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目的建立一种简便、高效的人可溶性CD105(soluble CD105,sCD105)蛋白的真核表达及纯化方法。方法人工合成胞外区和信号肽区域的DNA片段,在其信号肽前端加入Kozak sequence(GCACCATGG)序列,促进蛋白表达,同时在其C-末端6×His前加入K(AAG)氨基酸,促进6×His的暴露有助于后期纯化,构建真核表达质粒pcDNA3. 4-sCD105。通过瞬时转染的方法将重组质粒转染293F悬浮细胞,收集细胞上清液,利用His-trap EXCEL柱通过两步纯化法进行纯化。将纯化获得的sCD105蛋白超滤浓缩后,进行10%SDS-PAGE、Western blot及ELISA检测。结果在20 mL(1×10~6个/mL)293F悬浮细胞中表达及纯化后,获得纯度 95%的sCD105蛋白3 mL,浓度为27. 83 mg/L,获得率高达4. 17 mg/L。结论成功建立了一种简便高效的sCD105蛋白表达及纯化的方法,为后期蛋白功能的研究及相应治疗或诊断性抗体的开发奠定了基础。 相似文献
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目的探讨富含Trp/Arg六肽对糖尿病小鼠皮肤创伤愈合的影响。方法经小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型,在糖尿病小鼠背部切取直径8 mm的圆形全层皮肤,形成皮肤损伤模型。将皮肤损伤模型小鼠随机分为富含Trp/Arg六肽RRWWCR、RRWWFR、RRWWTR组和生理盐水组,分别在创伤形成同时,在伤口处擦拭0.1 mg/ml相应药物,每只0.2 ml,开放式治疗10 d,每天1次。每天观察创面形态变化,并测量创面直径;每5 d取附带周围正常组织的创面全层皮肤,进行组织病理学观察。结果 RRWWCR和RRWWTR可促进创面组织的修复,表现为加强早期炎症反应、促进新生血管、肉芽组织和再上皮化形成以及缩短创面愈合时间。结论富含Trp/Arg六肽对糖尿病小鼠皮肤创伤愈合具有促进作用,其第5位氨基酸残基极性可极大地影响其促修复能力。 相似文献
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