酵母菌耐高渗机理研究

综述了参与酵母茵耐高渗调控的一些基本物质,如基因、酶、功能蛋白质和一些小分子物质等.综合分析了酵母茵耐高渗的调控机理,为研究者利用分子生物学的方法筛选耐高渗的酵母茵奠定良好的理论基础.     

重组大肠杆菌P84A/MC1061诱导和表达卤醇脱卤酶的条件优化

考察重组工程菌E.coli P84A/MC1061的生长特性,并优化其在卤醇脱卤酶表达过程中的诱导条件和培养条件。在摇瓶发酵中,以阿拉伯糖诱导重组大肠杆菌P84A/MC1061表达卤醇脱卤酶。重点研究培养温度、装液量、摇床转速、培养基初始pH值、诱导时机、诱导剂添加量、诱导剂作用时间对卤醇脱卤酶的表达影响。在培养温度为30℃,装液量为25mL/250mL,摇床转速为200r/min,初始pH值为7.1时,当菌体量OD600值达到2时,按照1‰体积比添加L-阿拉伯糖,诱导培养22h后,发酵液OD值达到21.3,酶活力达到138555.3U/mL。研究发现,培养温度和初始pH值是基因工程菌E.coli P84A/MC1061诱导表达卤醇脱卤酶的显著影响因子,可为卤醇脱卤酶发酵生产的深入研究提供依据。     

啤酒酵母中海藻糖合成酶和海藻糖-6-磷酸合成酶的功能及结构分析

啤酒酵母的海藻糖合成酶复合物由4个亚基(TPS1，TPS2，TPS3和TSL1)组成，这4个亚基具有协同作用。其中海藻糖-6-磷酸合成酶是海藻糖合成酶的功能中心；TPS1除了具有合成海藻糖的功能之外，还具有调节糖代谢和促进酵母孢子形成的功能；tps1大量表达时，有助于细胞增加对高温、高渗和酒精等的耐受性。     

几种耐高温淀粉酶的酶活影响因素研究

淀粉酶是食品、发酵行业应用最广泛的酶种之一。从最适温度、最适p H值、保存温度、缓冲溶液p H值等方面对5种不同的耐高温α-淀粉酶酶活的影响进行了研究。结果表明:耐高温α-淀粉酶B的耐酸性最好,在p H4.00~7.50之间,相对酶活为98%~100%;耐高温淀粉酶A的耐高温性最好,在反应温度70℃~100℃之间,相对酶活为100%~121%;耐高温α-淀粉酶A的缓冲溶液稳定性最好,在缓冲溶液p H4.50~7.00之间,酶活维持在91%~100%;耐高温α-淀粉酶E温度稳定性质最好,在储存温度30℃~60℃之间,相对酶活为98%~100%。为淀粉酶的选择奠定基础。     

现代生物技术在酵母菌种特性研究中的应用

采用现代生物技术中的酶活测定、特异PCR、克隆测序和生物信息分析等对比研究3株高糖酵母蔗糖转换酶活性及其氨基酸序列。得出3株高糖酵母在不同生长阶段的蔗糖转换酶酶活由高到低依次为YH、YN、YF,而其蔗糖转换酶的氨基酸序列却完全相同。     

近平滑假丝酵母ATCC 7330对不同取代基乙酮类底物的催化效果

通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最高,与模拟对接预测的结合能大小一致;从催化剂周转数来看,近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞对10种不同取代基乙酮类底物的催化能力大小依次为对氯苯乙酮=邻氯苯乙酮1-萘乙酮对氨基苯乙酮环戊基乙酮环己基乙酮邻氨基苯乙酮1-(1H-茚-4-基)乙酮苯乙酮环丙基乙酮,与对接模拟预测有一定差距。说明近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞的催化能力除了与结合能有关外,还与细胞的渗透性、反应溶剂等因素有关。     

酿酒酵母中的蔗糖转换酶基因(SUC2)研究进展

蔗糖转换酶基因(SUC2)编码蔗糖转换酶(Invertase),通过降解酵母细胞外的蔗糖成果糖和葡萄糖来提供酵母生长所需的碳源,在以蔗糖为主要碳源的培养条件下,蔗糖转换酶对于酵母生长必不可少.因此研究蔗糖转换酶基因序列、转录、调控等对酵母蔗糖代谢具有重要意义.蔗糖转换酶基因的表达受葡萄糖浓度、氧气和其在染色体上的位置等因素的影响.本文就葡萄糖浓度对SUC2表达的影响以及葡萄糖浓度对其表达调控的机制进行了综述,并展望了该基因及蔗糖转换酶在今后的应用和研究趋势.     

酵母菌3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)的克隆及其在高渗胁迫下mRNA转录水平的差异

YY、FHS和WFB是生产中常用的酵母菌株。在高渗胁迫下的生长速度依次为FHS、YY、WFB。克隆gpd1基因片段并测序,再与NCBI公布的gpd1序列(X76859)比较,WFB、YY、FHS的同源性分别为99·32%、99·83%、99·83%,YY、FHS菌株的gpd1序列与NCBI上的gpd1序列(X76859)对应的氨基酸序列完全一致,WFB与它们的同源性只有98·5%。用不同浓度的NaCl培养酵母细胞进行渗透胁迫处理,RNA点杂交显示YY、FHS菌株gpd1基因的mRNA表达量在NaCl浓度上升时候有上升的趋势;WFB菌株gpd1基因的mRNA表达量随NaCl浓度的上升逐渐降低。实验结果显示,gpd1基因mRNA转录水平与抗高渗能力相关。     

桔青霉产核酸酶P1酶分离纯化及其酶学性质

桔青霉（Penicillium citrinum）产核酸酶P1浓缩液采用活性炭脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等分离技术,得到核酸酶P1纯组分,并研究了该酶的酶学性质。该酶纯化后比酶活达到33967 U/mg,纯化倍数为8.48倍;该酶的米氏常数K_m、最大反应速度V_m和催化常数K_cat分别为2.50 mmol/L、0.0864 mmol/（mL·min）和252.43 s?1。该酶最适温度为75 ℃,热稳定范围60～75 ℃;最适pH为5.5,pH稳定范围为4.0～6.0;Zn2+在1 mmol/L条件下对核酸酶P1有很好的激活作用,Cu2+和Co2+对该酶的抑制作用明显,而Ni2+、Fe2+、Mn2+等离子具有不同程度的抑制作用。本研究对于该酶的广泛应用奠定了科学基础。     

LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化

以地衣芽孢杆菌（Baclicus lincheniformis）E-417为出发菌株,采用氯化锂（LiCl）-常压室温等离子体（ARTP）复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,在氯化锂添加量为1.5%、ARTP照射时间为45 s的最适复合诱变条件下筛选得到1株高产碱性蛋白酶的优良菌株F-3,酶活达到12 147 U/mL,且该菌株传代8次后仍具有良好的遗传稳定性,其最适发酵培养基成分为玉米粉41 g/L、豆饼粉40 g/L、碳酸钠2.1 g/L、磷酸氢二钠2.0 g/L;最适发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH值7.0、接种量8%。在此优化条件下,碱性蛋白酶酶活达到16 156 U/mL,较原始菌株提高75%。