Musashi1基因调控结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的机制研究

背景与目的：Musashi1（Msi1）属于RNA结合蛋白家族中的一员,是RNA转录后表达的关键调控者,其是否参与肿瘤的发生、发展,以及具体分子机制仍不十分清楚。探讨沉默Msi1基因对结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的影响及可能的机制。方法：采用慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的细胞株,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤模型观察沉默Msi1对裸鼠成瘤的影响。实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印记法（Western blot）检测沉默Msi1基因后p27基因的mRNA表达和蛋白水平,双荧光素酶实验验证Msi1基因与目的基因p27 3’-非编码区（3’-untranslated region,3’-UTR）的相互作用。结果：沉默Msi1基因后,HCT116细胞的增殖能力显著下降,克隆集落数明显减少,G ₀ /G ₁ 期细胞增多,S期细胞明显减少,裸鼠移植瘤生长明显受到抑制。沉默Msi1基因后p27 mRNA表达未见明显变化,而p27蛋白水平明显上调,双荧光素酶实验证实Msi1基因能与p27 3’-UTR区域直接结合,抑制其翻译。结论：沉默Msi1基因通过靶向上调p27,导致结肠癌HCT116细胞G ₀ /G ₁ 期阻滞,从而抑制肿瘤细胞体内及体外增殖能力。     

Musashi1基因表达对人结肠癌HCT116细胞的放射增敏作用及其机制

目的 研究沉默Musashi1对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性的影响,为放射治疗提供新的增敏靶点。方法 用慢病毒载体建立Musashil（Msi1）低表达的稳转细胞株及阴性对照细胞株,将细胞分为沉默组、空白对照组和阴性对照组,通过克隆实验、流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,证实其放射敏感性。结果 成功构建了沉默Musashi1的HCT116细胞。沉默组的D₀、D_q、N、SF₂分别为1.55、0.88、1.76 Gy和0.43,空白对照组分别为2.17、1.51、2.01 Gy和0.64,阴性对照组分别为1.99、1.45、2.07 Gy和0.62。沉默组相对于空白对照组的放射增敏比为1.40,相对于阴性对照组的放射增敏比为1.28。8 Gy照射后24、48、72 h,沉默组凋亡比例始终高于阴性对照组和空白对照组（F=65.16,P<0.05）,而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。12 Gy照射后48 h,沉默组细胞周期中G₂/M期比例较空白对照组和阴性对照组显著下降（F=65.398,P<0.05）。结论 降低Musashi1的表达对人结肠癌HCT116细胞有放射增敏作用,可能通过促进其凋亡,解除G₂/M期阻滞而发挥放射增敏作用,有望成为新的增敏靶点。     

磁共振在食管癌原发灶放化疗近期疗效评价中的应用

目的 根据食管癌放化疗前后磁共振扫描结果,结合临床疗效评估,对食管癌原发灶进行疗效判定,并结合原有CT及造影的评价标准,验证磁共振在食管癌放化疗近期疗效评价的可靠性。方法 2010年5月至2014年3月采用三维适形或调强放疗的83例食管癌患者,处方剂量50~64 Gy,中位剂量60 Gy,单次1.8~2.0 Gy,其中34例接受了FP或TP方案的同期化疗,放疗前后均行食管钡餐造影、胸及上腹CT、磁共振弥散加权成像（DWI）检查。依据1989版和2013版食管癌近期疗效评价标准进行疗效评价和比较,同时依据患者疗末病变区域DWI高信号表达情况进行疗效界定和亚组分析。结果 依据1989版及2013版近期疗效评价标准,全组完全缓解和部分缓解分别为：45例（54.2%）和38例（45.8%）;35例（42.2%）和48例（57.8%）。两种评价标准中完全缓解组1~5年的局部控制率和生存率均好于部分缓解组。治疗后病变区域DWI高信号完全消失者48例（将其界定为完全缓解）,呈稍高信号表达者25例、高信号表达者10例（部分缓解）,前者1~5年的局部控制率和生存率均好于后者（χ²=6.125、11.652,P<0.05）。与2013版近期疗效评价标准相比,一致性为中等（Kappa值=0.478）。依据钡餐造影、CT扫描、DWI检查综合评价,3项均达完全缓解标准者25例,部分缓解为58例,前者1~5年的局部控制率和生存率均高于后者（χ²=5.559、10.014,P<0.05）。结论 基于钡餐造影和CT扫描的近期疗效评价标准可较好地提示食管肿瘤局部控制情况;DWI可为食管癌治疗反应评价提供直观、量化的参考信息,疗末食管病变局部仍有高信号表达预示极高的复发风险。用3种影像学技术综合评价疗效更全面、客观、准确。     

RNA结合蛋白Musashi1在结直肠癌中的表达及临床意义

Musashi1(Msi1)是一种进化保守的RNA结合蛋白,同时它是肠道、神经等多种组织中的干细胞标志物,对于维持自我更新与分化之间的平衡具有重要作用.近年来研究发现Msi1在多种肿瘤组织尤其是结直肠癌中高表达,参与调控细胞周期、增殖、凋亡等过程,逐渐成为多种癌变的关键调节剂,有望成为肿瘤治疗的新靶点.     

