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目的 :探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME—BOOST免疫程序免疫增强效果。方法:用Eco R I、Xho I和Eco R I、Sal I分别双酶切PVAX1及既往构建的p ET28a(+)/C-G250肽-C质粒。利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定。大量提取质粒并分光光度计测质粒含量。将32只雌性昆明小鼠随机分为(A)裸DNA组,(B)DNA-PEI复合物组,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗组,(D)空白对照组。按0,10,20,30天程序经股四头肌注射免疫。C组在第20天及第30天进行蛋白冲击。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度。流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4+和CD8+。结果:酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽c DNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中。昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+达26.12%和12.60%,明显高于A组的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32%和10.74%。而蛋白冲击组的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96%和15.14%,明显高于B组(P0.05)。结论:成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C。该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应。证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用。为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法。 相似文献
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金属催化生成的羟自由基是细胞损伤的有效介质,对各种大分子都有影响,也支持阿尔茨海默病发病机制中的氧化损伤学说。对具有氧化活性的铜和铁进行研究表明,阿尔茨海默病患者的氧化还原活性只存在于神经元的细胞质内,与去铁敏、DTPA(二乙烯三胺五乙酸)或者是最近发现的氯碘羟喹螯合后失去这种活性。研究还发现蛋白质聚集在阿尔茨海默病患者具有金属结合能力的部位,金属相关性细胞内氧化还原反应主要依赖于与核酸有关的金属,尤其是细胞质的RNA。这些结果表明:研究者推测铁的内环境稳态的变化最初可能始于亚铁血红素,因为亚铁血红素氧合酶可以催化亚铁血红素转化为铁和胆绿素,这在阿尔茨海默病和线粒体中是增加的,因此在阿尔茨海默病患者中线粒体的代谢、线粒体DNA和细胞色素C的氧化活性是增强的。结合阿尔茨海默病神经元中微管密度下降,这些在细胞骨架的病理过程中起到协调作用,并使具有氧化还原活性的重金属增加,激发了导致阿尔茨海默病发病过程的一系列异常的级联反应。 相似文献
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超氧阴离子自由基(Sunerosideanionradical,O。)是氧分子(O。)单电子还原的产物。它既带一个负电荷,又具有一个未配对电子。研究表明,超氧自由基具有自相矛盾的作用,它可诱导细胞分裂,调节正常生理功能,也可能导致恶性肿瘤转移或细胞调亡。由激活的多形核白细胞和其它吞噬细胞产生的O。一是杀菌剂的一个重要成分,此可能与炎症所致的组织损伤有关。有学者报道,OZ一能作为脂质过氧化反应的终止剂而营救细胞,与其始动脂质过氧化的观点相矛盾。l超氧自由基的杀育作用与炎性损伤吞噬乳胶微粒所激活的白细胞可产生OZ(Babior,19… 相似文献
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氧化还原反应是人体内最为广泛和重要的化学反应,自由基是其重要的反应成份。自由基广泛涉及到衰老、退行性疾病及肿瘤的发生。近年来,自由基与前列腺关系的研究受到重视。本文重点讨论一氧化氮对前列腺功能的调节;前列腺增生组织中DNA碱基损伤与抗氧化酶活性;雄激素诱导前列腺癌细胞氧化还原变化原因和结果的研究进展。 相似文献
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目的 构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因 4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用。方法 利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV), 斑点杂交法检测病毒滴度。取孵育9d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC 3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组:空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查。免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达。结果 酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT, 斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34×1010~3.34×1011cfu/mL。免疫荧光法证实SAC融合肽表达。移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制。结论 成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用。 相似文献
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脑梗死患者血清VEGF的动态变化及临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究脑梗死、TIA患者血清中VEGF的动态变化及其临床意义,为探讨VEGF在缺血性脑血管病中的保护作用及为临床应用VEGF治疗缺血性脑血管病提供理论依据。方法 采用双抗体夹心ELISA法,分别测定脑梗死患者发病24 h内、3d、7d、 14d的VEGF水平及TIA患者24 h内的VEGF水平。 结果 脑梗死组与TIA及正常对照组相比在病程各时间点上血清VEGF浓度均增高(P<0.01),且呈动态变化,于7 d达高峰。 梗死灶大者,伴有并发症患者VEGF水平高。TIA组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论 VEGF参与了缺血性脑损伤的病理发展及修复过程VEGF有可能成为反映脑缺血程度的一个敏感指标。 相似文献