广东省水生动物中的维氏气单胞菌和无乳链球菌的耐药性评估

为研究广东省水生动物中的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)对不同种类抗生素的药物敏感性,从广东省9个地区人工养殖的水生动物体内分离维氏气单胞菌及无乳链球菌。其中分离出32株维氏气单胞菌和16株无乳链球菌。利用药敏纸片法检测分离菌株对14种抗生素的药物感受性,发现两种病菌对其中的7种抗菌药物有明显的敏感性。利用最小抑菌浓度法检测分离菌株对7种敏感抗生素的耐药性,发现32株维氏气单胞菌对甲砜霉素(29%)部分耐药,盐酸土霉素(41%)和交沙霉素(38%)部分敏感,对盐酸环丙沙星(82%)、强力霉素(82%)、氟苯尼考(75%)和磺胺二甲嘧啶(100%)都敏感。16株链球菌对甲砜霉素(100%)全部耐药,对交沙霉素(25%)部分敏感,对盐酸环丙沙星(100%)、强力霉素(100%)、盐酸土霉素(100%)、氟苯尼考(100%)和磺胺二甲嘧啶(88%)都敏感。本论文的研究可以对今后抗生素在维氏气单胞菌与无乳链球菌的使用中提供一定的参考,促进抗生素的合理使用。     

甲型流感H1N1病毒遗传进化关系分析

探讨研究当前流行性甲型流感H1N1病毒与已知人流感H1N1病毒、禽流感H1N1病毒,猪流感H1N1病毒之间的遗传进化关系,对7株甲型H1N1、32株已知人流感H1N1、18株禽流感H1N1、33株猪流感H1N1病毒的基因组各基因片段分别进行基因序列遗传进化分析,选取同源性高的毒株构建进化树.结果显示,新型人流感病毒A型H1N1中HA,MP、NA,NP、NS、PB1基因片段与猪流感病毒分离株有很高的同源性,而PA、PB2基因与禽流感病毒分离株同源性较高.     

猪胸膜肺炎放线杆菌微滴数字PCR定量检测方法的建立

为实现对猪胸膜肺炎的致病菌猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的量化研究,本实验根据猪胸膜肺炎放线杆菌特异性基因ApxⅣ的保守序列,设计引物探针,通过优化反应条件,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性以及适用性进行验证,与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析。结果表明:ddPCR最佳退火温度为52℃;线性相关系数(R~2)为0.9957,线性关系良好;灵敏度达153.8copies/μL,是qPCR的两倍;特异性良好,与其它常见猪病原无交叉反应。在实际样品检测中,110份样品的ddPCR与qPCR检测结果的Kappa系数为0.9529,说明两种检测方法结果高度一致,并且ddPCR可对qPCR无法判断阴阳性的可疑样本进行定量分析。本实验建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、可用于猪胸膜肺炎放线杆菌的定量检测。     

猪链球菌微滴数字PCR定量检测方法的建立

根据猪链球菌(Streptococcus suis,SS)gdh基因的保守序列设计特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析。结果表明,该方法特异性良好,与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒无交叉反应;灵敏度优于qPCR,线性相关系数(R2)为0.991,呈良好线性关系,最低可检测到2.692 copies/μL的阳性质粒;稳定性好,变异系数为1.66%。临床样品定量检测结果表明,dd PCR具有敏感性高、特异性好等优点,能对qPCR检测的可疑样品进行精确定量。本研究建立的dd PCR能够准确定量检测SS,将为SS相关研究提供有益参考。     

免疫磁珠-环介导等温扩增快速检测牛肉中的鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌

建立免疫磁珠分离（immunomagnetic separation,IMS）联合环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术检测牛肉中鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌的方法。用生物素标记的鼠伤寒沙门氏菌抗体和生物素标记的金黄色葡萄球菌菌体蛋白抗体对链霉亲和素磁珠进行功能化,从牛肉中捕获和分离目标致病菌。结果表明：经优化后,每毫克磁珠与10 μL鼠伤寒沙门氏菌抗体偶联,400 μL鼠伤寒沙门氏菌免疫磁珠在45 min内对104 CFU/mL鼠伤寒沙门氏菌的捕获率为52.16%;每毫克磁珠与6 μL金黄色葡萄球菌抗体偶联,300 μL金黄色葡萄球菌免疫磁珠在30 min内对104 CFU/mL金黄色葡萄球菌的捕获率为56.80%;建立的IMS-LAMP方法特异性高,对牛肉中鼠伤寒沙门氏菌的检测灵敏度为1.2×103 CFU/mL,对金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为4.4×104 CFU/mL;富集5 h后,鼠伤寒沙门氏菌的检测限可至1.2 CFU/mL,富集7 h后,金黄色葡萄球菌的检测限可降至4.4 CFU/mL。建立的IMS-LAMP方法用时短,灵敏度高,操作简单,可以有效检测牛肉中的鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。     

沙门氏菌一类基因岛研究进展

当前,鼠伤寒沙门茵噬菌体型104(DT104).多重耐药菌株已在全球范围内扩散,该菌株对氨苄青霉素、氯霉素/氟苯尼考、链霉素、磺胺类与四环素均具有耐药性.其抗性基因位于大小为43-kb具有转移能力的沙门氏菌一类基因岛(SGI1)上,SGI1的耐药性分子突变体已在多种血清型中被鉴定.SGI1携带菌株可能具有更强的毒力,并且呈现出迅速扩散之势.