口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因在昆虫细胞中的表达及应用

研究口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP) 2C在区分灭活疫苗免疫动物与自然感染动物方面的意义.本研究将FMDV NSP 2C基因,克隆到穿梭载体pFast-bac- HT-B,将其转入含骨架载体Bacmid的DH10Bac,经蓝白斑筛选得到重组骨架质粒Bacmid-2C.将Bacmid-2C转染昆虫细胞Sf9,鉴定正确后,经3次增殖获得高滴度的P-3代病毒后,在High Five细胞中进行目的蛋白的表达.SDS-PAGE结果显示在High Five细胞中得到了相对分子质量约为38.93 ku的目的蛋白2C,Western blotting及Dot-ELISA结果显示,该表达产物对FMDV感染动物阳性血清有良好的反应性.以电泳纯化的2C蛋白为抗原建立间接ELISA,检测健康非免疫动物、免疫动物及FM-DV试验感染动物血清,结果表明2C-ELISA不但能区分免疫动物和感染动物的血清,而且还能检测FMDV感染早期动物血清中的2C抗体.说明昆虫细胞表达的2C蛋白可作为FMDV疫苗免疫动物与自然感染动物鉴别诊断的良好抗原.2C基因在Bac-to-Bac系统中的成功表达为建立通过检测几种NSP抗体,筛查感染及隐性带毒动物,净化畜群的方法奠定了基础.     

猪红细胞生成素受体基因突变与血常规性状关联分析

本研究旨在探索红细胞生成素受体基因(EPOR)影响红细胞相关性状的分子机理.对EPOR基因第1内含子和第4内含子突变位点g.705G＞T和g.2373C＞T,以飞行时间质谱进行个体基因型分型,在构建的大白猪×民猪F2代资源群体内开展其与6种血常规性状(红细胞压积、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞体积、红细胞计数及红细胞分布宽度)的关联分析.结果表明,第1内含子突变位点g.705G＞T未发现与血常规性状显著关联;第4内含子突变位点g.2373C＞T群体内只发现2种基因型,其中CT基因型个体的红细胞压积显著高于CC基因型个体(P＜0.05),但并未发现与其他性状显著关联.结果显示,EPOR基因突变可显著影响红细胞压积,说明该基因可作为影响红细胞压积的主效候选基因开展深入研究.     

无籽罗汉果新品种"药园无籽1号"

"药园无籽1号"是以罗汉果品种"农院B6"作母本、"药园败雄1号"作父本进行杂交,F1代单株组织培养育成的罗汉果无籽新品种. 1.植物学特征 "药园无籽1号"植株健壮,主茎粗0.71~1.18厘米.叶片心形,叶片长12.26~21.57厘米、宽10.24~20.85厘米,深绿色,叶柄长4.20~6.91厘米.子房棒槌状,浅绿色.花朵5瓣、黄色.幼果卵形、青绿色.     

罗汉果新品种永青1号的选育

永青1号是2004年以龙江青皮果作母本、以冬瓜果作父本杂交获得F1代,再从F1代变异株采集种子所培养苗木中选出的罗汉果新品种。果实长矩圆形,果形指数1.23,鲜果重104.6 g;幼果浅黄绿色,成熟果青绿色;果肉饱满,水分、维生素C、总苷、甜苷Ⅴ、水浸出物、总糖含量分别为77.60%、3 020.00 mg/kg、8.84%、1.03%、37.90%、17.40%。不裂果,烘干无响果。在广西北部地区,果实9月下旬至10月上旬成熟。2007年5月通过广西壮族自治区农作物品种审定委员会审定。     

罗汉果新品种‘永青1号’

罗汉果是我国特有的甜料和药用作物。‘永青1号’罗汉果是以‘龙江青皮果’为母本。‘冬瓜果’为父本进行杂交,经2005-2007年的单株优选、组培繁育而成的雌性无性系品种。2007年5月通过广西壮族自治区农作物品种审定委员会审定并命名。     

桑寄生顽拗性种子发芽影响因素研究

以桑寄生种子为试材,参考《国际种子检验规程》和《种子学》中种子发芽试验的方法,研究了不同发芽床、不同温度、不同光照、不同抑菌处理及不同批次等对种子发芽的影响。结果表明:种子最佳发芽床是纸床;不同温度处理种子发芽率之间差异显著,最佳发芽温度是25~30℃变温培养;光照对种子的萌发无影响;种子不消毒,用灭菌水处理效果最好;不同批次的种子质量有差异,春季的种子优于秋冬季的种子。     

