基于Cycling探针的实时荧光聚合酶链式反应检测河鲀鱼中掺杂的横纹东方鲀成分

摘 要：目的 开发基于Cycling探针实时荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction，RT-PCR)用于检测河鲀鱼中横纹东方鲀成分。方法 基于细胞色素C氧化酶亚型I (cytochrome C oxidase subunit I, COI)基因为靶标设计RT-PCR引物及Cycling探针，开发横纹东方鲀成分检测方法，评价方法的特异性、扩增效率、灵敏度和稳定性。结果 横纹东方鲀成分与密切相关的其他8种河鲀鱼、4种其他鱼类物种DNA无交叉反应，具有很好的特异性；方法扩增效率为93.47%；方法重复18次均给出阳性报告的最小稀释点(limit of detection 6，LOD6)为14.64 pg/μL(相对应的质量含量为0.1%)，95%置信水平条件下检出限为34.41 pg/μL (11.59~119.05 pg/μL，LOD95%)，稳定性分析(P=0.152)表明该方法可转移到其他实验室以及在常规分析中使用。结论 本研究开发的Cycling探针RT-PCR方法可对河鲀鱼食品中掺杂0.1%的横纹东方鲀成分进行可靠追溯。 关键词：河鲀鱼; 食品真实性；横纹东方鲀；Cycling探针；实时荧光聚合酶链式反应