以聚乙烯亚胺为骨架的非病毒基因载体的构建及其转染大鼠肝细胞的研究

目的 构建交联聚乙烯亚胺（Polyethylenemine,PEI）衍生物PEI-Bu,研究其对大鼠肝细胞系BRL-3A的细胞毒性和转染效率.方法 以PEI 800Da为骨架,1,4-丁二醇二氯甲酸酯为连接剂制备聚合物PEI-Bu,用凝胶渗透色谱法（GPC）测定分子量,动态光散射法（DLS）测定PEI-Bu/pDNA复合物的粒径和Zeta电位,琼脂糖凝胶电泳考察其复合质粒DNA的能力.MTT法榆测PEI-Bu对BRL-3A的细胞毒性,以荧光素酶质粒作为报告基因,测定PEI-Bu/pDNA复合物在BRL-3A细胞中的转染效率.结果 GPC 测定分子量为Mw4289Da,多分散指数1.31,复合物的粒径为138-16lnm,Zeta电位为2.4-4.3mV,凝胶电泳表明在质量比大于1时 PEI-Bu 具有复合DNA的能力,在同一浓度下PEI-Bu的细胞的毒性小于PEI 25kDa （p〈0.01）,PEI-Bu/pDNA在质量比为5时达到最高转染效率,高于PEl25kDa （p〈0.01）.并与Lipofectamine2000 相当 （P〉0.05）.结论 PEI-Bu对BRL-3A 细胞是一种低细胞毒性、高转染效率的非病毒基因载体,在肝细胞基因治疗领域中具有潜在的应用前景.     

高血压合并动脉粥样硬化大鼠模型的建立

目的:建立一种简便、稳定、重复性好的高血压动脉粥样硬化病变大鼠模型.方法:健康雄性16周龄自发性高血压大鼠(SHR)24 只,经标准饲料适应性喂养2 周后随机均分为模型组和对照组.模型组:VitD3 70 万IU 灌胃3 d,继续高脂饲料喂养6 周;对照组:等量生理盐水灌胃3 d,继续标准饲料喂养6 周.实验前后测定尾动脉收缩压、血脂和血钙水平,同时光镜和电镜下观察血管组织形态学改变.结果:两组血压变化无统计学差异.模型组大鼠血脂、血钙水平显著升高,光镜和电镜下血管壁均可见泡沫样细胞和钙盐沉积等动脉硬化病变.对照组未见变化.结论:以大剂量VitD3灌胃,结合高脂饲料喂养SHR 是一种简单快速的高血压合并动脉粥样硬化大鼠模型的建立方法.     

血管紧张素原与动脉粥样硬化相关性的研究进展

动脉粥样硬化（atherosclerosis.AS）多见于中、老年人,是一种慢性进行性疾病,由其引发的冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的发病率和死亡率均超过其他疾病[1].研究表明,肾素-血管紧张索系统（renin angiotensin system,RAS）在AS发生发展过程中起着重要的作用[2],而血管紧张素原（angiotensinogen,AGT）作为RAS系统中的初始底物,直接控制着RAS系统活性的强弱.因此,AGT可能在AS的发生发展中起着关键的调控作用.本文就AGT与AS间的相关性作一综述.     

慢性束缚应激诱导自发性高血压大鼠出现抑郁焦虑样行为

目的 探讨自发性高血压大鼠（SHR）在慢性束缚应激（Chronic Restraint Stress,CRS）时抑郁焦虑样行为学改变. 方法 雄性SHR大鼠16只,随机分为对照组（CON,n=8）和慢性束缚应激组（CRS,n=8）.通过旷场试验（Open Field test,OFT）、强迫游泳实验（Forced Swimming test,FST）、高架十字迷宫试验（Elevated Plus Maze,EPM）评价其抑郁焦虑样行为,同时比较SHR血压变化及血清ACTH水平.结果 束缚4周后,与对照组相比,CRS组的SHR在OFT中直立次数及总位移均显著降低（P＜0.05）,FST中不动时间显著延长（P＜0.05）,EPM中开臂滞留时间百分比显著下降（P＜0.05）. 结论 慢性束缚应激可诱导SHR出现抑郁焦虑样行为.     

GPE-AGT shRNA纳米粒转染体系介导RNAi对SHR早期动脉粥样硬化病变的影响

目的 观察靶向AGT RNAi对高血压合并早期动脉粥样硬化病变的影响.方法 建立高血压合并动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠模型,尾静脉注射携带AGT shRNA GPE纳米复合物（shRNA）,每10天重复注射1次,连续9w,设SHR基础组（control）、空白对照组（blank）和阴性对照组（negative）.尾袖法测量大鼠尾动脉收缩压和心率.Real-time PCR检测肝脏AGT mRNA水平的表达,Western-blot法检测肝脏AGT蛋白水平的表达,ELISA法测定血AGT和AngⅡ的含量.HE染色及电镜观察大鼠颈动脉血管壁形态改变.全自动生化分析仪检测肝肾功能.结果 shRNA组肝脏AGTmRNA表达均较blank组、negative组下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,肝脏AGT蛋白表达结果与mRNA表达变化相一致（P＜0.05）,血清AGT、AngⅡ的含量减少（P＜0.05）.shRNA组第3天,尾动脉压下降约（27＆#177;4） mmHg,与治疗前比差异有统计学意义（P＜0.05）,3d后尾动脉压下降缓慢,降压作用持续8d左右,最大降压幅度达（31＆#177;4）mmHg,注射后第11天血压开始回升.其余三组尾动脉压无下降.治疗前后各组大鼠心率均无明显变化.shRNA组光镜及电镜显示动脉粥样硬化性病变明显减轻.各组肝肾功能结果差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 GPE-AGT shRNA纳米粒转染高血压合并AS病变大鼠模型后,平稳降压,改善了血管病变,从而延缓早期动脉粥样硬化病变的进展.     

建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较

目的 比较两种小鼠哮喘模型建立方法的优缺点。方法 30只BALB/c小鼠随机正常对照组、OVA组、OVA/RSV组分为3组：采用卵白蛋白和氢氧化铝混悬液致敏,予以卵白蛋白持续雾化以及RSV多次滴鼻激发分别建立OVA组及OVA/RSV组哮喘小鼠模型,对照组采用无菌注射用水致敏和雾化激发。末次激发24h后,测定肺功能,行支气管肺泡灌洗液中细胞分类计数,HE染色观察其肺组织病理改变。结果 各模型组与对照组相比较,均有明显的哮喘症状,病理学结果显示气道壁增厚明显,管腔可见狭窄,管壁及其周围大量炎性细胞浸润,而且OVA/RSV组小鼠肺组织病理损害较OVA组明显加重。增强呼气间歇（Penh）值OVA/RSV组小鼠较OVA组小鼠明显升高（P<0.05）,其支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数、单核细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞计数显著高于OVA组（P<0.05）。结论 通过OVA致敏并予以RSV诱导建立哮喘小鼠模型,是一种更好地模拟人类哮喘发病机制的建模方法。