荧光法快速检测蔬菜中大肠菌群

荧光法是利用大肠菌群能分解4-甲基伞型酮-β-D半乳糖苷,使4-甲基伞形酮游离,在波长366nm的紫外灯照射下可呈现蓝色荧光。本实验将大肠菌群所需的营养成分经过浓缩、真空干燥制成一次性检测试管,并针对制备的检测试管进行了特异性、灵敏度、稳定性实验和蔬菜中大肠菌群的检测方法比较研究。结果表明该方法快速、简便、准确、稳定,可应用于蔬菜中大肠菌群的快速检测。     

副溶血弧菌的多重PCR检测

副溶血弧菌是一种致病性弧菌,毒力因子主要有不耐热溶血毒素、耐热直接溶血毒素和相对耐热直接溶血毒素三种。本实验根据FDA标准推荐的引物对其进行了检验,发现副溶血弧菌环境分离株中没有耐热直接溶血毒素和相对耐热直接溶血毒素基因,仅有不耐热溶血毒素基因。     

环介导等温扩增技术快速检测食品中的单增李斯特氏菌

采用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测食品中的单增李斯特氏菌,并做特异性、敏感性和适用性试验。试验结果显示以单增李斯特氏菌hly基因保守区设计特异性引物,进行DNA等温扩增是可行的。3株单增李斯特氏菌均扩增出特异性目的片段,而10株非单增李斯特氏菌均未产生目的片段。用环介导等温扩增法在65℃条件下,1h内可检出单增李斯特氏菌,其灵敏度达100cfu/mL,特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。用该方法与国标方法分别检测50种样品中的单增李斯特氏菌,结果数据显示两种方法的符合率达100%,表明环介导等温扩增法具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足大批量样品快速筛选的要求。     

乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的研制

建立乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的制备方法.对阪崎肠杆菌真空冷冻干燥过程中使用的三种保护剂进行比较,筛选出效果最好的奶液(即脱脂奶粉与无菌水的比例为1∶4)作为保护剂,用于冷冻干燥时提高阪崎肠杆菌活菌存活率.在奶液中添加一定浓度的阪崎肠杆菌,使用真空冷冻干燥技术制备成冻干奶粉样品,测其含菌量,根据测得的菌落数量,按比例加入脱脂奶粉混匀稀释成平板菌落计数为10～15 g-1的标准样品,经真空包装获得2批共300个独立包装的冻干阪崎肠杆菌标准样品(10g/包).经过均匀性与稳定性检验,样品的定值及不确定度评估.结果表明:该标准物质均匀性、稳定性良好,该方法对进一步完善微生物尤其是致病菌标准物质的制备具有参考价值.     

免疫捕捉通用引物PCR检测食品中沙门氏菌

利用免疫吸附富集结合经典PCR 技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IC-UPPCR)检测食品中沙门氏菌。采用细菌16S rRNA 基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR 技术是可行的,该IC-UPPCR 检测沙门氏菌的灵敏度最低,能检测到2 × 102CFU/ml,检测沙门氏菌属和非沙门氏菌属标准株的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。结果表明该方法具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,并可满足大批样品沙门氏菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。     

含食品基质的志贺氏菌标准物质特性值检测及能力验证

对含鸡肉基质的志贺标物按照《CNAS-GL03能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》要求进行均匀性和稳定性的检测,并确定标物的最小取样量。按规定的运输条件送至参加能力验证的实验室,在有效时间内按要求检测完毕,并及时汇报检测结果。本结果根据《CNAS-GL02-2006能力验证结果的统计处理和能力评价指南》进行评价。结果:志贺标物的最小取样量为2 m L(即瓶内全部复水原液),均匀性试验F统计量=1.4082.424,均匀性良好,可满足能力验证均匀性要求。标物在-20℃和4℃保存10 d的稳定性良好,两组数值的标准偏差分别为0.00741和0.0105,说明-20℃下存放的标物较4℃更稳定,运输时应尽量保持环境温度4℃,在检测时可将其暂时存放于-20℃冰箱。定性能力验证结果满意度为86.7%,参与的30间实验室仅有4间结果不满意。定量能力验证结果满意度为80%。参加的实验室共20间,其中一间检测结果可疑,3间实验室结果不满意。     

奶制品中分离的阪崎肠杆菌温度耐受性的研究

对从奶制品中分离的65株阪崎肠杆菌的培养特征、生化鉴定、温度耐受性等进行分析研究,比较来源不同的菌株在生物学特性方面是否存在差异,了解从奶制品中分离的阪崎肠杆菌的热耐受情况、60℃存活时间以及4℃低温的耐受情况。结果表明,阪崎肠杆菌热耐受性与菌落形态特征、表型存在一定的相关性,65株菌都表现较为耐热和能够耐受4℃低温3个月以上。     

免疫磁珠捕获-通用引物PCR快速检测食品中致病菌的研究

为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌.结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病菌的最低检测限可达10 cfu,检测致病菌的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现.采用本方法与国标方法分别对50种不同样品进行3种致病菌检测,结果显示两种方法的符合率达100%,特异性相当.与国标方法相比,本方法灵敏度更高,并具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,可以满足大批样品致病菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫等领域.     

食品中绿脓杆菌检测方法的研究

目的:研究和建立食品中绿脓杆菌的检测方法。方法:通过比较不同增菌液增殖效果,分离培养基的分离效果和确定生化项目建立检验方法,并通过制备人工污染样品验证方法的可行性。结果:确定了SCDLP为增菌液,C-F-C和C-N为分离培养基,以O/F葡萄糖、氧化酶为主的生化鉴定项目,以及MPN法作为定量方法。结论:本方法适用于食品中绿脓杆菌定性和定量检测。     

单核细胞增生李斯特氏菌LAMP试剂盒的研制及在食品检测中的应用

利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立食品中单增李斯特氏菌的检测方法。通过对反应条件的优化,组装单增李斯特氏菌LAMP检测试剂盒,并对其特异性、敏感性和适用性进行验证。试验结果显示:该试剂盒适用于食品中单增李斯特氏菌的快速检测,用环介导等温扩增法在65℃条件下,1h内可检出单增李斯特氏菌,其灵敏度达17CFU/mL,特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。用该方法与国标方法分别检测120种样品中的单增李斯特氏菌,两种方法的符合率达100%。该试剂盒具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足大批量样品快速筛选的要求。