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目的 构建Nicastrin(NCT)基因的RNA干扰慢病毒表达载体,并在人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)上鉴定其沉默效率,构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型,为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验基础.方法 设计3个靶向NCT基因特异性短发卡RNA(shRNA)表达序列并连接到慢病毒表达质粒pGLV3/H 1/GFP+ Puro中,成功构建慢病毒重组表达质粒,并通过测序鉴定.将构建的重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒,并测其滴度.将HaCaT细胞分为空白组(未感染病毒)、阴性对照组(NC组,感染空载病毒LV3-shNC)和干扰组(感染NCT-shRNA1、2、3慢病毒).流式细胞仪检测慢病毒转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western印迹检测靶基因的沉默效率,筛选出沉默效果最佳的干扰序列.结果 测序表明,NCT-shRNA慢病毒重组表达质粒构建成功.重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生的慢病毒颗粒滴度为109 TU/ml.慢病毒感染HaCaT细胞后,流式细胞仪检测,慢病毒转染效率大于95%.qRT-PCR结果,与NC组相比,干扰组NCT mRNA表达量明显下降,其中NCT-shRNA1组NCT基因沉默效果最佳,干扰效率达到75%.Western印迹结果,与NC组相比,shRNA1组NCT蛋白表达抑制率为71.7%.结论 成功筛选出高效NCT-shRNA干扰序列,构建NCT-shRNA慢病毒重组表达载体,并构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型. 相似文献
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维德思治疗带状疱疹疗效观察 总被引:1,自引:1,他引:0
带状疱疹是一种常见病,由水痘一带状疱疹病毒引起。本研究的目的在于观察维德思治疗带状疱疹的效果。维德思(Vahrex)是万乃洛韦(Valaciclovir)的商品名,是一种新的口服核苷类抗病毒药,由葛兰素威康开发研制。本研究于1997年12月至1998年6月在北京三家医院进行,其中北京协和医院共入选23例,完成20例,取得较好结果,现报告如下: 相似文献
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大疱性类天疱疮(BP)是一种自身免疫性皮肤病,其特征为表皮下形成大疱和基底膜带免疫球蛋白和补体沉积。本病可以合并多种恶性肿瘤。我们报道近年来我科所见6例类天疱疮合并不同恶性肿瘤患者。一、临床资料1.一般资料:男4例,女2例,发病年龄28~82岁;类天疱疮病程2个月至10年,平均6年,就诊前病程2周至2年,平均0.6年。肿瘤病程2周至16年,平均7年。恶性肿瘤均经临床、免疫及组织病理确诊;确诊恶性肿瘤后3个月至6年发现BP,其中绒毛膜上皮细胞癌(绒癌)2例,BP分别于发现肿瘤后4个月和1.5年化疗期间出现;1… 相似文献
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王宝玺 《国际皮肤性病学杂志》1989,(5)
患者51岁,女性,已绝经2年。主诉为外阴瘙痒及尿病1年,并曾在妇科外用抗真菌药物治疗6月无效。检查发现,外阴及会阴肿胀,伴白色角化。右侧大阴唇糜烂。妇科检查示阴道及阴道分泌物正常。外周血细胞计数及自动化学分析在正常范围内。抗甲状腺微粒体抗体、抗甲状腺球蛋白抗体、抗胃壁细胞抗体及抗内因子抗体均阴性。小阴唇上白色角化处活检示角化过度,局灶性颗粒层增厚,皮突消失,棘细胞大小及排列不规则,表皮基底细胞液化变性。在真皮上部与中部上层可见胶原纤维肿胀并有透明变性,真皮上部淋巴管显著扩张,真皮中部有致密的淋巴样细胞浸润。这些均为硬化性萎缩性苔藓的典型病变。给予患者口服依曲 相似文献
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残毁性掌跖角皮症(Vohwinkel syndrome,vs)是一种罕见的以残毁性掌跖角化为特征的疾病,女性发病高于男性,多数有家族史,为常染色体显性遗传,目前国内外没有统一诊断标准.北京协和医院于2006年8月22 日收治1例男性VS患者,现报告如下. 相似文献