Ⅰ群禽腺病毒山东株的分离鉴定及hexon基因的克隆与分析

从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株病毒。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶2-脱氧核苷抑制,表明毒株的核酸类型为DNA;对乙醚和氯仿有抵抗力;耐酸不耐碱;对热敏感。根据已发表的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因的保守区域设计合成了2对引物。用这2对引物对4株病毒的核酸模板进行PCR扩增,结果均扩增出与设计片段大小一致的片段。测序分析表明,4株分离株为Ⅰ群禽腺病毒。用本实验室自制的Ⅰ群禽腺病毒12个血清型参考毒株的抗血清进行双向琼脂扩散试验,证明4株病毒中1株为血清2型,其余3株为血清8型。     

次氯酸消毒种蛋效果研究

为探讨次氯酸消毒种蛋的效果,试验选用7种常见的消毒剂,对比相同消毒时间(10min)的消毒效果。结果显示,次氯酸对大肠埃希菌标准株和大肠埃希菌耐药株的最低抑菌浓度为10mL/L,优于戊二醛、过氧乙酸、二氧化氯等消毒剂;10～50mL/L浓度的次氯酸消毒种蛋可使种蛋表面大肠埃希菌的杀灭效果达到97%～99%;使用10mL/L的次氯酸喷淋消毒整车种蛋,与戊二醛喷淋同机孵化的同源同龄种蛋相比,次氯酸喷淋组种蛋受精率提高、孵化中止率降低。可见,次氯酸可以替代醛类等其他消毒剂进行种蛋消毒,并能提高种蛋利用率和孵化成绩。     

肉鸭烟曲霉菌的分离与鉴定

烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)系子囊菌纲(Asycetes)曲霉属的真菌,在潮湿环境中普遍存在,是禽类曲霉菌病最常见的病原,该菌1863年首次发现于鸨的肺脏,在曲霉菌属中致病性较高,对养禽业危害严重[1-3].2009年12月下旬,山东临沂某饲养场采用发酵床生态养殖的40 000多只商品肉鸭出现呼吸困难,消瘦,死亡率达40％以上,剖检病死鸭肺脏上有黄白色、盘状针尖至米粒大小的结节为特征的传染性疾病.对垫料和发病鸭进行病原分离与鉴定,表明为烟曲霉菌感染,现将结果报道如下.     

鸭源新城疫病毒NP蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立

根据GenBank发表的鸭源新城疫病毒SDWF02株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物,扩增出鸭源新城疫病毒的NP基因,与原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET28a-NP,经鉴定后转化Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表明,54 000的融合蛋白得以表达,该蛋白能与鸭源新城疫的阳性血清发生特异性的反应.以纯化的重组蛋白为包被抗原,建立检测鸭源新城疫抗体的间接ELISA方法,经方阵滴定确定最佳包被质量液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,最佳包被质量浓度为10 ng/孔,血清最佳稀释度为1∶1 000.经应用试验表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,为临床检测鸭源新城疫抗体水平提供了一种简单、准确、快速的诊断方法.     

狐阴道加德纳氏菌的分离鉴定

本研究对山东省日照地区送检的病死狐样品进行了细菌的分离,根据分离菌株的形态特征、培养特性、生化试验和PCR鉴定,确定为狐阴道加德纳氏菌.对鉴定出的狐阴道加德纳氏菌进行药敏试验,结果表明该分离菌对万古霉素、复合磺胺敏感,而对卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶等药物有耐药性.该研究为狐阴道加德纳氏菌病的预防、控制和临床治疗提供了重要的参考依据.     

Ⅰ群禽腺病毒血清10型的致病性

将Ⅰ群禽腺病毒血清10型山东分离株(SDXT株)通过皮下注射接种途径人工感染1日龄SPF雏鸡,观察试验鸡的发病情况及临床症状;于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸡只,采集心脏、肝脏、肺脏和肠道等组织固定、切片、H.E.染色,观察各器官病理组织学变化,并进行血常规和血液生化指标检测.同时,应用IFA对SDXT株人工感染雏鸡的各组织器官进行检测.结果表明,SDXT株接种后,引起雏鸡精神沉郁、食欲不振、嗜睡等症状.病理组织学变化以肝脏脂肪变性、肝脏结构紊乱、肝窦间出血和炎性细胞浸润,在肝细胞核内可见嗜碱性包涵体为主;肠道内肠绒毛脱落;肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润为特征.IFA检测结果显示,肝脏、脾脏、肠道、肺脏均可检测到SDXT株,其中肝脏和肠道检出率最高,表明这2个器官是其主要靶器官.HGB、WBC、RBC、ALT和ALP发生显著变化.结果表明,Ⅰ群禽腺病毒血清10型对雏鸡有较强的致病性.