基于响应面分析对坚强芽胞杆菌-CX10发酵黄芪多糖的条件筛选与优化

以黄芪为原料,采用二级因子最陡上升/下降法、单因素试验和响应面法,以新分离白蚁源坚强芽胞杆菌-CX10为发酵菌种,对黄芪发酵多糖(Fermented Astragalus Polysacharin,FAPS)质量分数进行研究。对11个重要的发酵培养基因素及其发酵条件进行筛选,如化学因素(葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、乳清粉、KH_2PO_4、NaCl和黄芪粉)、物理因素(温度、pH和时间)和生物因素(接种量),用二阶因子(Plackett-Burman Design,PB)筛选关键因素,以发酵黄芪多糖质量分数显著性影响为中心指标,通过单因素试验考察碳源、氮源、pH、接种量、时间和温度6因素对多糖质量分数的影响,用中心复合设计(BOX-Benken Design,BBD)优化4个重要的发酵参数,如发酵pH、发酵时间、发酵温度和接种量,以获得更高的黄芪多糖的质量分数。最佳发酵条件为:pH 7.35、发酵时间37.54 h、发酵温度37.45℃、接种量10.60%。试验验证在最佳发酵条件下黄芪多糖质量分数为(69.3±0.013)%,理论预测值为71.77%,结果与预测值基本相符,证明该优化条件有效。     

家兔氟乙酰胺中毒后血、尿指标的变化

为探讨动物氟乙酰胺中毒后血液和尿液指标的变化规律,将20只健康家兔随机分成4组,Ⅰ组为对照组,正常饲喂,Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组作为中毒组,分别经口灌服1.5、2.0、10.0 mg/kg体重的氟乙酰胺溶液(5.68×10-2 mg/L);各中毒组家兔死亡前从心脏采集血样,未死亡家兔和对照组家兔在试验第3天从心脏采集血样,进行红细胞、白细胞计数、白细胞分类计数和血红蛋白含量测定;通过膀胱穿刺采集尿液,用半自动生化仪测定亚硝酸盐、pH、葡萄糖、蛋白质、潜血、酮体、胆红素及尿胆素原等指标.结果显示,各中毒组家兔血红蛋白含量及红细胞总数较对照组显著降低(P＜0.05),白细胞总数显著增加(P＜0.05),其中淋巴细胞增加较为明显,中性粒细胞相对减少;各中毒组尿液中葡萄糖、蛋白质和尿胆素原含量较对照组都有所升高,pH显著降低(P＜0.05),尿中血红蛋白含量显著增加(P＜0.05).这些指标的测定可为动物氟乙酰胺中毒临床诊断提供参考.     

蔓性千斤拔种子处理及常温贮藏研究

研究不同处理方法及常温贮藏时间对蔓性千斤拔种子发芽的影响。结果表明：（1）浓硫酸和机械磨擦处理均能显著改善种子的发芽状况,其中浓硫酸处理以处理10—15min最佳,其发芽率、发芽势、发芽指数分别较对照高2倍、14．6倍和14．29倍;机械处理以处理180s最佳,其发芽率、发芽势和发芽指数分别较对照高2．67倍、15．17倍和7．51倍。（2）贮藏时间以当年种子的发芽特性最佳,常温下贮藏1年,种子发芽率下降至83％,与当年种子发芽率无明显差异;贮藏2年,发芽率降至65．5％,与当年种子发芽率达到显著差异;贮藏3年,与当年采收种发芽率差异达到极显著水平。     

罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

 从罗汉果（Siraitia grosvenorii）转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基转移酶（UDPG）的unigene片段,以罗汉果授粉后70 d的果实RNA为模板,利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因,将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上,构建融合表达载体,转化到大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达,重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物。结果表明,获得了1条SgUDPG1,全长为1 959 bp,开放阅读框ORF为1 365 bp,编码1条454 aa的肽链,理论分子量为51.2 kD,等电点为5.39,具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-box motif。SgUDPG1在授粉后50 d和70 d的果实中表达逐渐升高,是对照授粉后3 d的5.16倍和13.12倍,与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达,并且可以纯化出比理论分子量大5.3 kD的融合蛋白,通过Western-blotting和质谱鉴定,确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。