不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）可疑感染者，初步评价HIV一2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV-1／2免疫印迹（WB）试验检测出现HIV-2指示带的16份受检者的全血样品，进行HIV-2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV-1／2ELISA初筛一复检，其中阳性样品再分别用HIV-1／2线性免疫试验（LIA）和HIV-2WB检测。外周血单核细胞（PBMC）中的前病毒DNA用HIV-2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV-1／2ELISA筛查均为HIV抗体阳性；用HIV-1／2 LIA检测，全部为HIV-1抗体阳性，15份为HIV-2抗体阴性、1份不确定；用HIV-2WB检测，有3份为HIV-2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上，可以排除窗口期感染，上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV-2抗体阴性。此外，用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV一2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV-1而非HIV-2感染，HIV-1／2uA的抗体检测结果与HIV-2核酸检测结果基本相符，而HIV-2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。     

我国6个省19个城市男男性行为人群HIV-1 基因亚型及抗病毒治疗前耐药分析

目的分析我国6个省19个城市男男性行为人群(MSM)HIV-1基因亚型分布及抗病毒治疗前耐药情况。方法 2019年4-11月, 在河北、山东、江苏、浙江、福建和广东6个省19个城市收集未接受抗病毒治疗MSM HIV-1感染者的血浆样本574份, 提取RNA, 反转录后经巢式PCR扩增HIV-1pol 基因区片段。PCR 产物测序后进行序列分析, 构建系统进化树判定病毒基因亚型, 提交斯坦福耐药数据库分析耐药。结果有479份样本PCR扩增成功并获得核酸序列, 检出的HIV-1基因亚型有9种, 其中CRF01_AE(43.4%)和CRF07_BC(36.3%)所占比例较大, 随后依次为B(6.3%)、CRF55₀1B(5.9%)、CRF59₀1B(0.8%)、CRF65_cpx(0.8%)、CRF103₀1B(0.4%)、CRF67₀1B(0.4%)和CRF68₀1B(0.2%);另有26份(5.5%)样本的基因亚型为未知...     

多重PCR快速检测食品中肠出血性大肠杆菌

本研究建立了一种快速检测食品中肠出血性大肠杆菌 (EHEC)的多重PCR方法。将样品增菌后 ,采用快速裂解吸附法制备模板 ,用多重PCR同时检测EHEC的三种毒力基因eaeA、hlyAB、slt1 2 ,相应扩增片段依次为 110 9、30 2、2 2 8bp。检测了 6 0株大肠杆菌和其它菌种。结果 12株大肠杆菌O15 7∶H7、1株大肠杆菌O2 6∶H11和 1株大肠杆菌O111∶H8同时检出上述三种基因 ,2株EAEC检出了eaeA基因 ,1株VTEC检出了slt1 2基因 ,其余 43株大肠杆菌和非大肠杆菌未检出上述基因。检测食品中EHEC时 ,从样品增菌培养到整个检测过程结束不超过 8小时 ,方法的检出限≤ 1 6cfu g(ml)。检测的 12 6份食品样品中 ,3份检出了EHEC(包括牛肉、猪肉和生菜各 1份 )。实验结果表明该法是一种特异性强、敏感性高、省时、省力的EHEC检测方法。     

细菌rDNA指纹图分析方法的研究进展

本文介绍了ｒＤＮＡ指纹图的方法学研究的几个热点问题，以及该法在细菌分类鉴定、近缘菌株的鉴别和分子流行病学研究中的应用。     

HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验重组抗原的研究

目的构建、表达1型艾滋病病毒(HIV-1)重组蛋白,并尝试用于HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验。方法设计、合成1种HIV-1重组蛋白(编号HIV-Ag-R03)的核酸序列,将它与pET30a-trx载体骨架连接、构建重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白质。用重组蛋白包被酶标板,检测48份血浆样品(其中HIV-1抗体阳性、HIV阴性各24份),分析蛋白质的抗原性。将HIV-Ag-R03标记辣根过氧化物酶(HRP)后,取代BED捕获酶联免疫试验(BED CEIA)试剂盒中的BED肽及后续组分,比较2种方法检测18份HIV-1阳性样品的结果相关性。结果成功构建了HIV-Ag-R03的重组质粒,核酸序列确认无误。获得了包涵体表达的蛋白质,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析大小与预测值一致。使用包被HIV-Ag-R03的间接酶联免疫试验检测48份1∶101稀释血浆样品,结果HIV-1抗体阳性样品的吸光度(OD)值(1.513±0.991)显著高于HIV阴性样品的OD值(0.022±0.008),差异有统计学意义(t=7.336,P0.01)。用HIV-Ag-R03-HRP取代BED CEIA试剂盒中的BED肽及后续组分,调试HIV-Ag-R03-HRP的最佳稀释度为1∶2 500,18份HIV-1阳性样品的检测结果ODn值与BED CEIA的ODn值相关性好(r=0.939,P0.01)。结论获得了1种具有抗原性的重组蛋白并成功标记HRP,建立了检测HIV-1新发感染的新模式。     

