葡萄叶片植株再生及基因导入研究

葡萄不同组织的植株再生已多有研究 ,然而 ,葡萄的外源基因转移相对于其组织再生的难度大得多。迄今 ,大多限于砧木和酿造品种。国内 ,黄学森首次报道了葡萄外源基因转移工作 ,以后再未见报导。我们研究了不同品种的植株再生、抗生素对其再生植株的影响及外源基因转导 ,结果如下。1　材料和方法葡萄无病毒试管苗按常规方法进行快繁 ,苗高5cm左右、长有 3～ 5片展开叶时 ,切取完全展开的嫩叶 ,沿主脉横切数个伤口 ,远轴面接触培养基 ,置培养室进行再生植株诱导。培养基 :植株再生诱导培养基为NN 69 蔗糖 2 0 .0 g/L 琼酯 4 .5g/L附加 BA …     

包埋干燥超低温保存苹果离体茎尖

选用继代培养７０ｄ的苹果离体茎尖,在５℃条件下低温驯化３周,经不同浓度蔗糖预培养及藻酸钠包埋后,在无菌空气中干燥脱水４ｈ直接投入液氮,化冻后茎尖存活率达７０％以上。通过选择材料的生理状态可缩短和简化保存过程。     

葡萄叶片植株再生及GFLV-CP基因的转化

利用无核白和黑王等12个品种的无病毒葡萄试管苗叶片为外植体,在NN69培养基(Nitsch and Nitsch 1969)试验了不同浓度的IBA和BA对其植株再生的影响.其中无核白、黑王、红地球和红宝石4个品种获得了稳定高频率的再生植株.以GUS基因为报告基因,通过根癌农杆菌介导,建立了葡萄离体叶片外源基因的遗传转化体系,而后将葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因转入葡萄叶片,通过卡那霉素筛选和PCR检测证明获得了转葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因的无核白葡萄植株.     

三种ELISA方法检测苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒的比较

苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）和苹果茎沟病毒（ＡＳＧＶ）是感染苹果和其它一些果树的重要病毒。作者应用ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ法成功地检测了苹果组培苗中的这两种病毒。为了简化操作步骤,试验了ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ和改良ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ法,并与ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ的检测结果比较。试验结果表明,ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ能检测出ＡＳＧＶ,却不能检测出ＡＣＬＳＶ,与此同时,这两种病毒均可用改良ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测。ＤＡＳ     

苹果砧木玻璃化过程中内源激素的含量变化

用ＨＰＬＣ方法测定了苹果砧木茎尖培养苗玻璃化过程中内源激素的含量变化。结果表明，玻璃化苗叶片及茎尖中赤霉素（ＧＡ３）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）、脱落酸（ＡＢＡ）含量极显著降低，同时细胞分裂素（ＣＴＫ）含量则显著上升，在茎叶极度玻璃化时ＣＴＫ含量显著下降。在继代培养过程中，叶片玻璃化症状出现之前５～１０天，已开始了ＧＡ３、ＩＡＡ的下降和ＣＴＫ的上升过程，ＧＡ３／ＣＴＫ、ＩＡＡ／ＣＴＡ比值也急剧下降。培养基高浓度６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）能引起叶片ＧＡ３、ＩＡＡ含量下降及玻化出现，表明苹果砧木茎尖培养玻化现象与ＧＡ３、ＩＡＡ、ＡＢＡ及ＣＴＫ含量及比值的急剧变化有关。     

脱毒对苹果苗木和砧木的过氧化物酶、硝酸还原酶及蛋白质、氨基酸含量的影响

对王林、乔纳金、长富２、秋富１、Ｍ７、Ｍ２６六个苹果品种及砧木的脱毒与未脱毒苗木进行测定，结果显示，脱毒后成叶中过氧化物酶活性显著降低。王林、长富２的脱毒苗成叶内硝酸还原酶活性比对照极显著增强。王林、乔纳金、长富２三品种脱毒苗成叶中蛋白质及氨基酸含量显著降低，幼叶及嫩梢皮层中蛋白质含量显著增高。脱毒后，三个品种成叶组织提取液褐变度明显降低。     

不同处理对无病毒葡萄离体叶片遗传转化的影响

本研究利用无核白、红地球、黑王和红宝石这4个无病毒葡萄试管苗的叶片为外植体,在NN69培养基上获得了稳定高频率的再生植株,并对抗生素浓度、根癌农杆菌不同活化方法、葡萄叶片不同叶位、切割叶片时的不同液体、聚乙烯吡咯烷酮（酚类吸附剂）和维生素C（抗氧化剂）对葡萄叶片遗传转化的影响进行了研究。结果表明,葡萄叶片对卡那霉素敏感,并因不同品种而稍有差异;叶片不同叶位中以取顶端第一幼叶时转化效率最高;根癌农杆菌活化方法中以活化18h后,添加等体积新鲜LB培养基,再培养5h时转化效率最高;聚乙烯吡咯烷酮和维生素C对遗传转化不但没有明显的促进作用,而且明显抑制叶片的再生率。     

果树花粉的超低温保存

将苹果、梨、桃、李和樱桃等树种的39个品种的花粉干燥至含水量10～20％,直接接入液氮(-196℃)中,经过一段时间保存后,再以40℃水浴快速化冻1分钟,然后鉴定其生活力和萌发力。结果表明,供试果树花粉的离体萌发率、萌发时间、花粉管的形态及伸长速     

苹果组培嫩枝露地嫁接山定子获得成苗

<正> 1983～1984年,用苹果优良单株28—122(国光×红星芽变192)的6年生实生树茎尖组培嫩枝作接穗,在露地条件下,嫁接在1～2年生山定子砧木获得成功,成活率高低不等,高者可达60～70%。嫁接前,对长度为2厘米以上的健壮组培嫩枝进行一次分转,在 MS 基础培养基中增加氯化钾1500毫克/升,NAA由0.01毫克/升降至0.005毫克/升,BA 由2.5毫克/升降至1.0毫克/升。然后,     

PhytagelR作为固化剂获得苹果叶片高频率植株再生

以昌红、红世界、红金和群红4个无病毒苹果无性系为试材,用PhytagelR代替琼脂作为固化剂,研究了N6、MS和NN69培养基上附加0.5 mg/L的IBA以及各培养基处理的不同培养方法对其离体叶片植株再生效率的影响.结果表明,NN69培养基优于MS和N6培养基,再生率最高可达到100%;IBA对植株再生有促进作用;暗培养有利于离体叶片植株再生.