用而死亡。本研究初步明确了酚类物质对酿酒酵母的损伤和毒性机制,为进一步揭示木质纤维素水解液对酿酒酵母的抑制作用提供参考。     

酵母破壁酶和蜗牛酶辅助TRIzol试剂法提取酿酒酵母总RNA

该研究以酵母破壁酶、蜗牛酶破碎酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞壁,再使用总核糖核酸（RNA）提取试剂（TRIzol）法提取酵母总RNA,通过对总RNA进行浓度与纯度的分析,比较酶处理对RNA提取的影响。结果表明,酵母破壁酶的最佳提取条件为加酶量37.5 μL,提取温度27 ℃,提取时间15 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1 079.05 ng/μL,A260 nm/A280 nm为2.10,A260 nm/ A230 nm为2.15;蜗牛酶的最佳提取条件为加酶量30 mg/mL,提取温度37 ℃,提取时间30 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1 673.39 ng/μL,A260 nm/A280 nm为1.99,A260 nm/A230 nm为1.81。结果显示,酵母破壁酶的提取效果优于蜗牛酶。     

甲酸对酿酒酵母的细胞毒性

研究甲酸对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GGSF16的毒害作用,测定不同质量浓度甲酸对酿酒酵母生长代谢的影响,结果表明,甲酸质量浓度为1.8 g/L时能够明显抑制酵母细胞的生长和降低乙醇产量,延长细胞发酵周期;酵母细胞外的核酸、蛋白质和丙二醛含量分别是对照组的1.4、1.67倍和5.3倍,...     

不同方法提取酿酒酵母总RNA的比较

选择试剂盒法、总核糖核酸（RNA）提取试剂（Trizol）法、热酚法3种方法提取酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母总RNA提取的影响。结果表明,试剂盒法和Trizol法不适合提取酿酒酵母总RNA,但通过添加酵母破壁酶,可以提高提取效果。热酚法适合提取酿酒酵母总RNA,但添加酵母破壁酶反而会导致RNA降解。因此,使用热酚法提取酿酒酵母总RNA是较为有效且简便的方法。