利用细胞工程筛选烟草抗赤星病突变体的研究——一种双层培养基筛选系统的建立

为有效筛选烟草抗赤星病细胞突变体,本研究建立了一种双层培养基筛选系统。即在下层培养基中接种烟草赤星病(Alternaria alternata),在上层培养基中接种烤烟品种 NC89和净叶黄的花药(NC89高感赤星病,净叶黄高抗赤星病)。在26±1℃培养40天后发现,NC89的花药出苗率和花药平均出苗数与对照(不接种赤星病的培养基)相比,分别由30%和53颗降到2%和12颗,而净叶黄的花药出苗率和平均出苗数基本没有变化。对筛选出来的 NC89花培突变体进行了田间赤星病抗性鉴定,其中80%对赤星病抗性较 NC89有所提高,甚至部分接近高抗。这说明该双层培养基系统可以有效地对抗烟草赤星病的细胞突变体进行筛选。本系统尤其适应于(1)需长期培养;(2)毒素不易制备或易失活的病原菌的抗性筛选。     

激素对烟草愈伤组织分化影响的研究

以烟草(Nicotiana tabacum)愈伤组织为材料,研究了不同激素配比及浓度对愈伤组织绿苗分化率、绿苗产量/玻璃苗产量(G/V)等分化指标的影响。试验结果表明:在 MS+IAA0.2mg/L+KT1mg/L 培养基上,可获得较高的绿苗分化率;在含IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L 的 MS 培养基上,可获得较高的 G/V 值;当愈伤组织先在附加 IAA 和 KT 的培养基上培养20天,再转至附加 IAA+6-BA 的培养基上培养时,则既可得到较高的绿苗分化率,又可提高 G/V 值。     

烟草赤星病抗性鉴定方法的研究

建立了一种在温室内通过人工接种离体叶片快速鉴定烟草赤星病抗性的技术。在２５℃～２８℃，湿度８０％～９０％条件下，将烟草赤星病菌直接接种于离体叶片上，培养６～９天后，离体叶片的发病率及病级与其植株水平上对赤星病菌的抗性表现极显著相关。该技术能反应烟草在田间病圃内的抗病或感病程度，从而可以做为鉴定指标。     

利用花药培养系统选育烟草抗赤星病品系

在接种有烟草赤星病菌的双层培养基上及含赤星病菌毒素的选择培养基上，获得了烟草推广品种ＮＣ８９的花药培养苗。温室内采用离体叶片法对这些花培苗进行了赤星病抗性鉴定，结果约１８％－４２．９％的植株抗性较对照ＮＣ８９有所提高。选其中４株抗性较高且农艺性状与对照ＮＣ８９相近的单株经秋水仙素加倍后收获了种子，然后于１９９２、１９９３年分别在赤星病病圃及大田条件下对其Ｒ—１代、Ｒ—２代植株进行了赤星病抗性及农艺性状测试。两年试验结果一致表明：在染色体加倍以后，所选植株的后代在基因型上已完全纯合，赤星病抗性较对照ＮＣ８９有较大提高，农艺性状也有所改善，而且均稳定遗传，是不同于原ＮＣ８９的烟草新品系。其中两个品系对赤星病的田间相对防效分别达５７．８％和５３．４％，且农艺性状优异，在生产上具有广泛应用前景。     

抗虫转基因烟草8611纯合系的选育

对获得的表达江豆胰蛋白酶抑制剂的转基因８６１１进行了抗虫性研究，从转基因当代植株中筛选出两株高抗单株８６１１－６、８６１１－１１，在用其离体叶片饲养烟方虫８天后，对烟青虫的杀死率分别达到５０％和４０％。在田间接种及自然（不施药）条件下，８６１１－６、８６１１－１１子代植株的虫害指数分别为６３．５％、６９．３％（接种后１５天）和３７．７％、３９．８％（移栽后２５天），而未转基因对照植株的虫害指数分别为９３．５％和５７％。     

“烟虫净”防治烟草害虫药效试验

“烟虫净”防治烟草害虫药效试验张同庆，姚根怀，吴中心（河南省农科院烟草所）闫新甫（河南禹州市烟草分公司）王延晓（河南襄城县烟草公司）近几年来，烟草虫害有逐年加重的趋势。为科学防治烟草害虫，方便烟农合理用药，河南省农科院烟草所在多年多点室内测定及田间试...     

表达豇豆胰蛋白酶抑制剂(CPTI)的转基因NC89的抗虫性研究

利用 Ti 质粒介导的叶圆盘转化法,将豇豆腋蛋白酶抑制剂基因导入 NC89,并获得再生植株,对转基因植株进行了室内和田间抗虫性鉴定,结果表明,21%的植株对烟青虫危害具有高度抗性;另45%的植株对烟青虫危害具有明显抗性。转基因烟草的叶面平均虫害面积只有对照 NC89的25%。     

通过基因工程获得高抗黄瓜花叶病毒的NC89植株

将黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA 基因和外壳蛋白(CP)基因同时插入植物表达载体 ROKII 质粒,构成嵌合基因表达盒,通过叶盘转化法导入 NC89单倍体植株,对转化植株进行了 CMV 人工攻毒试验,结果表明,其 CMV 抗性较对照 NC89有明显提高,其中约10%在攻毒90天后病级仍低于2级,个别株完全不发病。     

利用双层培养基筛选烟草抗赤星病突变体

在接种有赤星病菌(Alternaria alternata)的双层培养基上,成功地从高感赤星病烟草品种 NC89的花药中诱导出突变体苗,对这些突变体苗进行了离体抗病性鉴定,结果表明:其中70％的植株不同程度地表现赤星病抗性,部分表现高度抗性。     

快速选育抗黄瓜花叶病毒的转基因烟草纯合品系

以来源于烟草推广品种ＮＣ８９花药的单倍体苗为转化受体，同时导入了黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和卫星ＲＮＡ（Ｓａｔ—ＲＮＡ）基因，在获得的共１１２株转化植株中，有３株在人工接种浓度高达２００μｇ／ｍｌ的ＣＭＶ时仍不发病。通过０．４％秋水仙素处理使之加倍并收获种子，而后连续两代在大田条件下鉴定其ＣＭＶ抗性及综合农艺性状，并与单独导入了ＣＭＶＣＰ基因或ＣＭＶＳａｔ—ＲＮＡ基因的转基因ＮＣ８９品系及未转化的对照ＮＣ８９进行了比较。结果表明，同时表达ＣＭＶ外壳蛋白和卫星ＲＮＡ的双单倍体转基因植株，在Ｒ—１代即表现出一致的可稳定遗传的ＣＭＶ抗性，抗性水平较单独表达ＣＰ或Ｓａｔ—ＲＮＡ的转基因ＮＣ８９提高１倍左右。