兽医教学中的生物安全问题及对策建议

生物安全问题是新世纪备受关注的重要的社会问题之一。兽医教学过程中经常会直接或间接接触到病原体，成为生物安全隐患较为集中的一个领域。为减少生物安全隐患对兽医教学带来的负面影响，该文就兽医教学过程中的生物安全隐患的主要存在环节、表现形式，以及目前兽医教学过程中的生物安全问题现状进行了分析，并为降低兽医教学过程中的生物安全风险提出了相应的对策建议。     

初冬大棚通风换气技巧

棚菜通风换气的目的是调节棚内的温度、湿度和二氧化碳的浓度以及排出有害气体.农民朋友在实际生产和操作过程中,应注意以下原则和措施. 1.温度.棚菜通风时必须在棚内的温度高于适宜于具体蔬菜生长的温度时方可进行,防止因放风后室内温度过低对蔬菜造成冻害或冷害.因此必须了解和掌握各种蔬菜的生长发育各个阶段对温度的要求,通风换气时不能低于该蔬菜品种在本生长发育阶段的需求温度.     

鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为探究陕西省咸阳市某鹌鹑养殖厂的鹌鹑发病是否为禽脑脊髓炎病毒引起,采集发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道等组织,通过鸡胚传代、RT-PCR扩增、免疫组织化学试验及动物回归试验对病原体进行分离鉴定,并对得到的序列进行同源性及遗传性分析。RT-PCR扩增结果显示,用禽脑脊髓炎病毒(AEV)特异性引物成功扩增得到大小为288bp的目的片段,与参考株的核苷酸序列相似性及氨基酸序列相似性分别为84.9%~99.3%和95.8%~98.9%;遗传进化分析结果表明,分离株与SX株位于同一分支;免疫组化试验结果显示,发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道组织切片中存在大量的阳性棕黄色着色区域,而阴性对照没有;动物回归试验结果显示,攻毒组鹌鹑出现典型的禽脑脊髓炎(AE)临床症状,发病率55.1%,病死率100%,病理剖检发现患病鹌鹑的脑组织软化,脑半球轮廓模糊,对照组未见异常。成功分离得到1株鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒,命名为AEV XY/Q-1410株,为鹌鹑禽脑脊髓炎的诊断及预防提供理论与技术支持。     

长链非编码RNA——病毒与宿主相互作用中的新型调控因子

长链非编码RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）是一类长度>200 nt的非编码RNA，在多种生物学过程中发挥重要调控作用。近年来研究表明，lncRNAs可被病毒诱导表达，其作为一类新型的调控因子介导宿主与病毒相互作用，通过病原识别受体，以不同机制激活或抑制天然免疫应答反馈病毒感染。本文阐述了lncRNAs介导病毒与宿主相互作用中的调控机制，归纳了它们在宿主抗病毒天然免疫应答过程中的调控网络，以期为研究lncRNAs在抗病毒中的作用提供参考，为揭示病毒的致病机制和发现新的抗病毒靶标奠定基础。     

猪脑心肌炎病毒2A蛋白的原核表达与纯化

本试验对猪脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）2A蛋白进行原核表达和纯化。采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原核表达质粒pET28a-EMCV-2A,经PCR和测序鉴定无误。将重组原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,超声破碎后,2A蛋白的表达主要以包涵体形式存在。通过优化蛋白表达条件,使目的蛋白能够实现可溶性表达。利用磁珠纯化方法对重组蛋白进行纯化,并以SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,本试验成功构建2A的重组表达质粒;重组蛋白分子质量约为25 ku,与预期大小一致;IPTG浓度1.0 mmol/L、16 ℃低温诱导16 h为最佳诱导条件,约有50%的蛋白呈现可溶性表达;纯化后获得2A重组蛋白。本试验通过对EMCV 2A蛋白的原核表达及纯化,成功获得纯度较高的EMCV 2A蛋白,为进一步阐明EMCV的分子致病机制以及研发基因疫苗和抗病毒药物奠定基础。     

基因Ⅶ型新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及特性研究

为制备基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)的单克隆抗体(MAb),本研究利用JS/17病毒株的HN重组蛋白和活病毒分别免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,并通过ELISA、间接免疫荧光和western blot方法筛选,制备了3株特异性识别HN蛋白的单克隆抗体(MAb)。其中,MAb1D4和4D9具有病毒中和活性(VN)及血凝抑制作用(HI),可以识别多种基因型的Ⅱ类NDV,但与Ⅰ类NDV病毒株无反应。MAb 2G8识别线性表位131DYIGGIGKE139,该表位在各病毒株中高度保守。获得的3株MAb可以用于NDV的鉴定及HN蛋白的功能研究。     

新城疫病毒强毒株F48E9致病性细化分型的鉴定

为了确证我国标准速发型新城疫强毒株F48E9致病性的细化分型,分别采用泄殖腔涂抹、泄殖腔注射、点眼滴鼻和静脉注射4种感染途径,用高、低2种剂量对SPF鸡进行感染,综合分析临床症状和病理变化。结果显示:各组均出现典型神经症状,并且伴随呼吸道症状和下痢,其中高剂量组尤其是静脉注射途径,病程较短,出现明显神经症状后1~2 h死亡,病理变化不明显;低剂量组发病平缓,神经症状呈明显的渐进性,其中以点眼滴鼻途径最为明显;各感染途径剖检观察到明显的脑部及肠道出血;综合分析判定F48E9株为嗜神经型速发型强毒。同时,针对强毒株致病性的细化分型,建议采取点眼滴鼻途径和低剂量方式,综合分析临床症状和病理变化进行鉴定。对速发型新城疫病毒的细化分型鉴定能够进一步为新城疫的鉴别诊断,病毒的组织嗜性、致病机理研究提供重要的基础依据。