甲型肝炎病毒衣壳蛋白VP1、VP3的原核表达及其免疫原性

目的 原核表达甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）衣壳蛋白VP1和VP3，并评价其免疫原性。方法 PCR法扩增VP1和VP3基因片段，克隆至载体pET-G28a中，构建重组表达质粒pET-G28a-VP1和pET-G28a-VP3，转化至感受态E. coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达，12%SDS-PAGE分析表达产物。目的蛋白经离子交换层析纯化，复性后与多种佐剂配伍，免疫雄性BALB/c小鼠，随机分为VP1-MF59、VP1-AH、VP1-AP、VP1-AP-10CpG、VP1-AP-50CpG、VP3-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组，每组5只。ELISA法检测各组小鼠血清中IgG抗体效价，快速荧光灶免疫抑制试验测定VP1-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组小鼠血清中和抗体效价。结果 菌落PCR及测序结果证明，重组表达质粒pETG28a-VP1及pET-G28a-VP3构建正确。重组蛋白VP1和VP3相对分子质量分别约为37 000和26 000，主要以包涵体形式存在，表达量分别为18.6%和32.4%，纯度分别为86.3%和84....