巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用

目的 探索巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用价值.方法 将水泡带绦虫、犬弓首蛔虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株和骆驼株等样本的DNA用巢式PCR扩增.结果 巢式PCR可以扩增出多房棘球绦虫和水泡带绦虫,而对细粒棘球绦虫羊株和骆驼株及其他寄生虫均不能扩增出.结论 在鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫方面,巢式PCR有一定的诊断意义,但不能用于鉴别细粒棘球绦虫基因亚型.     

Smad4在肝泡状棘球蚴病小鼠中的表达及其意义

目的 探讨细胞质信息传递介质Smad4在小鼠肝泡状棘球蚴病灶周围的表达及其意义.方法 16只小鼠按随机数字表法分为受试组(人工接种肝泡状棘球蚴)和对照组(注射生理盐水),每组8只.应用免疫组织化学方法检测小鼠肝脏中Smad4蛋白的表达.采用x2检验对结果进行分析,观察泡状棘球蚴对Smad4蛋白表达的影响.结果 Smad4蛋白主要表达于细胞核中,部分表达于细胞质中.小鼠感染泡状棘球蚴后6个月,受试组肝组织Smad4表达明显高于对照组(X2=19.869,P＜0.05).受试组肝细胞Smad4蛋白呈阳性表达的数量略多于对照组,且强度比对照组高(x2=58.310,P＜0.05).结论 病灶周围肝组织和肝细胞中Smad4表达增多,其改变可能在纤维化过程中及免疫逃避中发挥效应.     

2型糖尿病听力损害患者与AGEs及APN的相关性研究

目的研究2型糖尿病听力损害患者与晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）及脂联素（adiponectin,APN)的浓度之间的相互作用关系。方法用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清AGEs和APN的含量。实验组为糖尿病患者104例,其中糖尿病伴有听力损害者49例（A组）,糖尿病不伴有听力损害患者55例（B组）;对照组为47例健康者（C组）。结果3组受检者体重指数（BMI）、总胆固醇（TC）水平比较,差异均无统计学意义( P>0.05);而空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、餐后2小时血糖（2hPG）、低密度脂蛋白胆固醇( LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇( HDL-C)、甘油三脂( TG)、AGEs、APN水平比较,差异均有统计学意义( P<0.05);与C组相比,A组及B组FPG、HbA1c、2hPG、LDL-C、TG、AGEs水平均明显升高,HDL-C、APN均明显降低（P<0.05）;与B组相比,A组AGEs水平升高,APN水平降低（P<0.05）;在糖尿病听力损害患者中,AGEs与FPG、2hPG、LDL-C、HbA1c、糖尿病病程、听力平均值均呈正相关( P<0.05)。APN与BMI、FPG、2hPG、HbA1c、糖尿病病程、听力平均值均呈负相关,与HDL-C呈正相关( P<0.05)。结论血清AGEs、APN与2型糖尿病听力损害的发生及发展具有相关性。临床上AG-Es、APN可作为早期评估糖尿病听力损害及预测其预后的参考指标。     

泡球蚴感染小鼠肝脏自噬相关蛋白的表达及其与纤维化关系的研究

目的 通过观察泡球蚴感染不同阶段小鼠肝脏纤维化情况与自噬相关蛋白表达情况,分析在泡球蚴感染中自噬与肝纤维化的关系。方法 取雌性BALB/c小鼠45只,随机分为模型组(30只)与对照组(15只)。模型组小鼠感染泡球蚴,并分别于感染8、30、60、90、180 d处死,通过HE染色观察小鼠肝脏的组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肝脏胶原纤维变化,免疫组化法检测肝脏中Atg5、LC3与α-SMA蛋白的表达情况,qRT-PCR检测肝脏中Atg5、LC3、α-SMA mRNA表达水平。结果 模型组小鼠感染泡球蚴8～90 d, Atg5、LC3、α-SMA蛋白及其mRNA表达逐渐增加,其中感染30～90 d时与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05);感染180d时Atg5、LC3表达量较之前减低,而α-SMA表达量继续增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 泡球蚴感染早、中期小鼠肝脏自噬相关蛋白高表达,可能促进肝星状细胞活化。     

雌酮人工抗原的制备与鉴定

目的 制备雌酮人工抗原. 方法 采用碳化二亚胺法将雌酮半抗原与载体蛋白牛血清清蛋白连接制备免疫耦联物, 用紫外分光光度法测定耦联率, 并测定兔抗体血清效价. 结果 测得耦联率比为12：1, 血清抗体效价为6.4×103.结论 该 方法 简便、 结果 准确可靠, 可应用于雌酮免疫原合成.     

新疆和布克赛尔蒙古自治县棘球蚴病感染现况及相关危险因素分析

目的 调查新疆和布克赛尔蒙古自治县(简称和丰县)棘球蚴病感染流行现状并进行相关危险因素分析.方法 2013年,在和丰县5个乡(牧场),采用整群随机抽样方法,抽取532人进行一般情况调查、B超肝脏扫描及血清学抗体检查;剖检38只犬;另入户收集126份犬粪样本.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测粪抗原,同时对犬主人进行问卷调查.采用SAS JMP软件进行数据统计分析,并进行多因素Logistic回归分析.结果 人群棘球蚴病检出率为4.70％(25/532),其中细粒和多房棘球蚴病检出率分别为4.32％(23/532)和0.38％(2/532).血清总阳性率为25.46％(125/491),其中41 ～ 65岁人群阳性率(30.70％,66/215)高于0～17岁人群(8.33％,5/60,P＜0.05);女性阳性率(30.19％,93/308)高于男性(17.48％,32/183,P＜0.05);蒙古族阳性率(29.08％,107/368)高于汉族(13.79％,4/29,P＜0.05);牧民阳性率(32.77％,58/177)高于学生(4.17％,2/48,P＜0.05);那仁和布克牧场阳性率(36.96％,61/165)高于巴音敖瓦乡(7.69％,6/78,P＜ 0.05).剖检的38只犬中,有16只感染棘球绦虫.犬粪抗原阳性率为39.68％(50/126),其中那仁和布克牧场阳性率(48.78％,20/41)与查和特乡(20.00％,4/20)比较有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).问卷调查显示,126只犬总体平均驱虫率只有49.20％(62/126).多因素Logistic回归分析显示,性别、地区、职业是人群棘球蚴病的影响因素.结论 新疆和丰县人群棘球蚴病检出率和血清阳性率较高;性别、地区、职业可能是人群棘球蚴病主要的危险因素.     