食管鳞癌三维放疗或同期放化疗优选照射剂量分析

目的 分析不同治疗模式及照射剂量下食管鳞癌患者的OS状况,探讨优选照射剂量及获益亚组人群。方法 选取2003-2014年本院接受3DRT的1387例食管鳞癌患者,分别对单纯放疗(780例)和同期放化疗(302例)不同照射剂量患者进行分析,采用Logrank检验和Cox多因素分析筛选优选照射剂量及获益亚组人群。结果 单纯放疗中照射剂量<60 Gy (91例)、60 Gy (429例)、>60 Gy组(260例)的中位OS期分别为9、20、23个月(P=0.000);60 Gy与>60 Gy组OS曲线相近(P=0.362),且均优于<60 Gy组(P=0.000、0.000)。同期放化疗中照射剂量<60 Gy (18例)、60 Gy (224例)和>60 Gy组(60例)的中位OS期分别为22、34、15个月(P=0.004);<60 Gy与>60 Gy组OS曲线相近(P=0.952),60 Gy组OS优于>60 Gy组(P=0.002)。多因素预后分析结果显示不同治疗模式食管鳞癌预后不同,但GTV与照射剂量为2种治疗模式共同的预后因素(P=0.045、0.001);单纯放疗时照射剂量为≥60 Gy为生存获益因素(P=0.000);同期放化疗时仅照射剂量为60 Gy是生存获益因素(P=0.050)。结论 单纯放疗时食管鳞癌患者照射剂量≥60 Gy为优选剂量,同期放化疗时建议照射剂量尽量控制为60 Gy。     

1350例就诊者支原体感染状况及药敏分析

目的:了解本地区支原体感染及药物敏感情况,为指导临床合理用药提供理论依据。方法:对2014年来我院皮肤性病门诊进行支原体检测患者的培养及药敏结果进行回顾性统计分析。结果:1350例标本中支原体培养阳性559例(41.41%),其中Uu感染383例(28.37%),MH感染22例(1.63%),混合感染154例(11.41%);男性患者支原体培养阳性492例(39.87%),女性患者支原体培养阳性67例(57.76%),女性患者支原体感染阳性率明显高于男性患者(P﹤0.01)。Uu对交沙霉素、强力霉素、美满霉素、加替沙星这4种抗菌药物敏感性较高,敏感率大于70%,对克林霉素、甲砜霉素耐药显著;MH对美满霉素、交沙霉素、强力霉素敏感性较高,但与Uu敏感药物比较,可选择药物范围比较窄,对克拉霉素、罗红霉素、红霉素、阿奇霉素耐药性显著。结论:支原体对大部分抗菌药物产生不同程度的耐药性,本文建议使用对Uu和MH都较敏感的美满霉素、交沙霉素和强力霉素治疗泌尿生殖道支原体感染,并强调男女双方共同治疗,减缓耐药菌株的产生。     

伊曲康唑抗肿瘤血管生成的研究进展

伊曲康唑是一种临床广泛使用的三唑类抗真菌药,近年来越来越多的研究发现,其具有抑制肿瘤血管及淋巴管生成的作用,现将抗肿瘤血管生成作用的研究进展综述如下。     

Musashi1在结肠癌中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨Musashi1(Msi1)基因在结肠癌中的表达,分析其对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测Msi1在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的HCT116细胞株(shMsi1组),同时设置空白对照组和NC组。MTS实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。Western blotting检测沉默Msi1表达对Wnt和Notch信号通路关键分子的影响。结果结肠癌组织中Msi1表达量为3.36±0.75,明显高于癌旁正常组织的0.69±0.33,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默Msi1表达后,shMsi1组24、48、72 h的细胞增殖率分别为(128.00±3.13)%、(162.70±4.28)%、(191.86±7.72)%,明显低于空白对照组和NC组(P<0.05);shMsi1组48h细胞凋亡率为(8.47±1.04)%,明显高于空白对照组的(4.66±0.75)%和NC组的(4.83±1.07)%,差异具有统计学意义(P<0.05);shMsi1组细胞划痕愈合率为(27.38±9.63)%和侵袭细胞数为51.67±13.50,明显低于空白对照组的(58.12±8.54)%、219.00±24.56和NC组的(60.87±10.08)%、212.33±13.58,差异具有统计学意义(P<0.05)。下调Msi1表达后,shMsi1组Frat1蛋白表达量为0.53±0.10,低于空白对照组的1.00±0.16和NC组的0.94±0.13,而shMsi1组Numb蛋白表达量为1.74±0.09,明显高于空白对照组的1.00±0.17和NC组的0.73±0.09,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Msi1可能通过调控Frat1及Numb表达增强结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制其凋亡。     

结直肠癌干细胞表面标志物和信号通路研究进展

肠道干细胞分为两种,一个是表达Lgr5基底柱状干细胞,其表达与疾病分期有关,调控着细胞周期不断更替;另一个是+4干细胞,与肿瘤异质性有关,表达Bmi1使细胞周期停滞,此外还包括Msi1。多项研究表明在结直肠癌中以上标志物是高表达的,并可作用于Notch和经典Wnt信号通路促进肿瘤的发生和进展。