检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法的重复性与稳定性评价

目的评价检测艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）新发感染的限制性抗原亲和力酶联免疫试验的重复性、稳定性和准确度,探讨该方法推广应用的可行性。方法采用检测精密度、孔间精密度、批间差、两实验员和两实验室之间结果的相关性,评价试剂的重复性;利用37℃热稳定性试验评价试剂的稳定性;使用国际标准盘评价试剂的准确度。结果检测精密度结果显示,所有样本标化吸光度值（ODn）的变异系数（CV）〈15%,两实验员和两实验室试验结果的相关系数R2值均〉0.99,孔间精密度CV值最小为3.76%,3个批次试剂的批间差结果显示,25份内控盘样本中,只有1份样本CV值〉15%,为22.5%。37℃放置7天与4℃保存的酶结合物和酶联板,对内控盘样本检测的ODn值没有明显区别。国际标准盘评判结果与预期值一致。结论检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法具有较好的稳定性、重复性和准确度,可以在实验室网络中推广应用。     

基于暗娼收集嫖客特征及其精液标本检测HIV

目前,国内已开展一些针对羁押场所、性病门诊为主的嫖客艾滋病调查,本研究采用通过暗娼收集嫖客信息,利用安全套收集嫖客精液标本进行HIV检测.     

第四代HIV抗原抗体酶联检测试剂缩短HIV检测窗口期的研究

目的比较几种国内市售第4代和第3代HIV检测试剂盒检测HIV早期感染的能力。方法使用8套BBI公司HIV阳转血清盘（PRB924、930、940、942、943、944、946、948）和2套国家艾滋病参比实验室HIV阳转血清盘（2004XJ1727、20505217），分别用1种HIV抗原检测试剂盒、2种第4代HIV检测试剂盒和4种第3代HIV抗体检测试剂盒进行检测，分析它们对HIV早期感染的检出情况。结果在每套血清盘中，第4代试剂盒都比第3代试剂盒较早检出HIV感染，窗口期平均提前4～8d，但与抗原检测试剂盒相比要滞后2～4d。不同品牌试剂盒的检测能力有别。结论第4代HIV试剂盒可以缩短HIV检测的窗口期，对于诊断早期感染、保证血液安全等具有一定意义。     

致病性耶尔森菌毒力因子YopM的研究进展

YopM蛋白是致病性耶尔森菌的毒力因子之一，本文介绍了其结构、定位及功能等方面的研究进展。YopM蛋白是一个亮氨酸丰富区(LRR)蛋白质家族的成员，其晶体结构提示它可作为蛋白质骨架与其他蛋白质相互作用。早期研究认为YopM可结合α-凝血酶，抑制凝血酶引起的血小板聚集。后来发现YopM—CyaA融合蛋白可通过Ⅲ型分泌系统定向进入真核细胞。免疫荧光定位显示YopM不但可进入宿主细胞质，而且通过小泡相关通路进入细胞核。在哺乳动物细胞内，YopM与2种靶物质PRK2和RSK1形成一种新的蛋白复合体，并激活PRK2和RSK1的激酶活性。YopM在耶尔森菌感染中的功能和致病机制有待进一步研究。     

用试纸检测艾滋病？

截至2011年底,我国估计共存活艾滋病病毒（简称HIV）感染者和艾滋病病人约78万人,其中已发现的有34．6万,余下的43．4万（占总数的55．6％）还没有被发现。大量HIV感染者和艾滋病病人不知道自己的感染状态,不但延误治疗,而且也容易在不知不觉中传染给别人。因此,加强艾滋病检测工作是防治艾滋病的有效措施之一。