泡球蚴组织体外培养的生长发育观察

目的 观察体外培养泡球蚴的生长发育特性。 方法 在肝癌细胞系条件下体外培养泡球蚴，用光学显微镜定期观察其数量、大小及形态变化，并绘制囊泡生长曲线。用电子显微镜观察囊泡形态结构。 结果 体外培养后泡球蚴增多，至22 d其数量相当于开始培养第3～4天的6～7倍；囊泡具有出芽生殖能力。起初均为小囊泡，随时间增加，囊泡的直径也增加，在第22天时约30%为大的囊泡，70%为小的囊泡。发现介于原头蚴与囊泡之间的形态。 结论 肝癌细胞系体外培养的泡球蚴，生长发育较好且数量增加，可获得纯度较高的分泌或排泄抗原，该方法可为泡球蚴生物学及相关实验研究提供充分实验材料。     

泡球蚴感染中自噬相关蛋白对巨噬细胞极化的影响北大核心CSCD

目的通过对感染泡球蚴小鼠肝脏的自噬相关蛋白以及巨噬细胞不同分型的检测,探讨在泡球蚴感染过程中自噬对巨噬细胞极化的影响及可能机制。方法取雌性BALB/c小鼠16只,随机分为实验组与对照组。实验组建立泡球蚴感染小鼠模型,于感染90天处死,通过HE染色观察小鼠肝脏的病理学变化,利用免疫组化等技术检测肝脏中自噬相关蛋白的表达,利用免疫荧光激光共聚焦法进行肝脏组织巨噬细胞与自噬相关蛋白共定位,采用流式细胞术检测肝脏巨噬细胞M1、M2表达水平。结果感染90天时,实验组小鼠肝脏自噬相关蛋白LC3、p62表达均增高,相对表达量分别为2.08±0.3和1.85±0.2,与对照组比较差异均有统计学意义(F值分别为260.114和434.116,均P<0.01);实验组小鼠肝脏组织中自噬相关蛋白LC3、p62与巨噬细胞存在共定位表达,Pearson’s相关系数与对照组比较有统计学意义(F值分别为132.219和36.325,均P<0.01),Manders重叠系数与对照组比较有统计学意义(F值分别为205.410和140.665,均P<0.01);实验组小鼠肝脏巨噬细胞数增加至31.74±1.68,M1型巨噬细胞增加至66.46±1.82,M2型巨噬细胞减少至22.46±0.63,与对照组比较差异均有统计学意义(F值分别为309.358、194.001和759.194,均P<0.01)。结论泡球蚴感染小鼠肝脏自噬相关蛋白高表达,促进巨噬细胞以M1型极化,抑制M2型极化,以减轻炎症反应,帮助机体清除病原体。     

新疆和布克赛尔蒙古自治县人群和羊群肝包虫病现场筛查报告

目的了解新疆和布克赛尔县人群和羊群肝包虫病感染情况,以评价包虫病防控措施。方法在和布克赛尔县采用现患筛查的抽查方法,以肝包虫病超声声像图特征作为诊断标准,现场筛查人群和羊群肝包虫病,并比较分析不同筛查点患病情况。结果超声声像图显示,人群肝包虫病检出率为4.4%(23/521),囊性包虫病检出率为4.0%(21/521),泡性包虫病检出率为o.8%(4/521),羊群感染率为3.8%(7/180)。5个筛查点中查干库勒乡人群和羊群感染率最高,人群检出率与其他各筛查点相比差异无统计学意义,羊群检出率与巴音傲瓦乡相比差异有统计学意义(Z2=4.8259,P=0.0280),作为包虫病中间宿主绵羊的感染率高于人群。结论和布克赛尔县人群和羊群肝包虫病仍呈高流行趋势。     

点免疫金渗滤法筛选胶体金标记抗人IgG 的研究

目的:应用点免疫金渗滤法筛选适宜胶体金标记的抗人IgG(以下简称二抗),并运用多个评价指标进行比较和分析。方法:选择三个不同公司的二抗用胶体金标记,根据棋盘滴定法确定最佳标记条件;运用点免疫金渗滤法对三种二抗的胶体金标记后检测效能进行比较,采用包虫病人和健康对照血清,用包虫病特异性抗原检测包虫病患者血清中的特异性抗体,评价最优的二抗,并与酶联免疫吸附测定法进行比较。结果:A、B、C 三种二抗标记的最佳标记条件为:pH 均为8.5,加入量分别为38.4、24、19.2 g/ ml,综合评价二抗B 检测效能最优。将其与酶联免疫吸附测定法检测效能进行比较,两种方法检测结果的Kappa=0.895(P<0.05),吻合度较强。结论:应用点免疫金渗滤法,以及本文提出的评价指标,能够筛选出最佳二抗,对检测试剂盒中二抗的选择具有重要的参考价值。