核酸适配体—靶标复合物解离常数测定方法 研究进展

核酸适配体是通过体外指数富集配基系统进化技术筛选到的一小段单链DNA或RNA寡核苷酸片段,能够与靶标高亲和力、高选择性地结合。为了在实际检测中应用核酸适配体,必须深入了解核酸适配体—靶标的结合过程,如测定复合物的解离常数。本文综述了近年来有关核酸适配体—靶标复合物解离常数测定的方法。这些方法大致上分为两大类:一类是基于分离策略的测定方法,如透析法、超滤法、凝胶电泳法、毛细管电泳法和高效液相色谱法;另一类是基于均相策略的测定方法,如荧光强度法、荧光各向异性法、紫外可见分光光度法、圆二色谱法以及表面等离子体共振法等。本文对每种方法的原理、应用范围和特性进行了概括和比较,并对未来的发展趋势进行了展望。     

水酶法从红花籽中提取油脂与水解蛋白的工艺优化

以水酶法从红花籽中提取油脂和水解蛋白为目的,采用单因素和正交实验的方法,确定最佳的工艺条件:碱提温度为60 ℃,碱提时间为60 min,在水解蛋白酶Alcalase 2.4L、果胶酶和纤维素酶(1:1:1)共同作用下,酶解温度为55 ℃,酶解时间为3 h,料液比为1:5 (w/w),酶总添加量为4.5%,此时,红花籽游离油得率为58.21%,水解蛋白得率为41.32%。对于酶解后得到的乳状液选取最佳破乳方法为冷冻破乳,离心转速为8000 r/min,此时的破乳率为35.28%,总油得率为63.94%。     

赭曲霉毒素A的适配体筛选

目 的 筛选小麦和其他相关食品中常见的赭曲霉毒素A真菌毒素核酸适配体。方 法 采用固态靶标筛选策略和磁分离的筛选方法筛选赭曲霉毒素A的核酸适配体。结 果 获得的赭曲霉毒素A核酸适配体亲和力较高,解离常数为纳摩尔级;特异性好,与赭曲霉毒素A结构相似性化合物如赭曲霉毒素B、N-乙酰苯丙氨酸或华法令不结合或结合力非常弱。结 论 本文采用固态靶标筛选策略和磁分离的SELEX筛选方法获得了赭曲霉毒素A的高特异性,高亲和力核酸适配体,有望在农产品质量安全领域替代传统抗体开发真菌毒素快速检测传感器或制备固相亲和柱。