产胞外多糖乳杆菌的筛选及多糖功能的研究

本论文从大连地区海产品消化腺中筛选产胞外多糖(EPS)的乳杆菌属菌株,并研究其所产EPS的功能特性,选出一株目标菌,对其EPS分离纯化,测定纯化后各多糖组分的相对分子量。获得EPS产量相对较高的菌株经16S r RNA序列测定鉴定为Lactobacillus plantarum subsp.plantarum-4,Lactobacillus plantarum-12,Lactobacillus plantarumsubsp.plantarum-49;对3株植物乳杆菌及其EPS进行清除DPPH自由基的测定,Lactobacillus plantarum-12的EPS浓度为0.5 mg/mL时,清除率为48.82±3.88%,显著高于另外2株菌(p0.05);测定植物乳杆菌的EPS抑制E.coli ATCC25922在HT-29细胞上的粘附效果,Lactobacillus plantarum-12的EPS浓度为0.2mg/mL时,抑制率为78.23%±2.46%,显著高于另外两株菌(p0.05);Lactobacillus plantarum-12的EPS可显著抑制E·coli ATCC25922刺激HT-29细胞产生IL-8(p0.05)。Lactobacillus plantarum-12的EPS经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱、Sepharose CL-6B凝胶柱和Sephacryl HR S200凝胶柱层析分离得到两组分,测定两组分的相对分子质量分别为8.5×10~4 u和7.4×10~4 u。     

Lactobacillus plantarum-12胞外多糖抑制志贺氏菌生物膜形成的研究

研究菌株Lactobacillus plantarum-12胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS)对6种致病菌(Escherichia coli,Staphyloccocus aureus,Salmonella,Listeria monocytogenes,Vibrio Parahaemolyticus,Shigella flexneri)生物膜形成的抑制作用,结果显示L.plantarum-12 EPS对于6种致病菌生物膜形成均有不同程度的抑制效果,对S.flexneri生物膜形成的抑制效果最佳,在2 mg/mL多糖的影响下抑制率达到53.77%,且EPS对S.flexneri已形成的生物膜也具有清除作用,清除率最高可达61.2%:在多糖的影响下S.flexneri在玻片上的黏附及聚集受到了明显抑制。6种致病菌菌体疏水性在L.plantarum-12 EPS作用下都有不同程度的降低,其中S.flexneri菌体疏水性下降了90%,S.flexneri的疏水性随着EPS浓度升高而逐渐降低;在4 mg/mL EPS的作用下,S.flexneri菌体的自聚性降低了30%。L.plantarum-12 EPS处理S.flexneri生物膜,可使环丙沙星及左氧氟沙星S.flexneri的最小生物膜清除浓度从256μg/mL降至64μg/mL,显著提高了环丙沙星及左氧氟沙星的药效。而且,L.plantarum-12 EPS能够抑制S.flexneri胞外多聚物基质中多糖的分泌量。试验结果表明,Lactobacillus plantarum-12 EPS通过降低S.flexneri疏水性,自聚性及胞外多聚物中多糖的表达量的方式抑制了S.flexneri生物膜的形成。